3T3-L1細胞 @慧(hui)穎細胞庫 培養注意(yi)事(shi)項

有的老師在培養中，發現都粘附著長在一起，平常狀態下看起來也會像長滿融合了一樣。慧穎技術人員對此總結了下3T3-L1細胞傳代步驟以及培養注意事項，僅供各位老師參考：

傳代步(bu)驟(zou)：

以(yi)用10 cm細胞培(pei)養皿培(pei)養的3T3-L1細胞為例：

    1）待培養(yang)皿中的細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)密(mi)度(du)為95-100%時，棄(qi)細(xi)胞培養(yang)基，并(bing)加入(ru)5ml 1×PBS輕(qing)晃洗滌一次；

  2）棄1×PBS，加入1ml胰酶，搖勻(yun)使所有的(de)細胞均被(bei)胰酶覆(fu)蓋后37℃消(xiao)化1~2min，顯微鏡下(xia)觀察(cha)到細胞變圓并從平皿上脫落下(xia)來即為消(xiao)化*；

  3）加入3ml新鮮(xian)的DMEM培養基（含(han)10%FBS，1%雙抗），終止胰酶消化，并將形(xing)成的細胞懸液吹(chui)打混勻(yun)；

  4）按實驗需要取細胞懸液接種到新的10 cm細胞培養皿(min)內，并用DMEM培養基補足體積至10ml，按十字形的方式(shi)搖勻后，置于CO2培養箱37℃條件下繼續培養。

注意事項：

1）不要對細胞進行(xing)頻繁的傳(chuan)代處理，傳(chuan)代時，細胞密度已生(sheng)長至85%以上；

  2）3T3-L1貼壁不是(shi)十分牢，禁止培(pei)養(yang)過程中頻繁地移動；

  3）消(xiao)化(hua)時(shi)間不要(yao)超過(guo)(guo)(guo)兩(liang)分鐘，不要(yao)消(xiao)化(hua)過(guo)(guo)(guo)頭，消(xiao)化(hua)過(guo)(guo)(guo)程中，可(ke)(ke)以(yi)在顯微鏡下(xia)觀察，細胞變(bian)圓后，輕(qing)拍培(pei)養皿，如(ru)細胞可(ke)(ke)以(yi)呈(cheng)流沙狀流動，即可(ke)(ke)立即終止消(xiao)化(hua)；

  4）終(zhong)止消化(hua)后(hou)，細胞輕(qing)輕(qing)吹(chui)(chui)打10~20次即可，不要太(tai)用力吹(chui)(chui)打或者吹(chui)(chui)打太(tai)多次，盡(jin)量(liang)減少機械傷害。

5）傳代(dai)時接種的細胞量不要太(tai)少，否則(ze)容易生長緩慢(man)或者長不動，傳代(dai)比例1:3~1:8。

6）如細(xi)胞狀態還是(shi)比較(jiao)差，可嘗試在細(xi)胞培養基(ji)中(zhong)加入適(shi)量的(de)丙(bing)銅酸(suan)鈉或谷氨酰胺（如1%）。

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