1.試劑和溶液(ye)

1）轉印緩沖(chong)液：0.025M Tris base , 0.187 M甘氨(an)酸 , 25%甲醇

2）氨基黑溶液(ye)：0.1% 酸(suan)性黑10B

3）1×TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20

4）封閉液：TBST配制的5%牛奶

5）抗體稀釋液：TBST配制的5%牛奶

6）顯(xian)色系統：ECL顯(xian)色

2.實驗步驟

1電泳(yong)：將裂解液進行SDS-PAGE電泳(yong)，80v，30分鐘，120v，90分鐘；

2轉膜(mo)：PVDF膜(mo)在甲(jia)醇中(zhong)浸(jin)泡約30秒左右，濾紙浸(jin)泡在轉印(yin)緩沖液預濕，半干法轉印(yin)到PVDF膜(mo)上，10v，150分鐘；

3染色：氨(an)基黑染色5分(fen)鐘，甲醇(chun)褪去背景色，觀察條帶；

4膜活化：將PVDF膜置于(yu)甲醇(chun)活化1min，用(yong)(yong)純水洗膜2次后再用(yong)(yong)TBST洗滌3次；

5封閉：將膜條置于5%牛奶(nai)或2% BSA中，室溫混搖2h；

6一抗(kang)孵(fu)育(yu)：將待(dai)檢抗(kang)體用3%牛奶(nai)或2% BSA稀釋(shi)到合適濃(nong)度(du)（參(can)照(zhao)抗(kang)體說(shuo)明書，根據客戶(hu)預(yu)實驗結果(guo)，稀釋(shi)度(du)上下浮動一個數量(liang)級都為正(zheng)常），將膜放入(ru)對應的(de)已稀釋(shi)待(dai)檢樣品中，置4℃混搖孵(fu)育(yu)隔夜；

7洗滌：取(qu)出膜放(fang)在TBST中洗滌3×5min；

8二抗孵育：將膜取(qu)出(chu)放入(ru)稀釋好(hao)的HRP標記的二抗（參照(zhao)二抗說明書進行稀釋）中，室(shi)溫混搖2h；

9洗滌：取(qu)出膜放(fang)在(zai)TBST中洗滌3×5min；

10ECL顯色：將膜(mo)(mo)取出(chu)放(fang)入混勻的ECL顯色液中，孵育3min，將膜(mo)(mo)取出(chu)貼在(zai)有(you)熒光角標(biao)的膠片上，迅速用保鮮膜(mo)(mo)包好；

11曝光(guang)：把底(di)片(pian)放在(zai)暗盒中，根據熒光(guang)強度分別對X光(guang)膠片(pian)作不同時間段的曝光(guang)，曝光(guang)結(jie)束(shu)后，將底(di)片(pian)取出(chu)，1min顯影(ying)，30s清洗(xi)，1min定(ding)影(ying)，30s清洗(xi)，晾干；

12結果(guo)分(fen)析：用(yong)掃描儀將曝(pu)光后的X光膠片(pian)掃描，做后續結果(guo)分(fen)析。

購(gou)買放心(xin)細(xi)胞(bao)株(zhu)細(xi)胞(bao)系，耐(nai)藥濃度(du)倍(bei)數高穩定耐(nai)藥株(zhu)，選擇慧穎生(sheng)物

慧穎生物(wu)提供(gong)腫瘤耐藥(yao)細胞株(zhu)的(de)建(jian)立(li)與服(fu)務。慧穎生物(wu)可(ke)以根據客戶要求(qiu)構建(jian)相應的(de)細胞系。腫瘤耐藥(yao)株(zhu)的(de)建(jian)立(li)和應用，能夠給(gei)予(yu)臨床(chuang)zui直接(jie)的(de)指導(dao)。

服務內容 價(jia)格 服務周(zhou)期

藥物濃度梯(ti)度遞(di)增(zeng)法建(jian)立耐藥細胞株 詢價6個月

大劑量(liang)間歇誘導(dao)法建(jian)立耐藥細胞株 詢價(jia)6個(ge)月

主(zhu)要提(ti)供一下耐(nai)藥細(xi)胞株的建立：

人乳腺(xian)癌阿(a)霉素耐藥細(xi)胞株

人乳腺癌紫杉醇耐藥(yao)株(zhu)

人(ren)肺腺(xian)癌紫杉醇(chun)耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人結腸癌長春新(xin)堿耐藥株

人口腔上皮(pi)癌長春新堿耐(nai)藥株

人結腸癌紫杉醇耐藥(yao)株

人結腸(chang)癌氟尿嘧啶耐藥株(zhu)

人卵(luan)巢(chao)癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉(mei)素(su)耐藥株

人卵巢(chao)癌紫杉(shan)醇耐藥株

人胃癌順鉑耐(nai)藥株

人白血病阿霉素耐(nai)藥株(zhu)

人乳(ru)腺癌阿霉素(su)耐藥細(xi)胞株

人(ren)結腸(chang)癌長(chang)春新堿(jian)耐(nai)藥株(zhu)

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人(ren)乳(ru)腺癌抗雌(ci)激素耐藥(yao)株(zhu)

人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

小鼠激(ji)素依賴性乳腺癌細胞

服務周期

1. 有現成的(de)細胞系：6個月(yue)，具體時間根據客戶(hu)的(de)要求以(yi)及樣本(ben)數(shu)而定；

2. 沒(mei)有已建成的細胞系，需要構(gou)建，公司(si)構(gou)建時間約為15個月左右。

公司熱賣(mai)耐藥株：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，H1975/培美曲塞細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，，Eca-109/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，SGC-7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT116/L-OHP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，LOVO/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，SGC7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，SGC7901/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，L1210/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)等(deng)。