1.試劑和溶(rong)液(ye)

乙(yi)醇: 無水乙(yi)醇，95%乙(yi)醇，85%乙(yi)醇，70%乙(yi)醇

抗原修(xiu)復液(ye): 0.01M的檸檬酸(suan)鈉(na)緩(huan)沖(chong)液(ye)：58.82g檸檬酸(suan)三鈉(na)及7.56g檸檬酸(suan)溶于200ml純水(shui)，調(diao)pH至 6.0，純水(shui)1:100稀釋為工作液(ye)

3%過(guo)氧化氫-甲醇: 30%的過(guo)氧化氫與無水甲醇1:9稀(xi)釋(shi)

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水，調pH至 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀(xi)釋10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物素(su)標記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗(kang)，酶標親和素(su)UltraTek HRP，DAB

顯色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀(xi)釋(shi)液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸(suan)-乙(yi)醇：0.5～1%鹽酸(suan)，95.0～95.5%乙(yi)醇

蘇木素(su)：蘇木精2g溶(rong)于250ml無(wu)水乙醇(chun)，十六水合(he)硫酸(suan)鋁17.6g 溶(rong)與750ml純水，以上溶(rong)液充分(fen)混(hun)合(he)，加(jia)入碘酸(suan)鈉(na) 0.2g和冰醋酸(suan)20ml

2.實驗步驟

1組織固定：烘箱溫度65-75℃ 30min或(huo)者65℃隔夜；

2脫蠟(la)：二甲苯(ben)浸泡(pao)三次，每次10分鐘；

3水化：依次(ci)經(jing)過無水乙(yi)醇，95%乙(yi)醇，85%乙(yi)醇，70%乙(yi)醇浸泡，每次(ci)5min；

4洗滌：自來水沖(chong)洗1次，PBS浸泡3min；

5抗原修復(fu)：放入(ru)稀釋100倍的檸(ning)檬酸(suan)鹽緩沖液(pH 6.0) 中，高壓鍋(guo)煮沸10min，常溫冷(leng)卻30min；

6洗滌：純水浸泡(pao)2次(ci)，PBS浸泡(pao)1次(ci)，每次(ci)3min；

7滅活(huo)酶：室溫下3%過氧化氫-甲醇暗(an)處處理切片(pian)15min；

8洗滌：純(chun)水浸(jin)泡1次(ci)，PBS浸(jin)泡2次(ci)，每次(ci)3min；

9封閉：加入適當體積的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱孵育5min；

10洗滌：純水浸泡1次(ci)，PBS浸泡2次(ci)，每次(ci)3min；

11一抗(kang)：加入反應體積為0.15ml，適合濃度(du)的一抗(kang), 37℃ 濕盒孵(fu)育(yu)60min。

12洗(xi)滌(di)：PBST浸泡3次(ci)(ci)，PBS浸泡1次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)3min；

13加入適當體積生物(wu)素標記(ji)的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵(fu)育10min；

14洗(xi)滌：PBST浸泡3次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每次(ci)3min；

15加(jia)入(ru)適當(dang)體(ti)積酶標(biao)親和(he)素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒(he)孵(fu)育10min；

16洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

17顯(xian)(xian)色(se)：滴加適量DAB顯(xian)(xian)色(se)液(ye)(KT1003a)至切片(pian)上(shang)，室溫(wen)顯(xian)(xian)色(se)1~5min，自(zi)來水沖洗；

18復染：蘇木素染色5min，蒸餾水沖洗5min；

19分(fen)化： 0.5%鹽(yan)酸乙醇混合液中(zhong)分(fen)化，自來水沖洗3-4次(ci)， PBS中(zhong)浸(jin)泡10-20秒(miao)返藍，自來水沖洗2次(ci)。

20脫(tuo)水(shui)：經過70%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，無水(shui)乙醇浸泡，每次5min；

21透明：二(er)甲苯浸泡2次，每次10-15min；

22封片(pian)：晾(liang)干(gan)后(hou)加中性樹膠(jiao)，蓋玻(bo)片(pian)封片(pian)；

23結果：顯微鏡(jing)觀察，記錄結果。

購買放心細胞株細胞系，耐(nai)藥(yao)濃度倍數(shu)高穩定耐(nai)藥(yao)株，選擇慧穎生物(wu)

慧(hui)穎生(sheng)物提供腫瘤耐(nai)藥細胞(bao)株的(de)建(jian)立(li)與服(fu)務。慧(hui)穎生(sheng)物可以(yi)根據客戶要求(qiu)構(gou)建(jian)相(xiang)應的(de)細胞(bao)系。腫瘤耐(nai)藥株的(de)建(jian)立(li)和(he)應用，能夠(gou)給予(yu)臨床zui直接的(de)指導。

服(fu)務內(nei)容 價(jia)格 服(fu)務周期

藥物濃度梯度遞(di)增法(fa)建(jian)立耐藥細胞株 詢價6個(ge)月

大(da)劑(ji)量間歇誘導法建立耐(nai)藥(yao)細胞(bao)株 詢價(jia)6個月

主(zhu)要提供一下耐(nai)藥細胞株的建立：

人乳腺癌阿霉素(su)耐藥(yao)細胞株

人乳(ru)腺(xian)癌(ai)紫杉醇(chun)耐藥株(zhu)

人肺腺癌紫(zi)杉醇(chun)耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶(ding)耐藥株

人結腸癌長春(chun)新堿耐藥株

人口腔(qiang)上(shang)皮癌長(chang)春新堿耐藥株

人(ren)結腸(chang)癌紫(zi)杉(shan)醇耐藥(yao)株

人結腸癌氟尿(niao)嘧(mi)啶(ding)耐藥(yao)株

人(ren)卵巢癌順鉑耐藥(yao)株

人白血病阿(a)霉素耐藥株(zhu)

人卵巢癌(ai)紫杉醇耐藥(yao)株

人胃癌順鉑耐藥株

人白血(xue)病阿霉素耐藥株

人乳腺癌阿霉素耐藥(yao)細胞株

人結腸癌長春(chun)新堿(jian)耐藥株

人肝癌(ai)氟尿嘧啶耐藥株

人乳腺(xian)癌抗雌激素耐(nai)藥株

人乳(ru)腺癌(ai)Tamoxifen耐藥(yao)株(zhu)

小鼠激素依賴性乳(ru)腺癌細胞(bao)

服務(wu)周期

1. 有現成的細胞系：6個月，具體時間根據客戶的要求(qiu)以及樣本(ben)數而定；

2. 沒(mei)有(you)已(yi)建(jian)成的細胞系，需要構建(jian)，公(gong)司構建(jian)時間約為15個月左右。

公司熱(re)賣耐藥株：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，H1975/培(pei)美曲塞細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，MCF-7/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，，SGC-7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT116/L-OHP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，LOVO/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，SGC7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，SGC7901/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，L1210/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等。