1.試劑和溶液

乙(yi)醇(chun)(chun): 無(wu)水乙(yi)醇(chun)(chun)，95%乙(yi)醇(chun)(chun)，85%乙(yi)醇(chun)(chun)，70%乙(yi)醇(chun)(chun)

抗原修(xiu)復液: 0.01M的檸檬酸(suan)鈉(na)緩沖液：58.82g檸檬酸(suan)三鈉(na)及7.56g檸檬酸(suan)溶于200ml純水，調pH至 6.0，純水1:100稀釋為工作液

3%過氧化氫(qing)-甲(jia)醇: 30%的(de)過氧化氫(qing)與無水甲(jia)醇1:9稀釋(shi)

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加(jia)1 L純水，調pH至(zhi) 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀釋(shi)10× PBS；1× PBST：含(han)0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生(sheng)物(wu)素標記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標親和素UltraTek HRP，DAB

顯(xian)色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽(yan)酸-乙醇：0.5～1%鹽(yan)酸，95.0～95.5%乙醇

蘇木素：蘇木精2g溶于250ml無水(shui)乙醇，十六水(shui)合硫酸鋁17.6g 溶與750ml純水(shui)，以上溶液充(chong)分混(hun)合，加入碘(dian)酸鈉(na) 0.2g和冰醋酸20ml

2.實驗步驟

1組(zu)織固定(ding)：烘箱溫度65-75℃ 30min或者(zhe)65℃隔夜；

2脫蠟：二甲苯浸泡三次，每次10分(fen)鐘(zhong)；

3水化：依次經過(guo)無水乙(yi)醇(chun)，95%乙(yi)醇(chun)，85%乙(yi)醇(chun)，70%乙(yi)醇(chun)浸泡，每次5min；

4洗滌：自來水沖洗1次，PBS浸泡3min；

5抗原修(xiu)復：放入稀釋100倍(bei)的檸檬酸鹽緩(huan)沖液(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸(fei)10min，常溫(wen)冷(leng)卻30min；

6洗滌：純(chun)水浸泡(pao)2次，PBS浸泡(pao)1次，每次3min；

7滅活(huo)酶(mei)：室溫(wen)下3%過(guo)氧化(hua)氫-甲醇暗處處理切片15min；

8洗(xi)滌：純水(shui)浸泡(pao)1次(ci)，PBS浸泡(pao)2次(ci)，每次(ci)3min；

9封閉：加入適當體積(ji)的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱(xiang)孵育(yu)5min；

10洗滌：純(chun)水浸(jin)泡1次，PBS浸(jin)泡2次，每次3min；

11一抗：加入反(fan)應(ying)體積為0.15ml，適(shi)合濃(nong)度(du)的(de)一抗, 37℃ 濕盒(he)孵育60min。

12洗滌：PBST浸(jin)泡3次(ci)，PBS浸(jin)泡1次(ci)，每次(ci)3min；

13加入適當體積生物素標記(ji)的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕(shi)盒孵育(yu)10min；

14洗(xi)滌：PBST浸(jin)泡(pao)(pao)3次(ci)，PBS浸(jin)泡(pao)(pao)1次(ci)，每次(ci)3min；

15加(jia)入適當體積酶標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕(shi)盒孵育(yu)10min；

16洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

17顯色：滴加適量DAB顯色液(KT1003a)至切(qie)片上(shang)，室溫顯色1~5min，自來水沖洗；

18復(fu)染(ran)：蘇(su)木素(su)染(ran)色(se)5min，蒸餾水沖洗5min；

19分化： 0.5%鹽(yan)酸乙醇混(hun)合液中分化，自來水(shui)沖洗3-4次， PBS中浸泡10-20秒返藍，自來水(shui)沖洗2次。

20脫(tuo)水：經過70%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，無水乙醇浸泡(pao)，每次(ci)5min；

21透明：二甲(jia)苯(ben)浸泡(pao)2次(ci)，每次(ci)10-15min；

22封片(pian)：晾干(gan)后加中性(xing)樹(shu)膠，蓋(gai)玻片(pian)封片(pian)；

23結(jie)果(guo)：顯微鏡(jing)觀察，記錄結(jie)果(guo)。

購買放心細胞(bao)株(zhu)細胞(bao)系，耐藥(yao)濃度(du)倍數(shu)高穩定耐藥(yao)株(zhu)，選擇慧穎生(sheng)物

慧穎(ying)生(sheng)物提供腫瘤(liu)(liu)耐藥(yao)細胞株(zhu)的(de)建(jian)立(li)與服(fu)務。慧穎(ying)生(sheng)物可(ke)以根據客戶要求構建(jian)相應(ying)的(de)細胞系。腫瘤(liu)(liu)耐藥(yao)株(zhu)的(de)建(jian)立(li)和應(ying)用，能(neng)夠給予臨床zui直接的(de)指導。

服務內容 價(jia)格 服務周(zhou)期

藥(yao)物(wu)濃度(du)梯(ti)度(du)遞增(zeng)法(fa)建立(li)耐藥(yao)細胞株 詢價6個月

大劑量間歇誘導法(fa)建立耐藥細胞株(zhu) 詢價6個月

主要(yao)提供一下耐藥細(xi)胞(bao)株的建立：

人乳(ru)腺癌阿霉(mei)素耐藥細胞株

人乳腺癌紫杉醇(chun)耐(nai)藥株

人(ren)肺腺癌紫杉醇耐藥株

人肝癌(ai)氟(fu)尿嘧啶耐(nai)藥株

人結腸癌(ai)長春新堿耐藥株

人(ren)口腔上皮癌長春新堿耐(nai)藥株

人結腸癌紫杉醇耐藥株

人結腸癌(ai)氟尿嘧啶耐藥株

人卵巢癌順鉑耐藥株

人白血(xue)病(bing)阿霉素(su)耐藥株

人卵巢癌紫杉醇耐藥(yao)株(zhu)

人胃癌順(shun)鉑耐(nai)藥株

人白血(xue)病阿霉素(su)耐(nai)藥株

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xi)胞株

人結腸癌長(chang)春(chun)新堿(jian)耐藥株

人(ren)肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人乳(ru)腺癌抗雌激素耐藥株

人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

小(xiao)鼠激素依賴性乳腺癌(ai)細胞

服務周(zhou)期

1. 有現成的(de)(de)細胞系：6個月，具(ju)體時間(jian)根據客(ke)戶的(de)(de)要(yao)求(qiu)以及樣(yang)本(ben)數而定；

2. 沒有已建成(cheng)的細胞系(xi)，需要(yao)構建，公(gong)司構建時間約為15個月左右。

公司熱賣耐(nai)藥株：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，H1975/培美(mei)曲塞細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，MCF-7/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，Eca-109/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT116/L-OHP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，LOVO/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，SGC7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，，L1210/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)等。