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細(xi)胞名稱

IOSE80 人卵巢正(zheng)常上皮細胞株

貨號

H055

種(zhong)屬(shu)

人

細(xi)胞來源

從ATCC/中科院(yuan)/協(xie)和醫院(yuan)等地引進

生長特(te)性

貼壁 上(shang)皮樣

培養(yang)條(tiao)件(jian)

培養(yang)基：90%RPMI-1640+10%FBS（推薦HAKATA優(you)等胎牛血清，貨號:HN-FBS-50）

溫度：37℃     氣相：95%空(kong)氣，5%二氧化碳

傳代

1.用(yong)75%酒精噴(pen)灑整(zheng)個(ge)培養瓶消(xiao)毒，將其平(ping)躺置(zhi)于培養箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打(da)開瓶口，將(jiang)其中的培養(yang)液去掉(diao)，再往(wang)其中加入5-6mL新(xin)鮮培(pei)養基(ji)(以(yi)T25培(pei)養瓶為例)并(bing)置于細(xi)(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)箱中培養(yang)(yang)，根(gen)據細(xi)(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)況及培養(yang)(yang)基顏色變化(hua)對其進行(xing)換液以及傳代，一般(ban)2到(dao)3天換一(yi)次液；

2.待(dai)細胞長滿(man)瓶底面積80%-90%，需要對(dui)其(qi)進行傳(chuan)代(dai)，傳(chuan)代(dai)比例為1:3到1:6；

3傳代步驟：將(jiang)0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化(hua)液置于37°預熱，倒掉培養瓶中的培養基，往培養瓶中加入(ru)3-5 ml PBS，輕晃洗(xi)滌后棄去。往瓶中(zhong)加1-2 ml預熱好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需時常取出置于顯(xian)微鏡下觀察，以顯(xian)微鏡下細胞(bao)(bao)觸(chu)角回收變(bian)圓、輕拍瓶(ping)壁(bi)見細胞(bao)(bao)脫落為zui佳消化時間，記錄(lu)zui佳消(xiao)化(hua)時間，以便于下(xia)次消(xiao)化(hua)），消(xiao)化(hua)好(hao)后加(jia)入3ml*培養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。用移液槍輕(qing)輕(qing)吹打(da)瓶(ping)壁上的細胞，使之(zhi)*脫落，然(ran)后(hou)收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄(qi)上清，加入*培養基重(zhong)懸(xuan)細胞，進行傳代。

保存

凍存條件(jian)：80%*培養基+10%FBS+10%DMSO

(備(bei)注：建議使(shi)用本(ben)公司(si)的(de)冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液(ye)直接重懸細(xi)胞，不(bu)能預熱后(hou)使用。)

保存條件：液氮(dan)存儲

供應(ying)限制

經供研究之用

常(chang)見問題(ti)及解(jie)決方(fang)案(an)

1.培養瓶有(you)破裂(lie)，培養液有(you)漏液：細胞極(ji)大可能(neng)會(hui)污染，所以我們會(hui)及(ji)時安排幫老(lao)師解決(jue)。

2.收到細胞后盡快(kuai)更(geng)換(huan)為含 10%血清的新鮮培養基(ji)，如因特殊情況需要繼續使(shi)用原瓶培養基(ji)，請(qing)在原瓶培養基(ji)中額外添加 10%的(de)血清（原瓶培(pei)養(yang)基的(de)繼(ji)續使用時間(jian)zui長不宜超(chao)過 72 小時）

3.細胞漂(piao)浮：培養瓶不開(kai)封，瓶口酒(jiu)精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時后觀察(cha)，如細(xi)胞大部(bu)分又貼回瓶(ping)底，表明(ming)細(xi)胞活力正常，剩余(yu)漂浮(fu)的(de)細(xi)胞可以(yi)去掉，留8-10ml培養液培養觀察(cha)，細胞生長至(zhi)匯合度80%，進行消化傳代；如細胞(bao)還是不貼壁，將細胞(bao)離心收集轉(zhuan)到新培(pei)養(yang)(yang)瓶，原(yuan)培(pei)養(yang)(yang)瓶加部分(fen)培(pei)養(yang)(yang)液繼續培(pei)養(yang)(yang)，中間注意觀察，我們的技(ji)術人員會一(yi)直跟蹤指導，直到問題解(jie)決。