乳酸脫氫(qing)酶ELISA試劑盒(he)，小鼠LDH試劑盒(he)說明書

產品名稱：小鼠乳(ru)酸脫氫酶（LDH）ELISA試劑盒

規(gui)格(ge)：48T/96T

產品(pin)特點：慧穎生物(wu)提供的小鼠(shu)乳酸脫氫酶（LDH）ELISA試劑盒(he)，采用純進(jin)口(kou)試劑和進(jin)口(kou)工(gong)藝(yi)流程(cheng)，高靈敏度、重(zhong)復性(xing)好、質(zhi)量穩定、特異性(xing)強，深(shen)的客戶重(zhong)復訂購使(shi)用。

乳酸脫氫酶ELISA試劑(ji)(ji)盒(he)，小鼠LDH試劑(ji)(ji)盒(he)說明書

試劑盒(he)采用(yong)(yong)雙抗體(ti)一步夾心法酶(mei)聯(lian)免疫吸附試驗(yan)（ELISA）。往預先包(bao)被乳酸脫氫(qing)酶(mei)（LDH）抗體(ti)的包(bao)被微孔(kong)中(zhong)，依次加入標本(ben)、標準品、HRP標記的檢(jian)測(ce)抗體(ti)，經過(guo)溫育并*洗(xi)滌。用(yong)(yong)底(di)物TMB顯色(se)，TMB在(zai)過(guo)氧化物酶(mei)的催化下(xia)轉化成(cheng)藍(lan)色(se)，并在(zai)酸的作用(yong)(yong)下(xia)轉化成(cheng)zui終的黃色(se)。顏(yan)色(se)的深淺和(he)樣品中(zhong)的乳酸脫氫(qing)酶(mei)（LDH）呈(cheng)正相關(guan)。用(yong)(yong)酶(mei)標儀在(zai)450nm 波長下(xia)測(ce)定吸光度(du)（OD 值），計算(suan)樣品濃度(du)。

樣(yang)品(pin)收集、處理及保存方法

 刺激，收集血(xue)液后(hou)，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘將血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速小心(xin)地分(fen)離。

2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘(zhong)取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分(fen)鐘(zhong)去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將(jiang)組織加入適量生理鹽(yan)水搗碎。3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。

5. 保(bao)存(cun)：如果樣本收集后不及時檢測(ce)，請按一次用量分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)于-20℃，避免反復凍(dong)融，在室溫(wen)下解凍(dong)并(bing)確(que)保(bao)樣品均勻地充分解凍(dong)。

自(zi)備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高(gao)精度加樣(yang)器及槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫(wen)箱

操作注意事項

1. 試(shi)劑盒保存在2-8℃，使(shi)用前室溫平衡20 分(fen)鐘。從冰(bing)箱取出的濃(nong)縮洗滌(di)液會(hui)有結(jie)(jie)晶(jing)，這屬(shu)于正(zheng)常現象，水浴加(jia)熱使(shi)結(jie)(jie)晶(jing)*溶解后再(zai)使(shi)用。

2. 實(shi)驗(yan)中不用(yong)的板條應立即放回自封(feng)袋中，密封(feng)（低(di)溫干燥）保存。

3. 濃度(du)為(wei)0 的S0 號(hao)標準品即(ji)可視為(wei)陰性(xing)對照(zhao)或者空白；按照(zhao)說明書操(cao)作時樣本已經稀釋5 倍，zui終結果乘以(yi)5 才是樣本實際濃度(du)。

4. 嚴格按照說明書(shu)中標明的時間、加液量及順序進行溫育操(cao)作。

5. 所有液體組分使用(yong)前充分搖勻。

試(shi)劑盒組成

名稱96孔(kong)配(pei)(pei)置48孔(kong)配(pei)(pei)置備(bei)注(zhu)

微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無(wu)

標(biao)準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無

樣本稀釋液6mL 3mL 無

檢測(ce)抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗(xi)滌(di)緩沖液25mL 15mL 按(an)說明(ming)書進行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物(wu)B 6mL 3mL 無

終(zhong)止液6mL 3mL 無

封(feng)板膜2 張(zhang)2 張(zhang)無(wu)

說明(ming)書1 份1 份無

自(zi)封袋1 個(ge)1 個(ge)無(wu)

注：標準(zhun)品(pin)（S0-S5）濃度依次為：0、0.5、1、2、4、8 IU/L

試劑(ji)的(de)準備

20×洗滌(di)緩(huan)沖液的(de)稀(xi)釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水按1：20 稀(xi)釋(shi)，即1 份的(de)20×洗滌(di)緩(huan)沖液加19 份的(de)蒸(zheng)餾(liu)水。

洗板(ban)方(fang)法(fa)

1. 手(shou)工洗(xi)板：甩(shuai)盡孔內液體(ti)，每孔加滿洗(xi)滌(di)液，靜置1min 后(hou)甩(shuai)盡孔內液體(ti)，在吸水紙上拍干(gan)，如此洗(xi)板5 次。

2. 自(zi)動(dong)洗板(ban)(ban)機(ji)：每孔注入洗液350μL，浸泡(pao)1min，洗板(ban)(ban)5 次。

操作步驟(zou)

1. 從室溫平衡20min 后的(de)鋁箔袋中取(qu)出所需板條(tiao)，剩余板條(tiao)用自封袋密封放(fang)回(hui)4℃。

2. 設(she)置(zhi)標準(zhun)品孔(kong)和樣本(ben)孔(kong)，標準(zhun)品孔(kong)各(ge)加不同(tong)濃度的標準(zhun)品50μL；

3. 樣本(ben)孔(kong)先(xian)加待測樣本(ben)10μL，再加樣本(ben)稀釋液40μL；空(kong)白孔(kong)不加。

4. 除空白孔(kong)外，標準品孔(kong)和樣本孔(kong)中每孔(kong)加入(ru)辣根過氧(yang)化物酶（HRP）標記的檢測抗(kang)體100μL，用封(feng)板膜封(feng)住反應孔(kong)，37℃水浴鍋(guo)或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去(qu)液(ye)體(ti)，吸水紙上(shang)拍干，每孔加滿洗(xi)(xi)滌液(ye)，靜置1min，甩(shuai)去(qu)洗(xi)(xi)滌液(ye)，吸水紙上(shang)拍干，如此重(zhong)復洗(xi)(xi)板5 次（也(ye)可用洗(xi)(xi)板機(ji)洗(xi)(xi)板）。

6. 每孔加入底物(wu)A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔(kong)加入終止(zhi)液50μL，15min 內，在450nm 波長處測定各孔(kong)的OD 值。

結果判斷

繪制標(biao)準(zhun)曲線(xian)：在Excel 工(gong)作(zuo)表中(zhong)，以標(biao)準(zhun)品濃度(du)作(zuo)橫(heng)坐標(biao)，對(dui)應OD 值作(zuo)縱坐標(biao)，繪制出標(biao)準(zhun)品線(xian)性回歸曲線(xian)，按(an)曲線(xian)方程計算(suan)各樣(yang)本濃度(du)值。

試劑盒(he)性(xing)能

1. 準(zhun)確(que)性：標準(zhun)品線性回歸與預期濃度相關(guan)系數R 值(zhi)，大(da)于等于0.9900。

2. 靈敏度(du)：zui低檢測濃度(du)小于(yu)0.1 IU/L。

3. 特(te)異(yi)性：不與其它可溶性結(jie)構類似物交叉反應。

4. 重(zhong)復性：板內、板間變異系數均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期(qi)：6 個月

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