1.試(shi)劑和溶液(ye)

乙(yi)醇: 無水乙(yi)醇，95%乙(yi)醇，85%乙(yi)醇，70%乙(yi)醇

抗原修復液(ye)(ye): 0.01M的檸檬酸(suan)鈉緩沖液(ye)(ye)：58.82g檸檬酸(suan)三鈉及(ji)7.56g檸檬酸(suan)溶(rong)于200ml純水(shui)，調(diao)pH至 6.0，純水(shui)1:100稀釋為工(gong)作(zuo)液(ye)(ye)

3%過氧(yang)化氫-甲醇: 30%的過氧(yang)化氫與無(wu)水(shui)甲醇1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水，調pH至 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀釋(shi)10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物素標記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶(mei)標親和素UltraTek HRP，DAB

顯(xian)色試(shi)劑盒：Cat. KT1002a

抗體(ti)稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸-乙醇：0.5～1%鹽酸，95.0～95.5%乙醇

蘇(su)木(mu)素：蘇(su)木(mu)精2g溶(rong)于250ml無水(shui)乙(yi)醇，十六水(shui)合硫酸(suan)(suan)鋁17.6g 溶(rong)與750ml純水(shui)，以上(shang)溶(rong)液(ye)充分混合，加入碘酸(suan)(suan)鈉 0.2g和冰醋(cu)酸(suan)(suan)20ml

2.實驗(yan)步驟

1組(zu)織(zhi)固(gu)定：烘箱溫度65-75℃ 30min或(huo)者(zhe)65℃隔夜；

2脫(tuo)蠟：二甲苯浸(jin)泡三次，每次10分鐘；

3水化：依次經過無水乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)，95%乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)，85%乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)，70%乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)浸泡，每(mei)次5min；

4洗滌：自來(lai)水(shui)沖洗1次，PBS浸泡(pao)3min；

5抗原修復：放入稀釋100倍的檸(ning)檬酸鹽緩沖(chong)液(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸10min，常溫冷(leng)卻30min；

6洗滌：純水浸泡2次，PBS浸泡1次，每(mei)次3min；

7滅活(huo)酶：室(shi)溫下3%過(guo)氧化氫-甲醇暗處(chu)(chu)處(chu)(chu)理切片15min；

8洗滌：純(chun)水浸(jin)泡(pao)1次(ci)，PBS浸(jin)泡(pao)2次(ci)，每(mei)次(ci)3min；

9封閉(bi)：加入(ru)適當(dang)體積的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱(xiang)孵育5min；

10洗滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

11一抗：加入(ru)反應體積(ji)為0.15ml，適合濃度的一抗, 37℃ 濕(shi)盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸泡(pao)3次(ci)，PBS浸泡(pao)1次(ci)，每次(ci)3min；

13加入適當體積(ji)生物素標記的(de)UltraTek Anti-Polyvalent的(de)二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵育10min；

14洗滌(di)：PBST浸(jin)泡3次(ci)，PBS浸(jin)泡1次(ci)，每次(ci)3min；

15加(jia)入(ru)適當體積酶標親和素(su)UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒孵(fu)育10min；

16洗滌(di)：PBST浸泡(pao)3次，PBS浸泡(pao)1次，每次3min；

17顯色(se)(se)：滴(di)加適量DAB顯色(se)(se)液(KT1003a)至切片上，室溫顯色(se)(se)1~5min，自來(lai)水沖洗(xi)；

18復染：蘇木素染色5min，蒸(zheng)餾水(shui)沖洗5min；

19分(fen)化(hua)： 0.5%鹽酸(suan)乙醇(chun)混合液中分(fen)化(hua)，自(zi)來(lai)(lai)水(shui)沖洗(xi)3-4次， PBS中浸泡10-20秒返藍，自(zi)來(lai)(lai)水(shui)沖洗(xi)2次。

20脫水：經過70%乙(yi)醇(chun)，85%乙(yi)醇(chun)，95%乙(yi)醇(chun)，無(wu)水乙(yi)醇(chun)浸泡，每次5min；

21透明(ming)：二甲(jia)苯浸泡(pao)2次，每(mei)次10-15min；

22封(feng)片(pian)(pian)：晾干后加(jia)中性樹膠，蓋(gai)玻片(pian)(pian)封(feng)片(pian)(pian)；

23結果(guo)：顯(xian)微鏡觀察，記錄結果(guo)。

購買放(fang)心(xin)細胞(bao)株(zhu)細胞(bao)系，耐藥(yao)濃度倍數(shu)高穩定耐藥(yao)株(zhu)，選擇(ze)慧穎(ying)生物

慧(hui)穎(ying)生物提(ti)供腫瘤(liu)耐(nai)藥細胞(bao)(bao)株的(de)建立(li)與服務。慧(hui)穎(ying)生物可以根據客戶要求構建相應(ying)的(de)細胞(bao)(bao)系(xi)。腫瘤(liu)耐(nai)藥株的(de)建立(li)和應(ying)用，能夠給予(yu)臨床zui直接的(de)指導。

服(fu)(fu)務內容 價(jia)格 服(fu)(fu)務周期

藥物濃度梯度遞(di)增法建立耐藥細胞株 詢價6個月

大劑量(liang)間歇誘導法建立耐藥細胞株 詢價6個月

主要提供(gong)一(yi)下(xia)耐藥細胞株的建立(li)：

人乳腺(xian)癌阿霉素耐藥細胞株

人(ren)肺腺癌(ai)紫杉醇(chun)耐藥株

人肝癌氟(fu)尿嘧(mi)啶(ding)耐(nai)藥株

人結腸癌長春新堿耐藥株

人口(kou)腔上皮癌長春新堿(jian)耐藥株

人結(jie)腸癌紫杉醇耐藥(yao)株

人結腸癌氟尿嘧啶耐(nai)藥(yao)株

人卵(luan)巢癌順(shun)鉑耐藥株

人(ren)白血病阿(a)霉(mei)素耐藥株

人卵(luan)巢癌紫杉(shan)醇(chun)耐藥株

人胃癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥(yao)株

人乳腺癌阿霉(mei)素耐藥細胞株

人結(jie)腸癌長春新堿耐藥株

人肝(gan)癌(ai)氟尿嘧啶耐藥株

人乳腺癌抗雌激素耐藥株(zhu)

人乳腺癌Tamoxifen耐(nai)藥株

小鼠(shu)激素(su)依賴性乳(ru)腺癌細胞(bao)

服務周期

1. 有現成的細胞系(xi)：6個月，具體時間根據(ju)客戶的要(yao)求以(yi)及(ji)樣本數而定；

2. 沒有已建(jian)成的細胞系(xi)，需要構建(jian)，公司構建(jian)時(shi)間(jian)約為15個月左右。

公司熱賣(mai)耐藥株：K562/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，BIU-87/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，NCI-H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A549/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A549/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，H1975/培美(mei)曲塞細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，BEL-7402/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-8/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-8/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-8/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A2780/Taxol細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，A2780/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，MCF-7/Adr細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，Eca-109/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，PATU-8988/FU細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT116/L-OHP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，LOVO/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SGC7901/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SGC7901/VCR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，L1210/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，H446/VP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，COC1/DDP細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HepG2/ADR細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)等。