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在正常細胞(bao)(bao)(bao)中,磷(lin)(lin)脂酰絲氨(an)酸(suan)只分布在細胞(bao)(bao)(bao)膜(mo)脂質雙(shuang)層(ceng)的(de)(de)內側(ce)(ce),細胞(bao)(bao)(bao)發生凋(diao)(diao)亡(wang)早期(qi),膜(mo)磷(lin)(lin)脂酰絲氨(an)酸(suan)(PS)由脂膜(mo)內側(ce)(ce)翻向(xiang)外(wai)(wai)側(ce)(ce)。Annexin V是一種磷(lin)(lin)脂結合蛋白,與磷(lin)(lin)脂酰絲氨(an)酸(suan)有高度親和力,故可通過細胞(bao)(bao)(bao)外(wai)(wai)側(ce)(ce)暴(bao)露(lu)的(de)(de)磷(lin)(lin)脂酰絲氨(an)酸(suan)與凋(diao)(diao)亡(wang)早期(qi)細胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)胞(bao)(bao)(bao)膜(mo)結合。因此Annexin V被作(zuo)為檢測(ce)細胞(bao)(bao)(bao)早期(qi)凋(diao)(diao)亡(wang)的(de)(de)靈(ling)敏(min)指標之一。在細胞(bao)(bao)(bao)發生凋(diao)(diao)亡(wang)時,膜(mo)磷(lin)(lin)脂酰絲氨(an)酸(suan)外(wai)(wai)翻的(de)(de)發生早于細胞(bao)(bao)(bao)核(he)的(de)(de)變化,而此時Propidium Iodide(PI)不能通過細胞(bao)(bao)(bao)膜(mo)。
細(xi)(xi)胞(bao)壞死(si)時,雖然也會發生磷脂(zhi)酰絲氨酸(suan)(suan)外翻(fan),但此時細(xi)(xi)胞(bao)膜的(de)通透性明顯增加,PI等核酸(suan)(suan)染料進入細(xi)(xi)胞(bao)與(yu)(yu)細(xi)(xi)胞(bao)核中的(de)核酸(suan)(suan)結(jie)合(he),發出紅色(se)熒光(guang)。所以Annexin V-FITC(綠(lv)色(se)熒光(guang))常與(yu)(yu)鑒定細(xi)(xi)胞(bao)死(si)活的(de)核酸(suan)(suan)染料(如PI)合(he)并使用,來區分凋亡(wang)細(xi)(xi)胞(bao)與(yu)(yu)死(si)亡(wang)細(xi)(xi)胞(bao)。
技術原理及步驟
1. 離心收集細胞,微量離心機轉速1000 rpm,離心時間5 min,棄培養(yang)基。
2. 用冷PBS洗滌細(xi)胞兩次。
3. 用400 μL1× Binding Buffer懸浮細胞,濃度(du)大約為1×106 cells/mL。
4. 在細胞懸浮液中加(jia)入5 μlLAnnexin V-FITC,輕輕混勻后于(yu)2~8°C避光條件下孵育15min。
5. 加(jia)入10 μL PI后輕輕混勻于2~8°C避光條(tiao)件下孵育5 min。
6. 在1小時內用(yong)流式(shi)細胞儀或(huo)熒光顯(xian)微鏡檢測。
應用實例
應用領域
細胞的早期(qi)凋亡(wang)及區分凋亡(wang)與(yu)壞死細胞
服務周期
我公司在正式接受實驗(yan)(yan)委托2個星期左(zuo)右(you)完成實驗(yan)(yan)并提供實驗(yan)(yan)報告。
客戶須(xu)知(對材(cai)料的要求、注(zhu)意事項)
需提供細胞類型(xing),處理條件。
慧穎生(sheng)物專業血(xue)清(qing)10年,我們(men)不生(sheng)產血(xue)清(qing),我們(men)只是高品質動物血(xue)清(qing)的搬運工
血(xue)清(qing)是一種(zhong)成分復(fu)雜(za)的(de)(de)混合物,不同批次血(xue)清(qing)對細胞(bao)生長的(de)(de)促進作用不同。大規模(mo)細胞(bao)培(pei)養中由血(xue)清(qing)引起的(de)(de)細胞(bao)生長狀(zhuang)態不佳及病(bing)毒滴度(du)的(de)(de)影(ying)響表(biao)現在以下幾個方面:
1、細胞(bao)生長(chang)速度緩慢,長(chang)滿單(dan)層時間(jian)長(chang);從同一細胞(bao)瓶(ping)中分出(chu)兩瓶(ping)細胞(bao),用同一種培養液,分別加入10%的對(dui)照血(xue)清和待檢血(xue)清,在相同條件(jian)下培養72小時,會出(chu)現(xian)對(dui)照血(xue)清長(chang)滿單(dan)層,而待檢血(xue)清大約只(zhi)有60~70%,這種血(xue)清就不適(shi)合(he)用來大規模培養細胞(bao)。
2、細胞(bao)傳代(dai)后形(xing)態不正(zheng)常(chang),細胞(bao)狀態發生(sheng)(sheng)變(bian)化(hua) ;由于血清(qing)的(de)(de)質量問題,使原本狀態正(zheng)常(chang)的(de)(de)細胞(bao)經傳代(dai)后形(xing)態會(hui)變(bian)差;比如:細胞(bao)瓶里會(hui)出現一(yi)些蠕動(dong)的(de)(de)小黑點(并非污(wu)染),或者細胞(bao)表面(mian)形(xing)成一(yi)層(ceng)油狀覆蓋(gai)物;細胞(bao)的(de)(de)輪廓變(bian)得模(mo)糊,細胞(bao)之間(jian)的(de)(de)間(jian)隙被血清(qing)中的(de)(de)蛋白顆粒填充,從而影響(xiang)細胞(bao)向四周(zhou)擴展(zhan)生(sheng)(sheng)長。
3、細(xi)胞(bao)(bao)傳(chuan)幾(ji)代(dai)后就出現(xian)脫壁(bi)(bi)現(xian)象,不能(neng)連續傳(chuan)代(dai) ;質量較差的(de)血清缺乏某種細(xi)胞(bao)(bao)的(de)貼(tie)壁(bi)(bi)因子,會(hui)使(shi)細(xi)胞(bao)(bao)在傳(chuan)代(dai)過程中逐漸(jian)喪失貼(tie)壁(bi)(bi)的(de)能(neng)力。細(xi)胞(bao)(bao)會(hui)從(cong)正常的(de)貼(tie)壁(bi)(bi)狀態,邊緣開始(shi)萎(wei)縮,上翹(qiao)。觀察到的(de)現(xian)象就是細(xi)胞(bao)(bao)表(biao)面不光滑(hua),晃動(dong)細(xi)胞(bao)(bao)瓶會(hui)看到細(xi)胞(bao)(bao)表(biao)面有絮狀物隨培養(yang)液波動(dong)。隨著傳(chuan)代(dai)次(ci)數(shu)增(zeng)加,細(xi)胞(bao)(bao)萎(wei)縮的(de)情況越來越嚴重,直到zui終*脫壁(bi)(bi)而死亡。
4、細胞(bao)(bao)長的(de)很(hen)好,致密的(de)單層,狀態也很(hen)正(zheng)常(chang),但是(shi)接(jie)毒后細胞(bao)(bao)基本不(bu)發生病變,做滴度檢測幾乎測不(bu)出抗(kang)原滴度。這(zhe)種情(qing)況也許是(shi)因為血清中含有(you)與接(jie)種的(de)病毒有(you)同源(yuan)的(de)特異性抗(kang)體(ti)。比如(ru)血清中經(jing)常(chang)會存(cun)在(zai)乙(yi)腦抗(kang)體(ti),牛腹瀉病毒抗(kang)體(ti)等,如(ru)果存(cun)在(zai)這(zhe)些抗(kang)體(ti),就會把接(jie)進(jin)去的(de)病毒給中和掉。如(ru)果抗(kang)體(ti)滴度很(hen)高,病毒會被抗(kang)體(ti)*中和,就沒有(you)病毒顆粒在(zai)細胞(bao)(bao)中增殖,所以會檢測不(bu)到(dao)(dao)病毒滴度。這(zhe)種情(qing)況給疫(yi)苗企(qi)業造成(cheng)的(de)損失是(shi)相當大的(de),不(bu)產毒等于前(qian)面(mian)所做的(de)那么(me)多工作(zuo)全部白費,浪(lang)費人力、物力,尤其是(shi)時間上的(de)浪(lang)費,從培養細胞(bao)(bao)開始到(dao)(dao)接(jie)病毒,到(dao)(dao)收液至少需(xu)要一兩(liang)個(ge)月,一旦出現不(bu)產毒的(de)情(qing)況,那么(me)這(zhe)一兩(liang)月時間就白白浪(lang)費掉了,這(zhe)也是(shi)牛血清給疫(yi)苗企(qi)業造成(cheng)的(de)風險之一。
5、細胞生長(chang)(chang)的(de)(de)狀態一般,產毒少,毒價低。這(zhe)種(zhong)情況(kuang)比較常見,細胞是病毒的(de)(de)載體(ti),由于血清質量(liang)不(bu)(bu)好,導致細胞生長(chang)(chang)狀態不(bu)(bu)好,病毒就無法進行正常的(de)(de)復(fu)(fu)制。并非所(suo)有病毒都不(bu)(bu)能(neng)復(fu)(fu)制,所(suo)以就造成疫苗的(de)(de)效價不(bu)(bu)夠,可(ke)能(neng)造成不(bu)(bu)合格產品。
看來一(yi)款血清直接(jie)關(guan)系(xi)細(xi)胞的(de)生死存亡,不用擔心,慧穎提供無支(zhi)原體,低內毒(du)素和低血紅素的(de),無反復凍融的(de)高品質血清
產品名(ming)稱 貨(huo)號(hao) 來源 規(gui)格 市場價格
產品名稱(cheng) 貨號 來源 規格 市場價格
胎(tai)牛血清FBS Sv30087.01 SOUTH AMERICA 100ML 800
胎牛(niu)血清FBS SOUTH AMERICA 500ML 1800
優等胎牛血(xue)清(qing)FBS SH30084.03 AUSTRALIA 500ML 5800
優等胎牛血清FBS SH30084.03 AUSTRALIA 500ML 5800
優(you)等胎牛血清FBS SH30084.03 AUSTRALIA 500ML 5800
特級胎(tai)牛(niu)血清FBS SH30396.03 Canada 500ML 3900
特(te)級(ji)胎牛血清FBS SH30396.03 Canada 500ML 3900
特(te)級胎牛血清FBS SH30070.03 USA 500ML 3900
特級(ji)胎牛血清FBS SH30070.03 USA 500ML 3900
特(te)級胎牛(niu)血清FBS SH30070.03E USA 500ML 5600
特級胎(tai)牛血清FBS SH30070.03E USA 500ML 5600
標準(zhun)胎牛血清(qing)FBS SH30370.03 AUSTRALIA 500ML 2800
標準胎牛血清FBS SH30370.03 AUSTRALIA 500ML 2800
活性炭/葡聚(ju)糖(tang)處理胎牛(niu)血清Charcoal Stripped FBS SH30068.03 USA 500ML 6000
活性(xing)炭/葡聚糖處理胎(tai)牛(niu)血清,熱滅活,Charcoal Stripped FBS SH30068.03HI USA 500ML 6000
新生牛血清New born calf serum SH30406.01 New Zealand 500ML 1300
馬(ma)血清(qing)Horse Serum SH30074.03 USA 500ML 980
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