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ME-180細胞(bao),人(ren)子宮頸表皮癌細胞(bao),細胞(bao)株細胞(bao)系(xi),ATCC細胞(bao)
產(chan)品名稱:人子宮頸(jing)表皮(pi)癌(ai)細胞
代號:ME-180
來源(yuan):美(mei)國ATCC
形(xing)態特性:上皮細(xi)胞
生(sheng)長(chang)特性:貼壁生(sheng)長(chang)
細(xi)(xi)胞特(te)性(xing)(xing):這株(zhu)細(xi)(xi)胞來源(yuan)于(yu)一個細(xi)(xi)胞集落不(bu)規(gui)則(ze)沒有顯著角質化的(de)侵染性(xing)(xing)鱗狀(zhuang)細(xi)(xi)胞癌。 單層(ceng)培養的(de)細(xi)(xi)胞間可以(yi)觀(guan)察到帶狀(zhuang)連接,也注意到有細(xi)(xi)胞質張力(li)絲。 1970年發現支原體污染并(bing)去除(chu)。 腫瘤壞死因子(TNF)α抑制ME-180的(de)生長。 這株(zhu)細(xi)(xi)胞含有人乳頭瘤病毒(HPV)DNA,與HPV-39的(de)同源(yuan)性(xing)(xing)高于(yu)HPV-18。
ME-180細胞培(pei)養:
一、 復蘇
1. 把凍(dong)存(cun)管從液(ye)氮中取出來(lai),立(li)即投入37℃水浴(yu)鍋(guo)中,輕(qing)微搖動。液(ye)體都融化后(hou)(大概1-1.5分(fen)鐘),拿出來(lai)噴點酒精放到超(chao)凈工作臺里。
2. 把上(shang)述細胞(bao)懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心(xin)管中(用培養基把凍存管洗(xi)一遍(bian),把粘在(zai)壁上(shang)的細胞(bao)都洗(xi)下來),1000轉(zhuan)離心(xin)5分鐘。
3. 把(ba)上(shang)清液倒掉,加1ml培養基(ji)把(ba)細(xi)(xi)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基(ji)的10cm培養皿中(zhong)前后左右輕輕搖動(dong),使培養皿中(zhong)的細(xi)(xi)胞均勻分布(bu)。
4. 標好細胞種類(lei)和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼(tie)壁后換(huan)培養基(ji)。
5. 3天(tian)換一次(ci)培養基。
二、 傳(chuan)代
1. 培養皿(min)中(zhong)的細胞(bao)覆蓋(gai)率達到80%-90%時要(yao)傳代。
2. 把原(yuan)有(you)培養基吸掉。
3. 加(jia)適當的胰(yi)蛋白(bai)酶(能覆(fu)蓋細胞就行(xing)),消化1-2分(fen)鐘(zhong)。
4. 細胞都變圓后(hou)加如入(ru)等體積的含血清的培養基終止(zhi)消化(hua)。
5. 用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來(lai)。
6. 把細胞吸到(dao)15ml的離(li)心管中,1000轉離(li)心5分鐘。
7. 倒(dao)掉(diao)上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。
8. 根據細胞(bao)(bao)種(zhong)類把細胞(bao)(bao)傳到幾個(ge)培(pei)(pei)養(yang)皿(min)中。一般,癌細胞(bao)(bao)分5個(ge),正常細胞(bao)(bao)傳3個(ge)。繼(ji)續(xu)培(pei)(pei)養(yang)。
三(san)、 凍存
把(ba)細胞消(xiao)化下來并離心(同上)。用(yong)配(pei)好的(de)凍(dong)存液把(ba)細胞懸浮(fu)起來,分裝到滅(mie)菌的(de)凍(dong)存管中(zhong),靜(jing)止(zhi)幾分鐘,寫明細胞種類,凍(dong)存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃第(di)二天,然(ran)后(hou)放(fang)到液氮灌中(zhong)保存。
凍存(cun)液的配制: 70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
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