產(chan)品名稱：核(he)因子KB試劑(ji)(ji)盒，ELISA試劑(ji)(ji)盒說(shuo)明書(shu)，小鼠NF-Kb試劑(ji)(ji)盒

規格：48T/96T

品牌：Deco

報價：2800元

優(you)惠價，請(qing)致(zhi)電：  ！

相(xiang)關 核因子KB試(shi)劑盒，ELISA試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)書，小鼠NF-Kb試(shi)劑盒 詳細(xi)說(shuo)明(ming)：

產(chan)品(pin)編號： HY01696

使用(yong)前*閱讀說明書。本酶聯(lian)免疫試(shi)劑(ji)盒是基于(yu)經典酶聯(lian)夾心(xin)技術原理，能(neng)測量小鼠NFκB，只能(neng)用(yong)于(yu)研究用(yong)途(tu)，不得用(yong)于(yu)醫學診斷。

工作原理

核因子κB（NF-Kb），是(shi)一種蛋白質分子(zi)(zi)，其結構為(wei)一種體(ti)內的(de)(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)誘導分子(zi)(zi)（biological trigger），是(shi)在體(ti)內許多疾病的(de)(de)(de)(de)生(sheng)理作(zuo)用(yong)上(shang)扮演了重要的(de)(de)(de)(de)角(jiao)色(se)(se)，從癌癥(zheng)到骨質疏松癥(zheng)，再到細(xi)菌感染，皆與(yu)之脫離(li)不了關系，NF-kB發(fa)現與(yu)哺乳動(dong)(dong)(dong)物(wu)的(de)(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)，平時(shi)結合與(yu)另一分子(zi)(zi)--IkB，IkB使得(de)NF-kB分子(zi)(zi)失(shi)去生(sheng)物(wu)活性，當一組(zu)啟動(dong)(dong)(dong)信號(hao)(hao)啟動(dong)(dong)(dong)NF-kB后(hou)(hou)，IkB脫離(li)NF-kB，NF-kB恢復(fu)活性，進(jin)入(ru)(ru)細(xi)胞(bao)(bao)核。NF-kB位(wei)于TLR下游信號(hao)(hao)通路的(de)(de)(de)(de)樞紐位(wei)置，當細(xi)胞(bao)(bao)受到生(sheng)物(wu)應激刺激后(hou)(hou)激活NF-kB，活化的(de)(de)(de)(de)NF-kB進(jin)入(ru)(ru)細(xi)胞(bao)(bao)核調節炎性細(xi)胞(bao)(bao)因(yin)子(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)表達，啟動(dong)(dong)(dong)針對(dui)病原微生(sheng)物(wu)的(de)(de)(de)(de)固有免(mian)(mian)疫(yi)(yi)和獲得(de)性免(mian)(mian)疫(yi)(yi)。所(suo)提供的(de)(de)(de)(de)ELISA Kit是(shi)典(dian)型的(de)(de)(de)(de)夾(jia)心法(fa)酶(mei)聯(lian)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)吸附測(ce)(ce)定(ding)試劑盒（ELISA）。預(yu)先包被(bei)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)體(ti)為(wei)多克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)。檢(jian)測(ce)(ce)相(xiang)抗(kang)體(ti)也(ye)為(wei)多克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)，經生(sheng)物(wu)素(su)（biotin）標(biao)記。樣品(pin)和生(sheng)物(wu)素(su)標(biao)記抗(kang)體(ti)先后(hou)(hou)加入(ru)(ru)酶(mei)標(biao)板孔(kong)反應后(hou)(hou)，PBS或TBS洗滌。隨后(hou)(hou)加入(ru)(ru)過(guo)(guo)氧(yang)化物(wu)酶(mei)標(biao)記的(de)(de)(de)(de)親(qin)和素(su)反應；經過(guo)(guo)PBS或TBS的(de)(de)(de)(de)*洗滌后(hou)(hou)用(yong)底物(wu)TMB顯色(se)(se)。TMB在過(guo)(guo)氧(yang)化物(wu)酶(mei)的(de)(de)(de)(de)催化下轉化成藍色(se)(se)，并在酸的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)下轉化成zui終的(de)(de)(de)(de)黃色(se)(se)。顏色(se)(se)的(de)(de)(de)(de)深淺和樣品(pin)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)待測(ce)(ce)因(yin)子(zi)(zi)呈正相(xiang)關。

每套試劑(ji)盒中內容（96T）

需(xu)要而未(wei)提供的試劑和器(qi)材

1． 37℃恒溫箱。

2． 標準規格酶標儀。

3． 自(zi)動洗板機。

4． 單(dan)通(tong)道或多通(tong)道可(ke)調(diao)節移液(ye)器以及其吸頭。

5． 蒸餾水，容量瓶等

6． 干凈的(de)試(shi)管和Eppendof管。

注意(yi)事項(xiang)

1． 從-20℃取出的(de)試(shi)劑盒(he)，在4℃解(jie)凍(dong)過(guo)夜。盒(he)內每一瓶(ping)解(jie)凍(dong)的(de)溶液在開啟(qi)瓶(ping)蓋之前(qian)都要輕輕搖勻，避免解(jie)凍(dong)時出現的(de)分(fen)層，否(fou)則會(hui)出現濃度不均一的(de)現象。

2． 開啟試劑盒之前要室溫平(ping)衡至少30分鐘。

3． 配制各種(zhong)試劑時(shi)，切(qie)記(ji)混勻！

4． 用戶在(zai)初次(ci)使用試(shi)(shi)劑盒時，應將各種試(shi)(shi)劑管(guan)離心數分鐘，以(yi)便試(shi)(shi)劑集中(zhong)到管(guan)底(di)。

5． 建議所有標準品、樣本都做雙(shuang)份檢(jian)測。

6． 要嚴格避免操作過程中酶(mei)標板(ban)干燥。干燥會使酶(mei)標板(ban)上生物成份迅(xun)速失(shi)活！

7． 為免(mian)交叉污染，要避(bi)免(mian)重(zhong)復使用手(shou)中的吸(xi)頭和(he)試管。

洗板(ban)方法

手工洗板方法：吸去(qu)（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的(de)液(ye)體；在實(shi)驗臺上鋪墊幾層(ceng)吸水紙(zhi)，酶標板朝(chao)下用力拍幾次；將推薦的(de)PBS或TBS洗滌緩沖液(ye)至(zhi)少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要(yao)，重(zhong)復此過程數(shu)次。

自動(dong)洗板(ban)：如果有自動(dong)洗板(ban)機，應在熟練(lian)使用(yong)后再用(yong)到正(zheng)式實驗(yan)過程中。

樣品的準備(bei)和保存(cun)

樣品如果不立(li)即分析，應分裝(zhuang)后冷凍(dong)保存(cun)，且避(bi)免反復凍(dong)融(rong)。

血清(qing)——用干(gan)凈試管收集(ji)血液，室溫(wen)凝固2小(xiao)時(shi)或4℃過夜，離心1000×g 10分(fen)鐘，收集(ji)血清(qing)。立即分(fen)析或分(fen)裝后-20℃冷凍保存。

細胞(bao)培養、組織(zhi)勻漿、體(ti)液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷(leng)凍保存。

樣品(pin)稀釋的一般原則

用戶(hu)須(xu)查閱文獻(xian)了解標本內待(dai)(dai)測因(yin)子(zi)的含量(liang)，決定適當(dang)的稀(xi)(xi)釋倍(bei)數，以使(shi)稀(xi)(xi)釋后(hou)樣(yang)品中待(dai)(dai)測因(yin)子(zi)的濃度(du)處于ELISA試劑(ji)盒的*檢測范圍。樣(yang)品的稀(xi)(xi)釋應有(you)詳細(xi)記錄。

試劑的準備和保存

A. 標準(zhun)品的稀釋(shi)和使用：在使用前(qian)2小時內(nei)準(zhun)備(bei)。將(jiang)凍干品管內(nei)加入(ru)1ml樣品稀釋(shi)液，*溶解后做倍比(bi)稀釋(shi)。

稀釋后的標準品在2小時內使用(yong)。

B．生(sheng)物素標記抗體工作(zuo)液：在使用前2小時內準備。

1． 根據每(mei)孔需要0.1ml計算總(zong)的用量（實(shi)際配制時應多(duo)配制0.1-0.2ml）。

2． 按(an)10ul生物(wu)素標記抗(kang)體加抗(kang)體稀(xi)釋液990ul的比(bi)例配制工作液。輕輕混勻。

C．親和素-過氧化(hua)物(wu)酶(mei)復合物(wu)（ABC）工(gong)作液的準(zhun)備：在使用前1小時內準(zhun)備。

1． 根據每孔需(xu)要(yao)0.1ml計算總的(de)用量（實(shi)配時(shi)應(ying)多配制0.1-0.2ml）。

2． 按(an)10ul親和素(su)-過氧(yang)化物(wu)酶復合物(wu)（ABC）加ABC稀(xi)釋液990ul的比(bi)例配制工作液。輕輕混勻(yun)。

D.  TMB顯(xian)色(se)(se)工作(zuo)液的準備：在(zai)使用之前30分鐘，按TMB顯(xian)色(se)(se)液A 9份(fen)加(jia) TMB顯(xian)色(se)(se)液B 1份(fen)的比(bi)例配制TMB顯(xian)色(se)(se)工作(zuo)液。

操(cao)作程序

1． 確定本次檢測(ce)所需的(de)已包被抗(kang)體的(de)酶(mei)標板孔數目。

2． 將倍(bei)比稀(xi)釋(shi)的標準品各0.1ml依(yi)次(ci)加入(ru)一排7孔(kong)中，1孔(kong)只加樣品稀(xi)釋(shi)液的作為對照。處理后(hou)的標本(ben)按100ul每(mei)孔(kong)加入(ru)。

3． 酶標板加上蓋，37℃反應90分鐘。

4． 反應后用自(zi)動(dong)洗(xi)板(ban)機(ji)吸(xi)(xi)去酶標(biao)板(ban)內(nei)的液體(ti)；或甩去酶標(biao)板(ban)內(nei)液體(ti)，再(zai)對著吸(xi)(xi)水紙拍幾(ji)下。洗(xi)滌(di)2次。

5． 將準備好的生(sheng)物素抗體工作液按每孔0.1ml依(yi)次加(jia)入。37℃反應60分鐘。

6． 0.01M TBS或(huo)0.01M PBS洗(xi)滌3次，每次浸(jin)泡1分鐘左(zuo)右。

7． 將準備好的(de)ABC工作液按每孔(kong)0.1ml依(yi)次加入。37℃反應(ying)30分鐘。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每(mei)次浸泡(pao)1-2分鐘(zhong)左右(you)。

9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反(fan)應，反(fan)應過程中(zhong)，要經常(chang)的觀察，當肉眼可見標(biao)準品的前(qian)3-4孔有(you)明顯的梯(ti)度藍色(se)(se)，后3-4孔差別(bie)不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色(se)(se)反(fan)應zui長不要超過30分(fen)鐘）。

10． 用酶(mei)標儀在450nm測定O.D.值。

11． 根據樣品的吸光值在坐標上找出對應(ying)的濃度。用(yong)戶也可以(yi)使用(yong)各種(zhong)應(ying)用(yong)軟件來計算。應(ying)記(ji)住由(you)于樣品稀釋(shi)了N倍(bei)，其(qi)實際(ji)濃度應(ying)該×N。

操(cao)作程序(xu)請致電咨詢： ！

檢測范圍：1000pg/ml→15.6pg/ml。

敏(min)感性(xing)：  ＜3pg/ml

特異(yi)性：  系統和(he)其(qi)它因子無交叉反應(ying)。

保存(cun)：    -20℃ [短(duan)期內（如兩周(zhou)）可4℃]

有效期：  12個(ge)月（-20℃）。

用(yong)途：    用(yong)于體(ti)(ti)外(wai)定(ding)量分析液體(ti)(ti)標(biao)本（通用(yong)型(xing)）。