1.試(shi)劑和溶液

乙(yi)醇(chun): 無(wu)水(shui)乙(yi)醇(chun)，95%乙(yi)醇(chun)，85%乙(yi)醇(chun)，70%乙(yi)醇(chun)

抗原(yuan)修復液(ye): 0.01M的檸(ning)檬酸(suan)鈉(na)緩沖液(ye)：58.82g檸(ning)檬酸(suan)三鈉(na)及(ji)7.56g檸(ning)檬酸(suan)溶于200ml純水，調(diao)pH至 6.0，純水1:100稀釋為工作液(ye)

3%過(guo)氧(yang)化(hua)氫(qing)-甲醇: 30%的過(guo)氧(yang)化(hua)氫(qing)與無水甲醇1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純(chun)水，調pH至 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀釋(shi)10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的(de)1×PBS（1×PBST）super block，生物素標記的(de)UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標親和素UltraTek HRP，DAB

顯(xian)色試劑盒(he)：Cat. KT1002a

抗(kang)體稀(xi)釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸(suan)-乙醇：0.5～1%鹽酸(suan)，95.0～95.5%乙醇

蘇(su)木素(su)：蘇(su)木精2g溶(rong)(rong)于(yu)250ml無水(shui)乙醇，十六水(shui)合(he)硫酸鋁17.6g 溶(rong)(rong)與750ml純(chun)水(shui)，以上溶(rong)(rong)液(ye)充分混合(he)，加入碘(dian)酸鈉 0.2g和冰醋酸20ml

2.實(shi)驗(yan)步驟

1組織固定：烘(hong)箱溫度65-75℃ 30min或(huo)者65℃隔夜；

2脫蠟：二甲(jia)苯(ben)浸泡(pao)三次，每(mei)次10分鐘；

3水(shui)(shui)化：依次經過無水(shui)(shui)乙(yi)醇(chun)，95%乙(yi)醇(chun)，85%乙(yi)醇(chun)，70%乙(yi)醇(chun)浸泡，每(mei)次5min；

4洗(xi)(xi)滌(di)：自來(lai)水沖洗(xi)(xi)1次，PBS浸泡3min；

5抗原修復(fu)：放(fang)入(ru)稀釋100倍的檸(ning)檬酸鹽緩沖液(ye)(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸10min，常溫冷卻30min；

6洗滌(di)：純(chun)水浸(jin)泡2次，PBS浸(jin)泡1次，每次3min；

7滅活酶：室溫下3%過(guo)氧化氫(qing)-甲醇暗處(chu)處(chu)理切片15min；

8洗滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

9封閉：加入適當體積的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱(xiang)孵育5min；

10洗滌：純(chun)水浸(jin)泡1次(ci)，PBS浸(jin)泡2次(ci)，每(mei)次(ci)3min；

11一抗(kang)：加入反應體積為(wei)0.15ml，適合(he)濃度的一抗(kang), 37℃ 濕盒孵育(yu)60min。

12洗滌：PBST浸泡(pao)3次，PBS浸泡(pao)1次，每次3min；

13加入(ru)適當(dang)體積生物素(su)標記的(de)UltraTek Anti-Polyvalent的(de)二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵(fu)育10min；

14洗滌：PBST浸泡(pao)3次，PBS浸泡(pao)1次，每次3min；

15加(jia)入適當體(ti)積酶(mei)標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕(shi)盒孵育(yu)10min；

16洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

17顯(xian)色(se)：滴(di)加適量(liang)DAB顯(xian)色(se)液(KT1003a)至切片上，室溫顯(xian)色(se)1~5min，自來水(shui)沖(chong)洗；

18復染：蘇木素染色5min，蒸(zheng)餾水沖(chong)洗5min；

19分化(hua)(hua)： 0.5%鹽酸乙醇混合液中分化(hua)(hua)，自(zi)來(lai)水沖洗3-4次， PBS中浸泡10-20秒返藍，自(zi)來(lai)水沖洗2次。

20脫水(shui)：經過(guo)70%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，無水(shui)乙醇浸泡，每次5min；

21透明：二甲苯(ben)浸(jin)泡2次(ci)，每(mei)次(ci)10-15min；

22封片(pian)：晾干后加中性樹膠(jiao)，蓋(gai)玻片(pian)封片(pian)；

23結果：顯(xian)微鏡觀察，記錄結果。

購買放(fang)心細(xi)胞(bao)株細(xi)胞(bao)系，耐藥濃度倍(bei)數高穩(wen)定耐藥株，選擇慧穎(ying)生物

慧穎生(sheng)物(wu)提供腫(zhong)瘤(liu)耐藥細(xi)胞株的建立(li)與(yu)服務。慧穎生(sheng)物(wu)可以(yi)根據(ju)客戶要(yao)求構建相應的細(xi)胞系。腫(zhong)瘤(liu)耐藥株的建立(li)和(he)應用，能(neng)夠給予臨床zui直接的指(zhi)導。

服(fu)務(wu)內容 價(jia)格(ge) 服(fu)務(wu)周期

藥物濃度梯度遞增法(fa)建立耐藥細胞株 詢價(jia)6個月

大劑量間歇誘導法建立耐藥細(xi)胞株 詢價6個月(yue)

主要(yao)提(ti)供一下(xia)耐藥細胞株(zhu)的建立：

人乳腺癌(ai)阿霉(mei)素(su)耐藥(yao)細胞株

人(ren)乳腺癌紫杉醇耐藥株

人肺腺癌紫杉(shan)醇耐藥株

人肝(gan)癌氟尿嘧啶耐藥株

人結腸癌長(chang)春新(xin)堿耐(nai)藥(yao)株

人口腔上皮癌長春新堿(jian)耐藥株

人結腸癌(ai)紫杉(shan)醇耐藥株

人結腸癌(ai)氟尿(niao)嘧(mi)啶耐(nai)藥(yao)株

人卵巢(chao)癌(ai)順鉑耐藥株

人白(bai)血病阿霉(mei)素耐(nai)藥株

人卵(luan)巢癌紫(zi)杉醇(chun)耐藥株

人胃癌(ai)順鉑(bo)耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人乳腺(xian)癌阿霉素耐藥(yao)細胞(bao)株

人結腸癌長春新堿耐藥株

人肝癌(ai)氟尿嘧啶耐(nai)藥株

人乳腺癌抗雌激素(su)耐(nai)藥株(zhu)

人乳腺(xian)癌Tamoxifen耐藥株

小鼠激素依賴(lai)性(xing)乳(ru)腺癌細胞

服務周期

1. 有現(xian)成的(de)細胞系：6個月，具體時間根據客戶的(de)要(yao)求以及樣本數而定；

2. 沒有已建成的(de)細胞(bao)系，需(xu)要構建，公司(si)構建時間約為(wei)15個月(yue)左右(you)。

公司熱賣耐藥株：K562/Adr細胞，BIU-87/Adr細胞，A549/DDP細胞，NCI-H446/VP細胞，A549/Taxol細胞，A549/DDP細胞，H1975/培美曲塞細胞，BEL-7402/FU細胞，HCT-8/VCR細胞，HCT-8/FU細胞，HCT-8/Taxol細胞，A2780/Taxol細胞，A2780/DDP細胞，MCF-7/Adr細胞，Eca-109/VCR細胞，，PATU-8988/FU細胞，HCT116/L-OHP細胞，LOVO/ADR細胞，SGC7901/DDP細胞，SGC7901/VCR細胞，L1210/DDP細胞，H446/VP細胞，COC1/DDP細胞，HepG2/ADR細胞等。