超低IgG胎牛血清Ultra-low IgG FBS·;透(tou)析胎牛血清Dialyzed FBS·活性(xing)炭/葡(pu)聚糖處理胎牛血清Charcoal Stripped FBS

一(yi)、牛(niu)血(xue)清質量(liang)檢定指標

1、化學(xue)檢(jian)定(ding)：包括滲透壓（240～340）、pH（7.0～8.0）、總(zong)蛋(dan)(dan)白含量（3.5～5.0％）、血紅蛋(dan)(dan)白 （≤0.02％）

2、 微生(sheng)物(wu)檢查：細(xi)菌和真菌——直接培(pei)養(yang)法(fa)(fa)(fa)、噬(shi)菌體——噬(shi)斑(ban)法(fa)(fa)(fa)和增殖法(fa)(fa)(fa) 支原(yuan)體——培(pei)養(yang)法(fa)(fa)(fa)和DNA染(ran)色法(fa)(fa)(fa) 、牛病毒(du)——細(xi)胞培(pei)養(yang)法(fa)(fa)(fa)。要求(qiu)均為陰性

3、內毒素(su)檢測——凝膠(jiao)法和(he)動態濁度法 要求(qiu)內毒素(su)含量≤10EU/ml

4、促細胞(bao)生長測(ce)定（SP2/0-Ag14標(biao)準(zhun)規定）

1）zui大增(zeng)殖濃度≥1.0×106個/ml、倍增(zeng)時間≤20小(xiao)時

克隆率＝（陽性孔平均數(shu)/培養孔總數(shu)）×100％

2）貼(tie)壁(bi)效率（ VERO細胞、二倍(bei)體細胞等）

10％血清(qing)――50或100個細胞/孔

貼壁(bi)效率（％）＝（每孔克(ke)隆平(ping)(ping)均(jun)數(shu)/每孔存活的培養細胞平(ping)(ping)均(jun)數(shu)）×100

相對貼(tie)壁(bi)(bi)(bi)效(xiao)(xiao)率＝被測血(xue)清(qing)貼(tie)壁(bi)(bi)(bi)效(xiao)(xiao)率/參(can)考血(xue)清(qing)貼(tie)壁(bi)(bi)(bi)效(xiao)(xiao)

以上項目檢定(ding)結(jie)果應符(fu)合2005版《中國(guo)藥典》第三部的相關規定(ding)。血清廠(chang)家應在(zai)此基(ji)礎(chu)上結(jie)合疫苗(miao)(miao)病(bing)毒生產工(gong)藝建立(li)企(qi)業內(nei)控(kong)檢定(ding)項目并建立(li)相應的檢定(ding)方法，保證疫苗(miao)(miao)病(bing)毒生產的穩(wen)定(ding)性，提高疫苗(miao)(miao)制品(pin)的質量。

二、牛血清的分類

根據牛出生(sheng)時(shi)間和血清采制分(fen)離方法分(fen)為(wei)：

1、胎(tai)牛(niu)血(xue)清：八月齡胎(tai)牛(niu)心臟穿刺取(qu)血(xue)；

2、新生(sheng)牛血(xue)清：出(chu)生(sheng)12～24小時新生(sheng)牛靜脈采(cai)血(xue)；

新生牛血(xue)清：采血(xue)后靜置自然析出(chu)的(de)血(xue)清；

標(biao)準(zhun)新生牛血清(qing)：經離心分離的血清(qing)；

普通新生牛血(xue)清(qing)：融(rong)血(xue)或微融(rong)血(xue)的血(xue)清(qing)；

3、小牛(niu)血(xue)清：出生三月齡小牛(niu)動(dong)脈采血(xue)分離(li)血(xue)清；

三、牛血(xue)清在細胞培養(yang)基(ji)中的主要功能

牛血清是細胞(bao)培(pei)養(yang)中用量zui大的天然培(pei)養(yang)基，含有豐富的細胞(bao)生(sheng)長必須的營養(yang)成份，具有極為重要的功(gong)能。

1、提供能促(cu)使細胞(bao)指(zhi)數生長的激素、基(ji)礎培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)沒(mei)有或含量微(wei)小的營(ying)養(yang)物，以及某些低分(fen)子營(ying)養(yang)物質；

2、提供結合蛋白(bai)，識別維生素(su)、脂(zhi)類、金(jin)屬離子，并(bing)與有(you)毒金(jin)屬和熱(re)源物質結合，起解毒作用；

3、是細胞(bao)貼壁、鋪展生(sheng)長所(suo)需因子的來源；

4、起酸堿度緩沖液作用；

5、提供蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑(yi)制劑，細胞(bao)傳(chuan)代時(shi)使剩余胰蛋(dan)白(bai)酶(mei)失(shi)活，保護(hu)細胞(bao)不受損傷。

四、牛血(xue)清的質(zhi)量要求

一(yi)）WHO公布(bu)的《用動物細胞體(ti)外培養生產生物制品規程》中的要求

1. 牛(niu)血(xue)清(qing)必(bi)須來自有文件證明無牛(niu)海綿狀腦病的牛(niu)群或國家，并應具備(bei)適(shi)當的監測系統(tong)。

2.有些國家還(huan)要(yao)求牛(niu)血清來自沒有用過反芻動物蛋(dan)白飼料(liao)喂(wei)養的牛(niu)群。

3.要(yao)能證明所(suo)用牛血清中不含對所(suo)生產(chan)疫苗病毒的抑制物。

4.血清要通過(guo)濾(lv)膜過(guo)濾(lv)除菌，保(bao)證無菌。

5.無細(xi)菌(jun)、霉(mei)菌(jun)、支原體和病(bing)毒的污染，有些(xie)國(guo)家要求無大腸桿菌(jun)噬菌(jun)體污染。

6.要求血清對細胞(bao)有良好的支(zhi)持繁殖作用。

（二(er)）我國(guo)在(zai)對(dui)牛(niu)(niu)血清的質(zhi)量標準(zhun)zui早在(zai)2000年版《中國(guo)生物制(zhi)品(pin)主要(yao)原輔(fu)材料質(zhi)控標準(zhun)》中提(ti)出。包括(kuo)物理性狀(zhuang)、總蛋白，血紅蛋白、細(xi)菌(jun)(jun)、真(zhen)菌(jun)(jun)、支原體、牛(niu)(niu)病毒、大腸桿菌(jun)(jun)噬菌(jun)(jun)體、細(xi)菌(jun)(jun)內毒素，支持(chi)細(xi)胞增殖檢查(cha)。2005版藥典頒布之后，小牛(niu)(niu)血清質(zhi)量標準(zhun)被納(na)入(ru)《中國(guo)藥典》2005年版 第三部 生物制(zhi)品(pin)分(fen)冊。

（三）美(mei)國對牛血清的質量要求：

Gibco 和Hyclone等美(mei)國主要血清(qing)(qing)供應商的(de)牛血清(qing)(qing)都(dou)已進入到我國市場，他(ta)們對血清(qing)(qing)質量(liang)標準有嚴(yan)格要求(qiu)，從(cong)血清(qing)(qing)來(lai)源到產(chan)品質量(liang)都(dou)有明確規定(ding)。

1、血清(qing)(qing)來源(yuan) ：可(ke)從(cong)世界各地收集胎牛(niu)血清(qing)(qing)，但必須符合其(qi)質(zhi)量(liang)標準和美國農業部進口要求(qiu)。

2、血清的收集：必(bi)須符合工業生(sheng)產的標準，低(di)溫采集，一次分離，分離后立即混合凍(dong)存。

3、血(xue)清的制備(bei)：超低IgG胎牛血(xue)清、透析血(xue)清、γ-射線輻照；

4、除菌(jun)過濾：0.22μm和0.1μm濾膜(mo)過濾；

5、成品分裝：根(gen)據(ju)需要分裝成不同(tong)規格。

五、牛血清的(de)使用所產生(sheng)的(de)常見(jian)問(wen)題

（一）由于血清營養豐(feng)富，貯存條件特殊，因此(ci)在(zai)貯存和使用(yong)過程中(zhong)容易產生以下問題：

1、改變培養液的pH值

牛血清的pH理論(lun)值(zhi)為7.0～8.0，培養(yang)基在(zai)加入規(gui)定量的碳(tan)酸(suan)氫鈉后（即(ji)達到細胞生(sheng)長(chang)所(suo)需(xu)要(yao)的滲透壓），再加入10％的牛血清，一(yi)般(ban)會使培養(yang)液的pH值(zhi)發生(sheng)改變。因此在(zai)使用(yong)過程(cheng)中應(ying)注(zhu)意pH的變化，如有必要(yao)可用(yong)1mol/L NaOH或1mol/L HCl調pH到所(suo)需(xu)值(zhi)。

2、由(you)于血清(qing)(qing)的營養(yang)成分(fen)豐富，非常適合細(xi)(xi)菌、真菌和支原(yuan)體(ti)等生長。國(guo)產血清(qing)(qing)大部分(fen)采用(yong)手工分(fen)裝(zhuang)，因(yin)此容(rong)易把微生物(wu)帶入(ru)而使得血清(qing)(qing)被污染。使用(yong)前如(ru)果沒(mei)有及時(shi)發(fa)現，將會把污染物(wu)帶入(ru)正在培養(yang)的細(xi)(xi)胞中，而使得細(xi)(xi)胞不能正常生長。

3、血(xue)(xue)清在(zai)貯存(cun)解凍(dong)過(guo)(guo)程中(zhong)會(hui)產生沉(chen)淀(dian)，這是由于血(xue)(xue)清中(zhong)含有(you)大量脂蛋白、纖(xian)維(wei)蛋白及(ji)多(duo)肽(tai)類物質(zhi)，在(zai)-15℃冷凍(dong)保存(cun)解凍(dong)后就(jiu)會(hui)自(zi)然(ran)形成沉(chen)淀(dian)，隨著保存(cun)時(shi)(shi)間的延長，沉(chen)淀(dian)量會(hui)增加(jia)。因(yin)此在(zai)融(rong)化(hua)血(xue)(xue)清時(shi)(shi)一般應先在(zai)4℃放置使(shi)(shi)之解凍(dong)，然(ran)后放在(zai)室溫(wen)使(shi)(shi)血(xue)(xue)清*融(rong)化(hua)，以(yi)避(bi)免沉(chen)淀(dian)的增加(jia)。添加(jia)血(xue)(xue)清時(shi)(shi)應避(bi)免把沉(chen)淀(dian)加(jia)入(ru)培(pei)(pei)養(yang)液(ye)，否則由于沉(chen)淀(dian)的存(cun)在(zai)會(hui)使(shi)(shi)得所(suo)培(pei)(pei)養(yang)的細胞產生大量黑點，或者細胞表面將(jiang)會(hui)覆蓋一層油狀物質(zhi)，影(ying)響(xiang)細胞的正常生長。為減少(shao)血(xue)(xue)清的損失，可(ke)以(yi)把有(you)沉(chen)淀(dian)的血(xue)(xue)清收集起來進行離心處理，將(jiang)上清液(ye)加(jia)入(ru)培(pei)(pei)養(yang)液(ye)使(shi)(shi)用(yong)（一般不(bu)建(jian)議(yi)采(cai)用(yong)過(guo)(guo)濾的方法除去沉(chen)淀(dian)，因(yin)為沉(chen)淀(dian)會(hui)堵塞濾膜而無法過(guo)(guo)濾）。

（二）大規模細(xi)(xi)胞培養中(zhong)牛血清(qing)對(dui)細(xi)(xi)胞及(ji)病毒滴度的影響

血清(qing)是一(yi)種成分復雜(za)的(de)混合(he)物，不(bu)同批次血清(qing)對細胞生長的(de)促進作用不(bu)同。大規模細胞培養(yang)中由血清(qing)引(yin)起的(de)細胞生長狀態不(bu)佳及病毒滴度(du)的(de)影響表現在以(yi)下幾個方面：

1、細(xi)(xi)胞生(sheng)長速度緩慢，長滿(man)單層時間長；從同一細(xi)(xi)胞瓶(ping)中(zhong)分出(chu)兩瓶(ping)細(xi)(xi)胞，用同一種培(pei)養(yang)(yang)液，分別(bie)加入10％的對照(zhao)血(xue)清(qing)和(he)待檢血(xue)清(qing)，在(zai)相(xiang)同條(tiao)件下培(pei)養(yang)(yang)72小時，會出(chu)現對照(zhao)血(xue)清(qing)長滿(man)單層，而待檢血(xue)清(qing)大約(yue)只(zhi)有(you)60～70％，這(zhe)種血(xue)清(qing)就不適合(he)用來大規模培(pei)養(yang)(yang)細(xi)(xi)胞。

2、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)傳(chuan)代(dai)后形態不正常(chang)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)狀態發生變化 ；由于血(xue)清的(de)質量(liang)問題，使原本狀態正常(chang)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)經傳(chuan)代(dai)后形態會(hui)變差；比如：細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)瓶里會(hui)出(chu)現一些蠕動的(de)小(xiao)黑點（并非污染），或者(zhe)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)表面形成一層油狀覆蓋物；細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)輪廓(kuo)變得(de)模糊，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)之間的(de)間隙被(bei)血(xue)清中的(de)蛋(dan)白顆粒(li)填(tian)充，從(cong)而影響細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)向四(si)周擴展(zhan)生長。

3、細胞(bao)(bao)傳幾代后就(jiu)出現(xian)脫壁現(xian)象(xiang)(xiang)，不能連(lian)續傳代 ；質量較差的(de)血清缺乏某(mou)種細胞(bao)(bao)的(de)貼壁因子，會(hui)(hui)使細胞(bao)(bao)在傳代過程中逐漸喪失貼壁的(de)能力(li)。細胞(bao)(bao)會(hui)(hui)從正常的(de)貼壁狀態，邊緣(yuan)開始萎縮，上翹。觀察(cha)到的(de)現(xian)象(xiang)(xiang)就(jiu)是細胞(bao)(bao)表(biao)面不光滑，晃動細胞(bao)(bao)瓶(ping)會(hui)(hui)看到細胞(bao)(bao)表(biao)面有絮狀物隨培(pei)養液(ye)波動。隨著傳代次數增加，細胞(bao)(bao)萎縮的(de)情(qing)況越來越嚴(yan)重，直到zui終*脫壁而死亡。

4、細胞(bao)長的(de)(de)(de)很(hen)(hen)好，致密的(de)(de)(de)單層，狀(zhuang)態也很(hen)(hen)正常(chang)，但是接毒(du)后(hou)細胞(bao)基本不(bu)發生病(bing)(bing)(bing)(bing)變，做滴(di)度檢(jian)測幾(ji)乎測不(bu)出(chu)(chu)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)滴(di)度。這(zhe)種情(qing)(qing)況也許是因為血(xue)清(qing)中含有與接種的(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)有同源的(de)(de)(de)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)。比如血(xue)清(qing)中經常(chang)會(hui)存在(zai)乙腦抗(kang)(kang)(kang)體(ti)，牛(niu)腹(fu)瀉病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)等，如果(guo)存在(zai)這(zhe)些抗(kang)(kang)(kang)體(ti)，就會(hui)把接進去的(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)給(gei)中和(he)掉(diao)。如果(guo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)滴(di)度很(hen)(hen)高，病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)會(hui)被抗(kang)(kang)(kang)體(ti)*中和(he)，就沒(mei)有病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)顆粒在(zai)細胞(bao)中增殖，所以(yi)會(hui)檢(jian)測不(bu)到病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)滴(di)度。這(zhe)種情(qing)(qing)況給(gei)疫苗企業造(zao)成的(de)(de)(de)損失是相當大的(de)(de)(de)，不(bu)產(chan)毒(du)等于前面所做的(de)(de)(de)那么多工作全部白(bai)費(fei)，浪費(fei)人力、物力，尤其是時間上的(de)(de)(de)浪費(fei)，從培養細胞(bao)開始到接病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)，到收液(ye)至少需(xu)要一(yi)兩個(ge)月(yue)，一(yi)旦出(chu)(chu)現(xian)不(bu)產(chan)毒(du)的(de)(de)(de)情(qing)(qing)況，那么這(zhe)一(yi)兩月(yue)時間就白(bai)白(bai)浪費(fei)掉(diao)了，這(zhe)也是牛(niu)血(xue)清(qing)給(gei)疫苗企業造(zao)成的(de)(de)(de)風險之(zhi)一(yi)。

5、細(xi)胞生(sheng)長的狀(zhuang)態一般，產毒少，毒價(jia)低。這種情(qing)況比較(jiao)常見，細(xi)胞是病(bing)毒的載體，由(you)于血清(qing)質量不(bu)好(hao)，導致細(xi)胞生(sheng)長狀(zhuang)態不(bu)好(hao)，病(bing)毒就(jiu)無法進(jin)行正常的復制(zhi)。并非所(suo)有(you)病(bing)毒都不(bu)能復制(zhi)，所(suo)以就(jiu)造(zao)(zao)成疫苗(miao)的效價(jia)不(bu)夠，可能造(zao)(zao)成不(bu)合格產品(pin)。

看來一(yi)款血(xue)清直接關(guan)系細胞的(de)生(sheng)死存亡，不用擔(dan)心，慧穎提供無支原體(ti)，低內(nei)毒素和(he)低血(xue)紅素的(de)，無反復凍融(rong)的(de)高品質(zhi)血(xue)清

慧(hui)穎專(zhuan)業血清(qing)(qing)10年(nian)，提供無(wu)支原(yuan)體、低內毒素、無(wu)反復凍(dong)融，清(qing)(qing)澈，清(qing)(qing)透，高品(pin)質進(jin)口血清(qing)(qing)

超(chao)低IgG胎(tai)牛(niu)血(xue)清Ultra-low IgG FBS·德國SERANA * 貨號(hao)：S-FBS-SA-055 血(xue)源：SOUTH AMERICA 規格：500ML 庫存10瓶 提供(gong)原廠(chang)COA報告

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