1.試劑和溶(rong)液

乙(yi)(yi)醇(chun): 無水乙(yi)(yi)醇(chun)，95%乙(yi)(yi)醇(chun)，85%乙(yi)(yi)醇(chun)，70%乙(yi)(yi)醇(chun)

抗原修復液: 0.01M的檸(ning)檬(meng)酸鈉緩沖液：58.82g檸(ning)檬(meng)酸三(san)鈉及7.56g檸(ning)檬(meng)酸溶于(yu)200ml純水，調pH至 6.0，純水1:100稀釋為工作(zuo)液

3%過氧(yang)化氫-甲(jia)醇: 30%的過氧(yang)化氫與(yu)無水甲(jia)醇1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和(he)2.4g KH2PO4 加1 L純水，調(diao)pH至(zhi) 7.4

洗滌(di)液: 1×PBS：純(chun)水稀釋10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的(de)1×PBS（1×PBST）super block，生物素(su)標記的(de)UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標親和素(su)UltraTek HRP，DAB

顯(xian)色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀(xi)釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸(suan)-乙醇(chun)：0.5～1%鹽酸(suan)，95.0～95.5%乙醇(chun)

蘇(su)木素：蘇(su)木精2g溶于(yu)250ml無水(shui)乙醇(chun)，十(shi)六(liu)水(shui)合硫酸(suan)鋁17.6g 溶與750ml純水(shui)，以上(shang)溶液充分混合，加入碘酸(suan)鈉 0.2g和冰醋酸(suan)20ml

2.實驗步驟

1組(zu)織固定：烘箱溫度65-75℃ 30min或者65℃隔夜；

2脫蠟：二(er)甲苯浸(jin)泡三次，每次10分(fen)鐘；

3水化：依次(ci)經過(guo)無水乙醇(chun)，95%乙醇(chun)，85%乙醇(chun)，70%乙醇(chun)浸泡，每次(ci)5min；

4洗滌：自來(lai)水沖洗1次，PBS浸泡3min；

5抗(kang)原修(xiu)復：放(fang)入稀釋100倍的檸檬酸(suan)鹽緩沖液(ye)(pH 6.0) 中(zhong)，高壓(ya)鍋煮沸10min，常溫(wen)冷卻30min；

6洗滌：純(chun)水浸泡2次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每次(ci)3min；

7滅活酶：室溫下3%過氧化(hua)氫-甲醇暗處處理切片15min；

8洗滌：純水浸泡(pao)1次，PBS浸泡(pao)2次，每次3min；

9封閉：加入適當體積的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱孵育(yu)5min；

10洗滌：純水浸泡1次(ci)，PBS浸泡2次(ci)，每(mei)次(ci)3min；

11一抗：加入反應體(ti)積為0.15ml，適合濃度的(de)一抗, 37℃ 濕(shi)盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸(jin)泡3次，PBS浸(jin)泡1次，每次3min；

13加入適當體積生物素標記的UltraTek Anti-Polyvalent的二(er)抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒(he)孵育10min；

14洗滌：PBST浸泡(pao)3次(ci)，PBS浸泡(pao)1次(ci)，每(mei)次(ci)3min；

15加入適當(dang)體積酶標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒孵育10min；

16洗(xi)滌：PBST浸泡3次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每(mei)次(ci)3min；

17顯色：滴加適量DAB顯色液(KT1003a)至切片上，室溫顯色1~5min，自來水沖洗(xi)；

18復染：蘇木素染色5min，蒸餾(liu)水沖洗5min；

19分化： 0.5%鹽(yan)酸乙醇混合(he)液(ye)中(zhong)分化，自(zi)來(lai)水(shui)沖洗3-4次(ci)， PBS中(zhong)浸(jin)泡10-20秒返藍，自(zi)來(lai)水(shui)沖洗2次(ci)。

20脫(tuo)水(shui)：經過70%乙醇(chun)，85%乙醇(chun)，95%乙醇(chun)，無水(shui)乙醇(chun)浸泡(pao)，每次(ci)5min；

21透明：二甲(jia)苯浸泡2次(ci)，每(mei)次(ci)10-15min；

22封片：晾干后(hou)加中性樹膠，蓋玻片封片；

23結(jie)(jie)果：顯(xian)微鏡觀察(cha)，記錄結(jie)(jie)果。

購買放心細胞(bao)株細胞(bao)系(xi)，耐(nai)藥濃度(du)倍數高穩定耐(nai)藥株，選擇慧穎生物

慧穎(ying)(ying)生物提供腫瘤(liu)耐(nai)藥細胞(bao)株的(de)(de)(de)建立與服務。慧穎(ying)(ying)生物可以根據客(ke)戶要求(qiu)構建相應的(de)(de)(de)細胞(bao)系。腫瘤(liu)耐(nai)藥株的(de)(de)(de)建立和應用，能夠(gou)給予臨床zui直接(jie)的(de)(de)(de)指導。

服務內容 價(jia)格 服務周期(qi)

藥(yao)物濃度梯度遞增(zeng)法建立耐(nai)藥(yao)細胞株 詢價6個(ge)月

大劑量(liang)間歇誘導法建立耐藥細胞株 詢價6個月

主要(yao)提供一下(xia)耐藥細胞(bao)株的(de)建立：

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xi)胞株

人乳腺(xian)癌紫杉醇耐藥株

人肺腺癌紫(zi)杉醇耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥(yao)株

人結腸(chang)癌(ai)長春(chun)新堿耐藥株

人口腔上皮癌長春(chun)新堿耐藥株

人結腸(chang)癌紫(zi)杉醇耐藥(yao)株

人結腸癌氟尿嘧(mi)啶耐藥株

人卵巢癌順(shun)鉑耐(nai)藥株

人白血病阿(a)霉素(su)耐藥株

人卵巢癌(ai)紫杉醇耐藥株

人胃癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人(ren)乳腺癌阿霉(mei)素耐藥細胞(bao)株

人結腸癌(ai)長(chang)春新堿耐藥(yao)株

人(ren)肝癌(ai)氟尿(niao)嘧啶耐藥株

人乳(ru)腺癌抗雌(ci)激(ji)素耐藥株

人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

小鼠激素依賴性乳(ru)腺癌細胞

服務周期

1. 有(you)現成(cheng)的細胞系：6個月，具體時間根據(ju)客戶的要(yao)求以及(ji)樣本數(shu)而定；

2. 沒有已建(jian)成(cheng)的(de)細胞(bao)系，需要構(gou)建(jian)，公司構(gou)建(jian)時間約(yue)為15個月(yue)左右(you)。

公(gong)司熱(re)賣耐藥株(zhu)：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，H1975/培美曲塞細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，MCF-7/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，Eca-109/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT116/L-OHP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，LOVO/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，SGC7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，SGC7901/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等。