1.試劑和溶液

乙醇: 無水(shui)乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇

抗原修復液(ye): 0.01M的檸檬酸(suan)鈉(na)緩(huan)沖液(ye)：58.82g檸檬酸(suan)三鈉(na)及7.56g檸檬酸(suan)溶于200ml純水，調pH至 6.0，純水1:100稀釋為(wei)工作液(ye)

3%過氧化(hua)氫-甲(jia)醇: 30%的過氧化(hua)氫與(yu)無(wu)水甲(jia)醇1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水(shui)，調pH至 7.4

洗(xi)滌液(ye): 1×PBS：純(chun)水稀釋10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物素(su)標記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標親和素(su)UltraTek HRP，DAB

顯色試(shi)劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸-乙醇(chun)：0.5～1%鹽酸，95.0～95.5%乙醇(chun)

蘇木(mu)素：蘇木(mu)精2g溶(rong)于250ml無水(shui)(shui)乙醇，十六水(shui)(shui)合(he)硫酸鋁17.6g 溶(rong)與(yu)750ml純水(shui)(shui)，以(yi)上溶(rong)液(ye)充(chong)分混合(he)，加(jia)入(ru)碘酸鈉 0.2g和冰醋酸20ml

2.實驗步驟

1組織(zhi)固定：烘箱溫度65-75℃ 30min或者(zhe)65℃隔(ge)夜；

2脫蠟：二甲苯(ben)浸泡三次(ci)，每次(ci)10分鐘；

3水(shui)化：依次(ci)(ci)經過無水(shui)乙(yi)醇，95%乙(yi)醇，85%乙(yi)醇，70%乙(yi)醇浸泡，每次(ci)(ci)5min；

4洗(xi)滌：自來水(shui)沖洗(xi)1次(ci)，PBS浸泡3min；

5抗原修(xiu)復(fu)：放(fang)入稀(xi)釋100倍的(de)檸(ning)檬酸鹽緩沖液(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸10min，常溫(wen)冷卻30min；

6洗滌：純水浸(jin)(jin)泡(pao)2次，PBS浸(jin)(jin)泡(pao)1次，每次3min；

7滅活酶：室溫下3%過氧(yang)化氫-甲醇(chun)暗處處理切片15min；

8洗(xi)滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

9封(feng)閉：加入適(shi)當體積的(de)super block（KT1002a Reagent A），37℃溫(wen)箱孵育5min；

10洗(xi)滌：純(chun)水浸泡(pao)1次(ci)(ci)，PBS浸泡(pao)2次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)3min；

11一(yi)抗：加入反應體積(ji)為0.15ml，適(shi)合(he)濃(nong)度的一(yi)抗, 37℃ 濕盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸泡3次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每次(ci)3min；

13加入適當體積生物素標(biao)記的UltraTek Anti-Polyvalent的二(er)抗(kang)（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵(fu)育10min；

14洗滌：PBST浸泡(pao)3次，PBS浸泡(pao)1次，每次3min；

15加(jia)入(ru)適當體積酶標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒(he)孵育(yu)10min；

16洗(xi)滌：PBST浸泡(pao)3次(ci)，PBS浸泡(pao)1次(ci)，每(mei)次(ci)3min；

17顯色：滴(di)加適量(liang)DAB顯色液(KT1003a)至切片上(shang)，室溫顯色1~5min，自(zi)來水沖洗；

18復染：蘇木素染色5min，蒸餾(liu)水沖洗(xi)5min；

19分(fen)化： 0.5%鹽酸乙醇混合液中(zhong)分(fen)化，自來(lai)水沖洗3-4次， PBS中(zhong)浸泡(pao)10-20秒返藍，自來(lai)水沖洗2次。

20脫(tuo)水：經(jing)過70%乙(yi)醇，85%乙(yi)醇，95%乙(yi)醇，無(wu)水乙(yi)醇浸(jin)泡，每次(ci)5min；

21透明：二甲苯(ben)浸泡(pao)2次，每次10-15min；

22封片：晾(liang)干(gan)后加中(zhong)性樹(shu)膠，蓋玻(bo)片封片；

23結(jie)果(guo)：顯微(wei)鏡觀察，記錄(lu)結(jie)果(guo)。

購買放心細胞株(zhu)(zhu)細胞系，耐藥濃度倍數高穩(wen)定耐藥株(zhu)(zhu)，選擇慧(hui)穎生物(wu)

慧穎生(sheng)物提供(gong)腫(zhong)瘤耐(nai)(nai)藥細胞株的建(jian)立與服務。慧穎生(sheng)物可(ke)以根據客戶要求構建(jian)相應的細胞系。腫(zhong)瘤耐(nai)(nai)藥株的建(jian)立和應用，能(neng)夠給予臨床zui直接的指導。

服務(wu)內容 價(jia)格 服務(wu)周期

藥物(wu)濃度梯度遞(di)增法(fa)建立(li)耐藥細胞株 詢(xun)價(jia)6個月

大(da)劑量(liang)間歇誘導法建立耐藥細胞株 詢價6個月

主要提供一(yi)下耐藥細胞株的(de)建立：

人(ren)乳腺(xian)癌阿霉素耐藥細胞株

人乳腺(xian)癌紫杉醇(chun)耐藥株

人(ren)肺腺癌紫(zi)杉醇耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株(zhu)

人(ren)結(jie)腸癌(ai)長春(chun)新堿耐藥株(zhu)

人口腔上皮癌長春新堿耐(nai)藥株

人結(jie)腸癌紫杉(shan)醇耐藥株

人結腸癌氟尿嘧啶(ding)耐(nai)藥株

人卵巢(chao)癌順鉑耐藥株

人(ren)白血病(bing)阿霉素耐藥(yao)株

人卵巢(chao)癌紫杉醇耐藥株

人胃癌順鉑耐藥株(zhu)

人(ren)白血病阿霉素耐藥株

人乳(ru)腺癌阿霉素耐藥細胞株

人結(jie)腸癌長春新堿耐藥株

人肝癌氟尿(niao)嘧啶耐藥株

人乳腺癌抗雌激素(su)耐藥株(zhu)

人乳腺癌(ai)Tamoxifen耐藥株

小(xiao)鼠激素(su)依賴性乳腺癌細(xi)胞

服務(wu)周期

1. 有現(xian)成的細胞系(xi)：6個月，具(ju)體時(shi)間(jian)根據客戶的要求以及樣本數而定；

2. 沒(mei)有已建(jian)(jian)成的細胞系，需(xu)要構建(jian)(jian)，公司構建(jian)(jian)時間約(yue)為(wei)15個月左右。

公司熱賣耐藥株：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，H1975/培美曲(qu)塞細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，MCF-7/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，Eca-109/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，，LOVO/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，SGC7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，SGC7901/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，L1210/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等。