大鼠apelin-12（apelin-12）Elisa試劑盒

標本的采集及保存

1. 血清：全血標本請于(yu)(yu)室溫放置2小(xiao)時或4℃過后于(yu)(yu)1000 x g離心(xin)20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于(yu)(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但應避(bi)免反復凍融(rong)。

2. 血漿(jiang)：可用EDTA或肝素作為抗(kang)凝劑，標(biao)本采集后30分鐘(zhong)內于2 - 8° C 1000 x g離(li)心15分鐘(zhong)，或將(jiang)標(biao)本放于-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融。

3. 其它生物標本(ben)：請1000 x g離(li)心(xin)20分鐘，取上清(qing)即可檢測，或(huo)將(jiang)標本(ben)放(fang)于-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但應避免反(fan)復凍融。

4. 樣本(ben)處理：血(xue)清或血(xue)漿標本(ben)推薦(jian)稀釋(shi)5,000倍。

注：以上標(biao)本(ben)置4℃保存(cun)應(ying)(ying)小于1周，-20℃或(huo)-80℃均應(ying)(ying)密封保存(cun)，-20℃不(bu)應(ying)(ying)超過(guo)1個月(yue)，-80℃不(bu)應(ying)(ying)超過(guo)2個月(yue)；標(biao)本(ben)溶血會影響zui后檢測(ce)結果，因此溶血標(biao)本(ben)不(bu)宜進(jin)行此項檢測(ce)。

大鼠apelin-12（apelin-12）Elisa試劑盒

操作步驟

 實驗(yan)開始(shi)前，各試劑均(jun)應(ying)平衡至室溫（試劑不能(neng)直接(jie)在(zai)37℃溶解(jie)）；試劑或樣(yang)(yang)(yang)品稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)時(shi)(shi)，均(jun)需混勻，混勻時(shi)(shi)盡量避(bi)免起(qi)泡。實驗(yan)前應(ying)預測樣(yang)(yang)(yang)品含量，如樣(yang)(yang)(yang)品濃度(du)過高(gao)時(shi)(shi)，應(ying)對樣(yang)(yang)(yang)品進行稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)，以使(shi)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)后(hou)的(de)樣(yang)(yang)(yang)品符合試劑盒的(de)檢測范圍，計算時(shi)(shi)再乘以相應(ying)的(de)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)倍數。

1. 加(jia)(jia)樣：分(fen)別設空(kong)白孔(kong)(kong)(kong)、標(biao)準(zhun)孔(kong)(kong)(kong)、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)(kong)(kong)。空(kong)白孔(kong)(kong)(kong)加(jia)(jia)樣品(pin)稀釋液(ye)100μl，余(yu)孔(kong)(kong)(kong)分(fen)別加(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)或待(dai)測樣品(pin)100μl，注(zhu)意不要(yao)有(you)氣泡，加(jia)(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)(jia)于酶標(biao)板孔(kong)(kong)(kong)底部，盡量不觸(chu)及孔(kong)(kong)(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻，酶標(biao)板加(jia)(jia)上蓋或覆膜，37℃反應(ying)120分(fen)鐘。為保證實驗(yan)結果(guo)有(you)效性，每(mei)次實驗(yan)請使用(yong)新的標(biao)準(zhun)品(pin)溶液(ye)。

2. 棄去液(ye)體，甩干，不用洗滌。每孔加(jia)(jia)檢測溶(rong)液(ye)A工作液(ye) 100μl（在使用前一小時內配制(zhi)），酶標板(ban)加(jia)(jia)上覆膜(mo), 37℃反應60分鐘。

3. 溫育60分鐘(zhong)后，棄(qi)去(qu)孔(kong)內液體，甩干(gan)，洗板3次，每(mei)次浸泡1-2分鐘(zhong)，大約400μl/每(mei)孔(kong)，甩干(gan)（也(ye)可(ke)輕拍(pai)將(jiang)孔(kong)內液體拍(pai)干(gan)）。

4. 每(mei)孔加檢(jian)測溶液B工(gong)作液（同(tong)檢(jian)測A工(gong)作液） 100μl，酶(mei)標(biao)板加上覆(fu)膜37℃反應(ying)60分鐘(zhong)。

5. 溫育60分鐘(zhong)后(hou)，棄去孔(kong)內液體(ti)，甩干(gan)，洗板5次(ci)，每次(ci)浸泡1-2分鐘(zhong)，350μl/每孔(kong)，甩干(gan)（也可輕拍(pai)將孔(kong)內液體(ti)拍(pai)干(gan)）。

6. 依序每(mei)孔(kong)加(jia)底(di)物溶液(ye)90μl，酶標板加(jia)上(shang)覆膜37℃避光顯(xian)色（30分(fen)鐘(zhong)內，此時肉眼可見標準品的前(qian)3-4孔(kong)有明顯(xian)的梯度蘭(lan)色，后3-4孔(kong)梯度不明顯(xian)，即可終(zhong)止）。

7. 依序(xu)每孔加(jia)(jia)終止溶液(ye)(ye)50μl，終止反應，此(ci)時(shi)藍色(se)立轉黃(huang)色(se)。終止液(ye)(ye)的(de)加(jia)(jia)入順(shun)序(xu)應盡量與底物液(ye)(ye)的(de)加(jia)(jia)入順(shun)序(xu)相同。為(wei)了(le)保證實驗結果的(de)準確性，底物反應時(shi)間(jian)到后(hou)應盡快加(jia)(jia)入終止液(ye)(ye)。

8. 用(yong)酶聯儀在(zai)450nm波(bo)長依序測量各孔的(de)光密度（OD值(zhi)）。 在(zai)加終(zhong)止液后立即進(jin)行檢測。 

相關鏈接：

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