Thermo Pierce 89983，SILAC Protein Quantitation Kit–DMEM

產品(pin)名(ming)稱(cheng)：SILAC蛋白定量試劑盒

品牌：Thermo Pierce

貨號：89983

組(zu)分：貨(huo)(huo)號：1860972 （SILAC Protein Quantitation Kit） +貨(huo)(huo)號：89986( Dialyzed FBS for SILAC,50ML )

儲存溫度：1860972 4°C，89986 -20°C

SILAC蛋白定量試劑盒(he)及試劑 用途介(jie)紹：

對(dui)于差(cha)異蛋白表達進行定量分析。

在細胞培養(yang)中(zhong)使用氨基酸進行穩定(ding)的(de)(de)同位(wei)素標記（SILAC）是鑒(jian)定(ding)和定(ding)量復雜蛋(dan)白樣品中(zhong)相關(guan)差異的(de)(de)變(bian)化(hua)的(de)(de)一種(zhong)有效的(de)(de)方法。SILAC方法通過體內代謝(xie)將“重的(de)(de)"13C-或15N標記的氨基酸整合到蛋白中然后進行質譜（MS）分析以便加快對蛋白的測定、鑒定、定量和理解。

應用：

?  可以使用專門針對干(gan)細胞(bao)的(de)(de)試劑(ji)盒對干(gan)細胞(bao)分(fen)化(hua)中(zhong)的(de)(de)蛋白進行鑒定。

?  可以(yi)對(dui)不同(tong)細胞處理后的(de)蛋白豐度(du)的(de)相關變化(hua)進行定量(liang)的(de)分析。

?  可以對沒有(you)抗體(ti)的(de)蛋白進(jin)行定量分析。

?  正常細胞vs.疾病(bing)細胞的(de)蛋白表達譜的(de)繪制(zhi)。

?  可以在一個實驗(yan)中對(dui)成千上萬的(de)蛋白進行鑒定和(he)定量。

 產品特點：

標記物能(neng)夠100%的整合到活(huo)細(xi)胞的蛋白中。

? 可(ke)重復 – 降低由(you)于樣品制備不同而造成的(de)實驗內差異(yi)。

? 靈活 – 培養基(ji)中缺乏(fa)L-賴(lai)氨(an)(an)酸(suan)和L-精氨(an)(an)酸(suan)兩種氨(an)(an)基(ji)酸(suan)，因此(ci)可以(yi)通過(guo)兩種氨(an)(an)基(ji)酸(suan)的(de)同位素標記更加*的(de)覆蓋整個蛋白質(zhi)組。

? 通用 – 可以對多種在DMEM或RPMI 1640培養基中能(neng)夠培養的(de)(de)哺乳動物細胞中表達的(de)(de)蛋白進行標記(ji)，這些細胞包(bao)括(kuo)HeLa，293T，COS7，U2OS，A549，A431，HepG2，NIH 3T3，Jurkat及其它。

? 兼容– 可以通過分化(hua)培(pei)養基測定人間(jian)質干細胞或小(xiao)鼠胚胎干細胞中調節發育的重要(yao)蛋白(bai)。

 SILAC需要(yao)在(zai)含(han)有(you)輕(qing)(qing)或重(zhong)的(de)(de)(de)必需氨基(ji)(ji)(ji)酸的(de)(de)(de)培養(yang)基(ji)(ji)(ji)中(zhong)培養(yang)哺乳動物(wu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)；例(li)如(ru)，分(fen)別含(han)有(you)12C6及(ji)13C6 L-賴氨酸。常規的(de)(de)(de)實驗(yan)包(bao)括在(zai)含(han)有(you)輕(qing)(qing)氨基(ji)(ji)(ji)酸（對照）的(de)(de)(de)培養(yang)基(ji)(ji)(ji)中(zhong)培養(yang)一批細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，同(tong)(tong)(tong)(tong)時(shi)在(zai)含(han)有(you)重(zhong)氨基(ji)(ji)(ji)酸（實驗(yan)組(zu)(zu)）的(de)(de)(de)培養(yang)基(ji)(ji)(ji)中(zhong)培養(yang)相同(tong)(tong)(tong)(tong)的(de)(de)(de)另(ling)一批細(xi)胞(bao)(bao)(bao)。輕(qing)(qing)、重(zhong)氨基(ji)(ji)(ji)酸通(tong)過自(zi)然的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)內蛋白(bai)合(he)成的(de)(de)(de)過程(cheng)整合(he)到(dao)(dao)蛋白(bai)中(zhong)。在(zai)對一個樣品進(jin)行(xing)化(hua)(hua)學處理或者遺傳操(cao)作使(shi)其蛋白(bai)質組(zu)(zu)發生變化(hua)(hua)之(zhi)后(hou)，將從兩(liang)種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)中(zhong)得(de)到(dao)(dao)的(de)(de)(de)蛋白(bai)等量的(de)(de)(de)混合(he)在(zai)一起(qi)，然后(hou)利(li)用(yong)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jin)行(xing)分(fen)離并利(li)用(yong)胰(yi)酶進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua)(hua)然后(hou)進(jin)行(xing)MS分(fen)析。由(you)于標(biao)記有(you)重(zhong)和輕(qing)(qing)氨基(ji)(ji)(ji)酸的(de)(de)(de)多肽在(zai)化(hua)(hua)學性質上(shang)是*相同(tong)(tong)(tong)(tong)的(de)(de)(de)，因此(ci)這(zhe)兩(liang)種(zhong)多肽在(zai)反相柱(zhu)洗脫時(shi)是同(tong)(tong)(tong)(tong)時(shi)洗脫的(de)(de)(de)，因此(ci)能夠在(zai)MS分(fen)析中(zhong)同(tong)(tong)(tong)(tong)時(shi)檢測(ce)到(dao)(dao)兩(liang)種(zhong)多肽。然后(hou)就可以利(li)用(yong)來自(zi)于每種(zhong)蛋白(bai)的(de)(de)(de)同(tong)(tong)(tong)(tong)位(wei)素標(biao)記的(de)(de)(de)多肽的(de)(de)(de)相

對峰(feng)強(qiang)度(du)(du)來確定(ding)處理后的(de)(de)樣品(pin)的(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)豐(feng)度(du)(du)的(de)(de)變化。（見下(xia)圖(tu)）我(wo)們提供幾種不同的(de)(de)Thermo Scientific Pierce SILAC試劑盒(he)，還提供能夠支持不同類型的(de)(de)哺乳(ru)動(dong)物(wu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)系生長的(de)(de)培養(yang)基(ji)，這(zhe)(zhe)些(xie)(xie)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)系甚至包(bao)括(kuo)人間(jian)質干細(xi)(xi)(xi)胞(bao)和(he)(he)小(xiao)鼠胚(pei)胎干細(xi)(xi)(xi)胞(bao)。每個試劑盒(he)都包(bao)括(kuo)同位(wei)素標(biao)記細(xi)(xi)(xi)胞(bao)所需(xu)的(de)(de)所有(you)試劑，這(zhe)(zhe)些(xie)(xie)試劑包(bao)括(kuo)培養(yang)基(ji)、重(zhong)和(he)(he)輕氨基(ji)酸(suan)對以(yi)及(ji)透析(xi)過的(de)(de)血(xue)清。幾種同位(wei)素標(biao)記的(de)(de)賴氨酸(suan)和(he)(he)精氨酸(suan)都是單獨提供的(de)(de)，因此可(ke)以(yi)進行(xing)(xing)多(duo)重(zhong)實驗和(he)(he)分析(xi)。當與Thermo Scientific蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)/多(duo)肽樣品(pin)富集產品(pin)結合使(shi)用時(shi)，可(ke)以(yi)使(shi)用Pierce SILAC蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)定(ding)量試劑盒(he)對低豐(feng)度(du)(du)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)進行(xing)(xing)MS分析(xi)，這(zhe)(zhe)些(xie)(xie)低豐(feng)度(du)(du)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)包(bao)括(kuo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)表面蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)器特異性蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)以(yi)及(ji)磷酸(suan)化蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)或糖蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)這(zhe)(zhe)些(xie)(xie)經(jing)過翻譯后修(xiu)飾的(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)。

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