細胞名稱

種屬

人

組織來源

卵(luan)巢

生長狀(zhuang)態

貼壁生(sheng)長

細(xi)胞形態

上皮樣(yang)

培養條件

培養基類型：RPMI1640（Hyclone SH30809.01B)培養基

FBS（SERANA S-FBS-SA-015): 10%

抗生素：雙抗

培養(yang)條件：37℃，CO2: 5%

傳代方(fang)法

收到細(xi)(xi)胞(bao)(bao)后(hou)，在倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長(chang)狀(zhuang)態：

如(ru)果(guo)沒(mei)長(chang)滿，將培(pei)養瓶用(yong)75%酒精消毒(du)后在超凈(jing)臺內更換新鮮培(pei)養液，繼續培(pei)養。

如果細胞已經(jing)長(chang)滿(man)（約80%-90%）則(ze)傳代后繼續培養。

貼(tie)壁細胞傳代方法：

1 棄去培(pei)養基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2 加1ml 0.25%的(de)胰酶（含0.02%EDTA），讓(rang)胰酶與大(da)部分細(xi)胞(bao)接觸(chu)后放入37℃培(pei)養箱內，隨時觀察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態變化，待(dai)細(xi)胞(bao)大(da)部分變圓后加*培(pei)養基終止消化。

懸浮(fu)細胞傳代(dai)方(fang)法：可以直接傳代(dai)也(ye)可以離(li)心法傳代(dai)。

1 直接(jie)傳(chuan)代是讓懸(xuan)浮細胞(bao)慢慢沉(chen)淀在瓶底后(hou)，將上清(qing)吸掉(diao)1/2-2/3，吹打細胞(bao)形成(cheng)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)后(hou)，分別(bie)接(jie)種到其他(ta)培養皿(min)或培養瓶中繼續培養。

2離心法傳(chuan)代是將細胞連同培(pei)養液(ye)一并轉移到(dao)(dao)離心管(guan)內， 1000rpm，5分(fen)鐘，去除上清，加新的培(pei)養液(ye)到(dao)(dao)離心管(guan)內，吹打細胞形成(cheng)細胞懸(xuan)液(ye)后(hou)，分(fen)別接種到(dao)(dao)其(qi)他培(pei)養皿(min)或培(pei)養瓶中(zhong)繼續培(pei)養。

 一(yi)般沒有特殊說明，細胞一(yi)般是一(yi)傳二(er)。

凍存方法

70% *培養基，20%FBS，10%DMSO，現用現配。

儲存(cun)：液氮中長期保(bao)存(cun)。

注

1 觀察細胞在低倍鏡(jing)下(xia)觀察，便于整(zheng)體估(gu)計細胞密度。

2 在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發生部分脫(tuo)落，可離(li)心吹(chui)打后重新種入瓶(ping)中培養。

3 收到細(xi)(xi)胞后若發現培養(yang)瓶破損、細(xi)(xi)胞污染等，請拍(pai)照并(bing)在三天內與我們。