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細胞名稱

MCF7-ADR細胞(bao)

貨號

A006

種(zhong)屬

人

細胞來源

ATCC/中科院(yuan)/協和(he)醫(yi)院(yuan)等(deng)地引進

生(sheng)長特性(xing)

貼壁  上皮樣(yang)

培養條(tiao)件

培養基(ji)： 80% RPMI-1640 +20% FBS ++10ug/ml 胰島素+1000ng/ml ADR（推薦HAKATA優等胎牛血(xue)清，貨號:HN-FBS-50）

溫(wen)度：37℃     氣相：95%空氣,5% CO2

傳代

1. 用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒，將其(qi)平躺(tang)置(zhi)于培養箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作(zuo)臺，打開瓶口，將(jiang)其(qi)中的培(pei)養(yang)液(ye)去掉，再(zai)往其(qi)中加入(ru)5-6mL新(xin)鮮培養基(ji)(以T25培(pei)養瓶為例)并(bing)置于細胞培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)，根據細胞生(sheng)長狀況(kuang)及(ji)培(pei)養(yang)基顏色變化對其進(jin)行換液以及(ji)傳代，一般(ban)2到3天換一次(ci)液(ye)；

2.待細胞長至80-90%時，需要對其(qi)進行傳(chuan)代，推薦傳(chuan)代比例(li)為1:2至(zhi)1:4；

3傳(chuan)代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預熱，倒掉培養瓶中(zhong)的培養基，往(wang)培養瓶中(zhong)加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶(ping)中加1-2 ml預熱好(hao)的胰酶，置于37°孵(fu)育(yu)消化（次消化需時(shi)常(chang)取(qu)出(chu)置于顯(xian)微鏡(jing)下觀察，以顯(xian)微鏡(jing)下細胞(bao)觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞(bao)脫落為zui佳消化時間(jian)，記錄zui佳消化時間(jian)，以便于(yu)下次(ci)消化），消化好后(hou)加入3ml*培養基終止消化。用移液(ye)槍輕輕吹打(da)瓶(ping)壁上的細(xi)胞，使之*脫落，然后收集細(xi)胞懸液(ye)，1200rpm離(li)心5min，棄上清，加入*培養基(ji)重懸細(xi)胞，進(jin)行傳代。

保存

凍存條件(jian)：80%*培養基+10%FBS+10%DMSO

(備注：建議使(shi)用本公(gong)司(si)的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重(zhong)懸細胞，不(bu)能預熱后使用。)

保存(cun)條件：液(ye)氮存(cun)儲

供應限(xian)制(zhi)

僅供研究之用(yong)

常見問題及解決(jue)方案

1.培養(yang)(yang)瓶有破裂(lie)，培養(yang)(yang)液有漏液：細(xi)胞極(ji)大可能(neng)會污(wu)染，所以我們(men)會及時(shi)安排(pai)幫老(lao)師解(jie)決。

2.收到細胞(bao)后盡快(kuai)更(geng)換(huan)為含 20%血(xue)清的新(xin)鮮培(pei)養(yang)基，如(ru)因特殊情況需要繼續使用原瓶培(pei)養(yang)基，請(qing)在原瓶培(pei)養(yang)基中額外添加 20%的(de)血(xue)清(qing)（原瓶培養基的(de)繼續使用時間zui長不(bu)宜超過 24 小時）

3.細胞漂浮：培養(yang)瓶不(bu)開(kai)封，瓶口(kou)酒精擦拭(shi)后平躺(tang)放置在培養(yang)箱。1-2小時后觀察，如(ru)細(xi)(xi)胞(bao)大部(bu)分又貼回瓶底，表明細(xi)(xi)胞(bao)活力正常，剩余漂浮的細(xi)(xi)胞(bao)可以去掉，留8-10ml培(pei)養液培(pei)養觀(guan)察，細胞生長至匯合度80%，進(jin)行(xing)消(xiao)化傳代；如細(xi)胞還是不(bu)貼壁(bi)，將細(xi)胞離(li)心收集轉(zhuan)到新培(pei)(pei)養(yang)瓶，原培(pei)(pei)養(yang)瓶加部分(fen)培(pei)(pei)養(yang)液繼續培(pei)(pei)養(yang)，中(zhong)間注(zhu)意觀察，我們(men)的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解(jie)決。