1.試(shi)劑(ji)和溶液

乙醇(chun): 無水乙醇(chun)，95%乙醇(chun)，85%乙醇(chun)，70%乙醇(chun)

抗原修復(fu)液: 0.01M的檸檬酸(suan)鈉緩沖液：58.82g檸檬酸(suan)三(san)鈉及7.56g檸檬酸(suan)溶于200ml純水，調pH至 6.0，純水1:100稀釋為工(gong)作液

3%過氧(yang)化(hua)氫-甲醇(chun): 30%的(de)過氧(yang)化(hua)氫與無(wu)水甲醇(chun)1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水，調pH至 7.4

洗(xi)滌液: 1×PBS：純水稀(xi)釋10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生(sheng)物素標記(ji)的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標親和素UltraTek HRP，DAB

顯色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽(yan)酸-乙(yi)醇：0.5～1%鹽(yan)酸，95.0～95.5%乙(yi)醇

蘇木(mu)素：蘇木(mu)精2g溶于(yu)250ml無水(shui)乙醇，十(shi)六水(shui)合(he)硫酸鋁(lv)17.6g 溶與750ml純水(shui)，以上(shang)溶液充分混合(he)，加入碘酸鈉 0.2g和冰醋(cu)酸20ml

2.實驗(yan)步驟(zou)

1組織固定：烘箱溫度65-75℃ 30min或者65℃隔夜；

2脫(tuo)蠟：二(er)甲苯浸泡(pao)三(san)次(ci)，每次(ci)10分鐘(zhong)；

3水化：依次經過無水乙(yi)醇，95%乙(yi)醇，85%乙(yi)醇，70%乙(yi)醇浸泡，每次5min；

4洗(xi)滌：自來水沖洗(xi)1次，PBS浸泡3min；

5抗原修復：放入稀釋100倍的檸檬酸鹽緩(huan)沖液(pH 6.0) 中(zhong)，高壓(ya)鍋(guo)煮沸10min，常溫(wen)冷(leng)卻30min；

6洗滌：純水浸泡2次，PBS浸泡1次，每次3min；

7滅活(huo)酶：室溫下(xia)3%過氧(yang)化氫-甲醇暗處處理切片(pian)15min；

8洗滌(di)：純(chun)水浸(jin)泡1次，PBS浸(jin)泡2次，每次3min；

9封閉：加入(ru)適(shi)當體(ti)積的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫(wen)箱孵(fu)育5min；

10洗滌：純水浸(jin)泡1次(ci)，PBS浸(jin)泡2次(ci)，每(mei)次(ci)3min；

11一(yi)抗(kang)：加(jia)入反應(ying)體(ti)積為0.15ml，適合濃度的一(yi)抗(kang), 37℃ 濕盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

13加入適當(dang)體(ti)積(ji)生物素(su)標記的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵育10min；

14洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

15加(jia)入適當體積酶標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒孵(fu)育(yu)10min；

16洗滌：PBST浸泡3次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每次(ci)3min；

17顯(xian)色(se)：滴(di)加(jia)適量DAB顯(xian)色(se)液(KT1003a)至切片上，室溫顯(xian)色(se)1~5min，自(zi)來(lai)水沖洗；

18復染：蘇木素染色5min，蒸餾水沖(chong)洗5min；

19分(fen)化： 0.5%鹽酸乙醇混合(he)液中分(fen)化，自來水沖洗(xi)3-4次， PBS中浸泡10-20秒返藍，自來水沖洗(xi)2次。

20脫水：經(jing)過70%乙(yi)醇(chun)，85%乙(yi)醇(chun)，95%乙(yi)醇(chun)，無水乙(yi)醇(chun)浸泡(pao)，每次5min；

21透明：二甲(jia)苯浸泡(pao)2次(ci)，每次(ci)10-15min；

22封片(pian)(pian)：晾干后加中性樹膠，蓋玻(bo)片(pian)(pian)封片(pian)(pian)；

23結(jie)(jie)果(guo)(guo)：顯(xian)微鏡觀察，記錄結(jie)(jie)果(guo)(guo)。

購(gou)買放心細胞株(zhu)細胞系，耐藥濃度倍數(shu)高穩定耐藥株(zhu)，選擇慧穎生物

慧穎生(sheng)物(wu)提供腫(zhong)瘤耐(nai)藥(yao)細(xi)胞株的(de)(de)(de)建(jian)(jian)立(li)(li)與(yu)服務。慧穎生(sheng)物(wu)可以(yi)根據(ju)客戶要(yao)求(qiu)構建(jian)(jian)相應的(de)(de)(de)細(xi)胞系。腫(zhong)瘤耐(nai)藥(yao)株的(de)(de)(de)建(jian)(jian)立(li)(li)和應用，能夠(gou)給(gei)予臨床zui直接的(de)(de)(de)指(zhi)導。

服(fu)務(wu)(wu)內容 價(jia)格 服(fu)務(wu)(wu)周期

藥物(wu)濃度(du)梯(ti)度(du)遞增法建(jian)立耐藥細胞株 詢價(jia)6個月(yue)

大(da)劑量間歇誘導(dao)法建立耐藥細胞株 詢價6個(ge)月

主要提供一下耐(nai)藥細胞株(zhu)的建立(li)：

人(ren)乳腺癌阿霉素耐(nai)藥細胞株

人乳(ru)腺癌(ai)紫杉(shan)醇耐藥(yao)株

人肺腺癌(ai)紫杉醇(chun)耐(nai)藥株

人肝癌氟尿嘧啶(ding)耐(nai)藥(yao)株

人結腸癌長春(chun)新(xin)堿耐藥株(zhu)

人口腔上(shang)皮癌長春新堿耐(nai)藥(yao)株(zhu)

人結腸癌紫杉醇耐藥株

人結(jie)腸癌氟(fu)尿(niao)嘧啶耐藥株

人卵巢(chao)癌順鉑(bo)耐藥株(zhu)

人白血病阿霉素(su)耐藥株

人卵巢癌紫杉醇耐藥株

人(ren)胃癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉(mei)素耐(nai)藥(yao)株

人(ren)乳腺癌阿霉素(su)耐藥細(xi)胞株(zhu)

人(ren)結腸癌長春新堿耐藥(yao)株(zhu)

人肝(gan)癌氟尿嘧(mi)啶耐藥(yao)株

人(ren)乳腺(xian)癌抗(kang)雌激(ji)素耐(nai)藥株

人乳腺癌(ai)Tamoxifen耐(nai)藥株

小鼠激(ji)素依賴(lai)性(xing)乳(ru)腺癌細胞

服務周期

1. 有(you)現成(cheng)的(de)細胞系：6個月，具體時(shi)間(jian)根據客(ke)戶的(de)要求以及樣本數而定；

2. 沒(mei)有已建成的細胞系，需要(yao)構建，公(gong)司構建時(shi)間約為15個月左右(you)。

公司熱(re)賣耐藥株：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，H1975/培(pei)美(mei)曲塞細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，MCF-7/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，Eca-109/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT116/L-OHP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，，SGC7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SGC7901/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，L1210/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)等。