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IOSE80細胞培養說明書

發(fa)布時間:2016-01-05瀏覽:3173次

一、名稱:IOSE80細(xi)胞

 

二、生長特性:     貼壁

 

三、細胞生長條件:

培(pei)養基(ji)             

90%          ;  DMEM

血(xue)清   

     10%原裝10099141 FBS

溫度              ;    

37

空氣條件(jian) 

5% CO2,,95% AIR

生(sheng)長(chang)代數

P4

凍(dong)存條件

培養基50%、血清40%、DMSO10%

 

四、組成:

組份

規格

細胞一瓶

T25

細胞培養與(yu)操(cao)作說明

1

 

 

 

 

 

五、細胞傳代培養(yang)方法(fa):

1、收到(dao)細胞,請(qing)查(cha)看瓶子是否(fou)有破裂(lie),培養基是否(fou)漏出,是否(fou)渾濁,如有請(qing)盡快。

2、收(shou)到細(xi)胞(bao),如(ru)(ru)包裝完好,請(qing)(qing)在顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)。,由于運輸過程中的問題,細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶中的貼壁(bi)(bi)(bi)細(xi)胞(bao)有(you)可能從瓶壁(bi)(bi)(bi)中脫落(luo)下(xia)來,顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察會出(chu)現細(xi)胞(bao)懸浮(fu)的情況,出(chu)現此狀態(tai)時,請(qing)(qing)不(bu)要(yao)打開(kai)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶,先(xian)不(bu)要(yao)把培(pei)養(yang)基吸出(chu)來。應立(li)即將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置于細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱(xiang)里靜止(zhi)3-5小(xiao)時左右(you),讓(rang)細(xi)胞(bao)先(xian)穩(wen)定(ding)下(xia),再于顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察,此時多數細(xi)胞(bao)會重(zhong)新貼附于瓶壁(bi)(bi)(bi)。如(ru)(ru)細(xi)胞(bao)仍不(bu)能貼壁(bi)(bi)(bi),請(qing)(qing)用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色法(fa)鑒(jian)定(ding)細(xi)胞(bao)活(huo)力,如(ru)(ru)臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色證實細(xi)胞(bao)活(huo)力正常請(qing)(qing)按(an)懸浮(fu)細(xi)胞(bao)的方法(fa)處理

3. 收到(dao)細(xi)胞(bao)時(shi)(shi)如無異(yi)常(chang)情況 ,請在顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)密度,如為貼壁細(xi)胞(bao),未(wei)超過(guo)80%匯合(he)度時(shi)(shi),用75%酒精(建(jian)議配(pei)置75%酒精的水也是滅菌(jun)超純水。噴灑(sa)整個瓶(ping)(ping)消(xiao)毒(du)后放到(dao)超菌(jun)臺內,嚴格無菌(jun)操作:然后打開蓋子,先用槍(qiang)頭(tou)把(ba)培養(yang)(yang)(yang)基吸出10ML左右,放在離心管里,然后瓶(ping)(ping)口過(guo)火,(嚴禁直接(jie)傾倒),這樣可(ke)以保證不污染(ran),再(zai)用10ML的移液管,將剩余(yu)的培養(yang)(yang)(yang)基全部吸出,放于離心管中,培養(yang)(yang)(yang)瓶(ping)(ping)中只剩余(yu)5-10ML左右培養(yang)(yang)(yang)液繼續(xu)培養(yang)(yang)(yang)就可(ke)以了):超過(guo)80%匯合(he)度時(shi)(shi),請按細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)(yang)條件(jian)傳代培養(yang)(yang)(yang)。

如(ru)為懸(xuan)浮細(xi)胞,吸(xi)出(chu)培(pei)養(yang)液,1000轉/分鐘離心3-5分鐘,吸(xi)出(chu)上清(qing),管(guan)底細(xi)胞用新(xin)鮮培(pei)養(yang)基懸(xuan)浮細(xi)胞后移回培(pei)養(yang)瓶。

4,將培養(yang)(yang)瓶(ping)置(zhi)于37℃培養(yang)(yang)箱(xiang)中培養(yang)(yang),蓋子(zi)(zi)微微擰松(song)。吸出的(de)培養(yang)(yang)基(ji)(ji)可以保存在滅(mie)菌(jun)過的(de)瓶(ping)子(zi)(zi)里,存放于4℃冰箱(xiang),以備不時(shi)之(zhi)需。第二天(tian)換(huan)液(ye)時(shi),要配制(zhi)新鮮的(de)培養(yang)(yang)基(ji)(ji)和進(jin)口胎牛血(xue)清。這樣(yang)對細胞生長更好。不要再(zai)用我們原瓶(ping)的(de)培養(yang)(yang)基(ji)(ji)了(le)。

5 、24小時后,細(xi)(xi)(xi)胞(bao)形態已恢復并貼滿瓶(ping)(ping)壁(bi),就可以(yi)傳代了。(貼壁(bi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao))將培養瓶(ping)(ping)里(li)的培養基倒(dao)去(qu),加(jia)3-5ml(以(yi)能覆蓋(gai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)生長面為(wei)準(zhun))PBS或Hanks’液洗滌(di)后棄去(qu)。加(jia)0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消(xiao)化,消(xiao)化時間以(yi)具體(ti)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)為(wei)準(zhun),一(yi)(yi)般(ban)1-3分(fen)(fen)鐘(zhong)(zhong),不超過(guo)5分(fen)(fen)鐘(zhong)(zhong)。可以(yi)放(fang)入(ru)37℃培養箱消(xiao)化。輕輕晃動瓶(ping)(ping)壁(bi),見細(xi)(xi)(xi)胞(bao)脫落下來(lai),加(jia)入(ru)3-5ml培養基終止消(xiao)化。用(yong)移液管(guan)輕輕吹(chui)打瓶(ping)(ping)壁(bi)上的細(xi)(xi)(xi)胞(bao),使之(zhi)*脫落,然后將溶液吸入(ru)離(li)(li)心(xin)管(guan)內離(li)(li)心(xin),1000rpm/5min。棄上清,視細(xi)(xi)(xi)胞(bao)數量決(jue)定分(fen)(fen)瓶(ping)(ping)數,一(yi)(yi)般(ban)一(yi)(yi)傳二,如(ru)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)量多可一(yi)(yi)傳三(san),有些細(xi)(xi)(xi)胞(bao)不易傳得過(guo)稀,有些生長較快(kuai)的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)則(ze)可以(yi)多傳幾瓶(ping)(ping),以(yi)具體(ti)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)和經(jing)驗(yan)為(wei)準(zhun)。(懸浮(fu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao))用(yong)移液管(guan)輕輕吹(chui)打瓶(ping)(ping)壁(bi),直接將溶液吸入(ru)離(li)(li)心(xin)管(guan)離(li)(li)心(xin)即(ji)可。

6,貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴格無菌操作。換(huan)液(ye)時,換(huan)新的細胞培養瓶和(he)換(huan)新鮮(xian)的培養液(ye)和(he)進口胎牛血清(qing),37度    5%CO2 培養

7.  收(shou)到(dao)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)后,請鏡下觀察(cha)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao),用恰(qia)當方式處理(li)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。若(ruo)懸浮的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)較多,請離心收(shou)集細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao),接種到(dao)一個新的培(pei)養(yang)瓶中。棄掉原液,使(shi)用新鮮配(pei)制的培(pei)養(yang)基,使(shi)用進口胎牛血(xue)清. 剛(gang)接到(dao)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao),若(ruo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)不多時 血(xue)清濃度(du)可以(yi)加到(dao)15%去培(pei)養(yang)。若(ruo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)迏到(dao)80%左右 ,血(xue)清濃度(du)還是在10%。

特別注意:(如使用公共(gong)實(shi)驗室或初次接觸細胞培養(yang),建(jian)議添加雙抗(kang)培養(yang))

  1. 收到細胞后請(qing)(qing)盡快(kuai)更(geng)換為含15%血(xue)(xue)清的新鮮培(pei)養基(ji),如因特殊情況需要繼續使用原(yuan)(yuan)瓶(ping)培(pei)養基(ji),請(qing)(qing)在原(yuan)(yuan)瓶(ping)培(pei)養基(ji)中額外(wai)添加(jia)10%的血(xue)(xue)清(原(yuan)(yuan)瓶(ping)培(pei)養基(ji)的繼續使用時間zui長(chang)不宜超過72小時)
  2. 貼壁細胞收(shou)到(dao)當天切忌立刻消(xiao)化,請將細胞換液(ye)后放置(zhi)培養(yang)箱孵育隔夜到(dao)第二天再做消(xiao)化傳代,請優先選擇直(zhi)徑6cm的(de)培養(yang)皿進行傳代培養(yang)
  3. 如簽收時出(chu)現培養瓶壁破(po)裂,漏液等情況(kuang)請及時做好照片(pian)記(ji)錄并。
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