1.試劑和溶液

乙(yi)醇: 無水乙(yi)醇，95%乙(yi)醇，85%乙(yi)醇，70%乙(yi)醇

抗原(yuan)修(xiu)復液: 0.01M的檸檬酸鈉緩沖液：58.82g檸檬酸三(san)鈉及7.56g檸檬酸溶于200ml純水(shui)，調pH至 6.0，純水(shui)1:100稀(xi)釋為工作(zuo)液

3%過氧(yang)化氫-甲醇: 30%的過氧(yang)化氫與(yu)無水甲醇1:9稀釋(shi)

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水，調(diao)pH至 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀釋10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物(wu)素標(biao)記(ji)的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標(biao)親和素UltraTek HRP，DAB

顯色試劑(ji)盒：Cat. KT1002a

抗體(ti)稀(xi)釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽(yan)酸-乙醇：0.5～1%鹽(yan)酸，95.0～95.5%乙醇

蘇木素(su)：蘇木精(jing)2g溶于(yu)250ml無水(shui)(shui)乙醇，十六水(shui)(shui)合硫酸鋁17.6g 溶與(yu)750ml純水(shui)(shui)，以上溶液充(chong)分混合，加入碘酸鈉 0.2g和冰醋酸20ml

2.實驗步驟

1組織固定(ding)：烘箱(xiang)溫度65-75℃ 30min或者(zhe)65℃隔夜；

2脫(tuo)蠟：二(er)甲苯浸泡三次(ci)，每(mei)次(ci)10分鐘；

3水化：依次經過無水乙醇(chun)(chun)，95%乙醇(chun)(chun)，85%乙醇(chun)(chun)，70%乙醇(chun)(chun)浸泡，每次5min；

4洗滌：自來水沖洗1次(ci)，PBS浸泡3min；

5抗(kang)原(yuan)修復：放(fang)入稀釋100倍(bei)的檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸(fei)10min，常溫(wen)冷(leng)卻30min；

6洗滌：純水浸(jin)泡(pao)2次，PBS浸(jin)泡(pao)1次，每次3min；

7滅活(huo)酶(mei)：室溫(wen)下3%過(guo)氧化氫-甲醇暗處處理切片15min；

8洗滌：純水浸泡(pao)1次(ci)，PBS浸泡(pao)2次(ci)，每次(ci)3min；

9封閉：加入適當體積的(de)super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱孵(fu)育5min；

10洗滌：純水浸(jin)泡1次(ci)，PBS浸(jin)泡2次(ci)，每次(ci)3min；

11一(yi)抗(kang)：加入反應體積為0.15ml，適合濃度的一(yi)抗(kang), 37℃ 濕盒(he)孵育60min。

12洗滌(di)：PBST浸泡3次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每次(ci)3min；

13加入適當體積生(sheng)物素標記的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕(shi)盒孵育(yu)10min；

14洗滌：PBST浸泡(pao)(pao)3次，PBS浸泡(pao)(pao)1次，每(mei)次3min；

15加入適當體積酶標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕(shi)盒孵育10min；

16洗滌：PBST浸(jin)(jin)泡3次，PBS浸(jin)(jin)泡1次，每次3min；

17顯(xian)色：滴(di)加(jia)適量DAB顯(xian)色液(KT1003a)至切片(pian)上(shang)，室溫顯(xian)色1~5min，自(zi)來(lai)水(shui)沖(chong)洗(xi)；

18復染：蘇木素染色5min，蒸餾(liu)水沖(chong)洗5min；

19分化： 0.5%鹽酸乙醇混合液中分化，自來水沖(chong)洗3-4次， PBS中浸泡(pao)10-20秒返藍，自來水沖(chong)洗2次。

20脫水：經過70%乙醇(chun)，85%乙醇(chun)，95%乙醇(chun)，無水乙醇(chun)浸泡，每次(ci)5min；

21透明：二甲苯(ben)浸泡(pao)2次(ci)，每(mei)次(ci)10-15min；

22封(feng)片(pian)：晾干后加中性樹膠，蓋玻(bo)片(pian)封(feng)片(pian)；

23結(jie)果：顯微鏡(jing)觀察，記錄結(jie)果。

購買放心細(xi)胞(bao)株(zhu)細(xi)胞(bao)系，耐(nai)藥(yao)濃(nong)度倍(bei)數高穩定(ding)耐(nai)藥(yao)株(zhu)，選(xuan)擇慧(hui)穎生物

慧穎生物提供(gong)腫瘤耐(nai)藥(yao)(yao)細(xi)(xi)胞株的建立與服務。慧穎生物可(ke)以根(gen)據客(ke)戶要求(qiu)構建相(xiang)應的細(xi)(xi)胞系。腫瘤耐(nai)藥(yao)(yao)株的建立和應用，能夠(gou)給予臨(lin)床zui直接的指導。

服務內容 價格 服務周期

藥物濃度梯度遞增法(fa)建立耐(nai)藥細胞(bao)株 詢價6個月(yue)

大劑量間(jian)歇(xie)誘(you)導法建立(li)耐藥細胞(bao)株(zhu) 詢(xun)價6個月

主要提供一下耐藥細胞(bao)株(zhu)的建立：

人乳腺癌阿霉素耐(nai)藥細胞株

人乳(ru)腺癌紫杉醇耐藥株

人肺腺癌紫(zi)杉醇(chun)耐(nai)藥(yao)株

人(ren)肝(gan)癌氟尿嘧啶(ding)耐藥株

人結(jie)腸(chang)癌長(chang)春新堿耐藥株

人口腔上皮癌長春新堿(jian)耐藥株

人結腸癌紫杉醇耐(nai)藥株

人結(jie)腸癌氟(fu)尿嘧(mi)啶耐藥(yao)株(zhu)

人卵(luan)巢癌順鉑(bo)耐藥(yao)株(zhu)

人白血病阿霉素耐(nai)藥株

人卵巢癌紫杉醇耐(nai)藥株

人胃(wei)癌順鉑(bo)耐藥株

人白血病阿霉素(su)耐藥株

人乳腺癌阿(a)霉素耐藥細胞(bao)株

人結腸(chang)癌(ai)長春(chun)新堿耐藥株

人肝癌(ai)氟(fu)尿嘧啶耐藥(yao)株

人乳腺(xian)癌抗雌激素耐藥株

人乳(ru)腺癌(ai)Tamoxifen耐藥株

小鼠激素依(yi)賴(lai)性乳腺癌細(xi)胞(bao)

服務周期

1. 有(you)現成的細胞系：6個月，具(ju)體時(shi)間根(gen)據客戶的要求以(yi)及(ji)樣本數(shu)而定；

2. 沒有(you)已(yi)建(jian)成的細胞(bao)系，需要(yao)構(gou)建(jian)，公司構(gou)建(jian)時間約為15個月(yue)左右。

公(gong)司熱賣耐藥株：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，H1975/培美曲(qu)塞(sai)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，MCF-7/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，Eca-109/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT116/L-OHP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，LOVO/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，，SGC7901/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，L1210/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等(deng)。