1.試(shi)劑和溶液

乙醇(chun): 無水(shui)乙醇(chun)，95%乙醇(chun)，85%乙醇(chun)，70%乙醇(chun)

抗(kang)原修(xiu)復液: 0.01M的檸(ning)檬酸(suan)鈉(na)緩沖液：58.82g檸(ning)檬酸(suan)三鈉(na)及7.56g檸(ning)檬酸(suan)溶(rong)于200ml純(chun)水(shui)，調pH至(zhi) 6.0，純(chun)水(shui)1:100稀釋為工作(zuo)液

3%過氧化氫-甲醇(chun): 30%的過氧化氫與(yu)無(wu)水(shui)甲醇(chun)1:9稀(xi)釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和(he)2.4g KH2PO4 加1 L純水，調(diao)pH至(zhi) 7.4

洗滌(di)液(ye): 1×PBS：純水稀釋10× PBS；1× PBST：含(han)0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物素標記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標親(qin)和素UltraTek HRP，DAB

顯色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸(suan)-乙醇：0.5～1%鹽酸(suan)，95.0～95.5%乙醇

蘇(su)木素：蘇(su)木精(jing)2g溶(rong)于250ml無水(shui)乙醇，十六水(shui)合硫(liu)酸鋁17.6g 溶(rong)與(yu)750ml純水(shui)，以上溶(rong)液(ye)充分混合，加入碘(dian)酸鈉 0.2g和冰醋酸20ml

2.實驗(yan)步驟

1組(zu)織固定：烘箱溫(wen)度(du)65-75℃ 30min或(huo)者65℃隔夜；

2脫蠟(la)：二甲(jia)苯(ben)浸泡三(san)次，每次10分鐘；

3水化：依次(ci)經過無水乙(yi)醇(chun)，95%乙(yi)醇(chun)，85%乙(yi)醇(chun)，70%乙(yi)醇(chun)浸泡，每次(ci)5min；

4洗(xi)(xi)滌：自來水沖洗(xi)(xi)1次，PBS浸泡3min；

5抗原修(xiu)復(fu)：放入稀釋100倍的(de)檸檬酸(suan)鹽(yan)緩沖液(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸10min，常溫(wen)冷卻30min；

6洗(xi)滌：純水浸泡2次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每次(ci)3min；

7滅(mie)活酶：室(shi)溫下3%過(guo)氧化氫-甲(jia)醇暗處處理切片15min；

8洗滌：純水(shui)浸泡(pao)1次(ci)，PBS浸泡(pao)2次(ci)，每次(ci)3min；

9封閉：加入適當體(ti)積(ji)的(de)super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱孵育5min；

10洗滌：純水(shui)浸泡1次，PBS浸泡2次，每(mei)次3min；

11一(yi)抗(kang)：加入(ru)反應體積為0.15ml，適合濃度(du)的一(yi)抗(kang), 37℃ 濕(shi)盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸泡3次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每次(ci)3min；

13加(jia)入適當體積生(sheng)物素標記(ji)的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵育10min；

14洗滌：PBST浸(jin)泡(pao)3次，PBS浸(jin)泡(pao)1次，每次3min；

15加入適當(dang)體(ti)積(ji)酶標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕(shi)盒孵育10min；

16洗滌：PBST浸泡3次(ci)，PBS浸泡1次(ci)，每次(ci)3min；

17顯(xian)色：滴加適量DAB顯(xian)色液(KT1003a)至切片(pian)上，室溫(wen)顯(xian)色1~5min，自來(lai)水沖洗(xi)；

18復染：蘇木素(su)染色5min，蒸餾水(shui)沖洗5min；

19分(fen)化(hua)(hua)： 0.5%鹽酸(suan)乙醇混合(he)液中分(fen)化(hua)(hua)，自來水(shui)沖洗3-4次(ci)， PBS中浸泡10-20秒返藍，自來水(shui)沖洗2次(ci)。

20脫(tuo)水：經過70%乙(yi)醇，85%乙(yi)醇，95%乙(yi)醇，無水乙(yi)醇浸泡(pao)，每(mei)次5min；

21透明：二甲苯浸泡2次，每次10-15min；

22封(feng)片：晾干后(hou)加中性樹膠，蓋玻片封(feng)片；

23結(jie)果(guo)：顯微鏡觀察，記錄結(jie)果(guo)。

購買放(fang)心細(xi)(xi)胞株細(xi)(xi)胞系，耐藥濃度(du)倍數高(gao)穩定(ding)耐藥株，選擇慧穎(ying)生物

慧穎生物提供腫瘤耐藥細胞株(zhu)的(de)建立與服務。慧穎生物可以根據客戶要求構(gou)建相(xiang)應的(de)細胞系。腫瘤耐藥株(zhu)的(de)建立和應用(yong)，能夠給予臨床zui直(zhi)接的(de)指導。

服務(wu)內容 價格 服務(wu)周期(qi)

藥物濃度梯度遞增法(fa)建立耐(nai)藥細胞(bao)株 詢價(jia)6個月

大劑量間歇誘(you)導法建(jian)立(li)耐藥細胞(bao)株 詢(xun)價6個月

主(zhu)要提供(gong)一下耐(nai)藥(yao)細胞(bao)株的(de)建立：

人(ren)乳腺癌(ai)紫杉醇耐藥株(zhu)

人肺(fei)腺癌紫(zi)杉醇耐(nai)藥株(zhu)

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人結(jie)腸癌(ai)長春(chun)新堿耐藥株

人(ren)口腔上皮癌(ai)長春新堿耐藥株

人結腸癌(ai)紫(zi)杉醇耐藥株

人結腸癌氟尿嘧啶耐(nai)藥株

人卵巢癌順(shun)鉑耐(nai)藥(yao)株

人白血病阿霉素(su)耐藥株

人卵巢癌紫杉醇耐藥株

人胃癌順鉑耐藥株(zhu)

人(ren)白血病阿霉素耐藥株

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株

人結腸癌長春新堿耐藥株(zhu)

人(ren)肝(gan)癌氟(fu)尿嘧啶耐藥株

人乳(ru)腺癌抗雌激素耐(nai)藥(yao)株

人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

小鼠激(ji)素依賴(lai)性乳腺癌細胞

服務周(zhou)期

1. 有現成(cheng)的(de)細胞(bao)系：6個月，具體(ti)時間根據客戶的(de)要(yao)求以(yi)及(ji)樣本數而定(ding)；

2. 沒有已建(jian)(jian)成的細胞系，需要構建(jian)(jian)，公司構建(jian)(jian)時間約為15個月(yue)左右。

公司熱賣耐藥株(zhu)：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，H1975/培(pei)美曲塞細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，MCF-7/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，Eca-109/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，HCT116/L-OHP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，LOVO/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，SGC7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，SGC7901/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，L1210/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)等(deng)。