MHCC97-L細胞(bao)，低轉移人肝癌細胞(bao) 來源：來源于中山醫院，生長(chang)緩慢

本(ben)公司出售的(de)MHCC97-L細(xi)胞僅供科研使(shi)用不得用于臨床(chuang)

MHCC97-L細(xi)(xi)胞，低(di)轉移人(ren)肝癌(ai)細(xi)(xi)胞 介紹(shao)：

細胞(bao)特(te)性：

1） 來源：肝癌

2） 形(xing)態：上皮細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵(jiao)母和(he)真菌檢測為陰性

5） 規格：T25瓶(ping)或者(zhe)1mL凍存(cun)管包(bao)裝，冬季適合2ML離(li)心(xin)管(guan)全(quan)血清包被運輸

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送(song)復蘇(su)存活細胞方式：（1）干冰運輸(shu)，收到后立即轉入液氮凍存或(huo)直接復蘇；（2）存活細胞(bao)(bao)，收到(dao)后應繼續(xu)生長，傳代(dai)達到(dao)細胞(bao)(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時，再進行(xing)凍存。具體(ti)操作見(jian)細胞(bao)(bao)培養步(bu)驟。

細胞培(pei)養步(bu)驟：

一．培養基及培養凍存條(tiao)件準備：

1） 準備DMEM培(pei)養(yang)基，85%；馬血(xue)清，10%；胎(tai)牛血清，5%。

2） 培養(yang)條件： 氣相(xiang)：空氣，95%；二氧(yang)化碳，5%。 溫度：37攝氏(shi)度，培養箱濕度為(wei)70%-80%。

3） 凍存液：90%*培(pei)養(yang)基，10%DMSO，現(xian)用現(xian)配。液(ye)氮儲存(cun)。

二． 細胞處理：

1） 復(fu)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液(ye)的凍存管在37℃水(shui)浴中迅速搖晃解凍，加(jia)入4mL培養基混(hun)合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加(jia)1-2mL培養基(ji)后吹勻。然后將所有細(xi)胞懸液(ye)加入培養瓶中培養次夜（或將細(xi)胞懸液(ye)加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養次夜）。第二(er)天換液并檢查(cha)細胞密度。

2） 細(xi)胞傳代：如果細(xi)胞密(mi)度達80%-90%，即可(ke)進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可(ke)參考以下方法：

1. 棄(qi)去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)培養(yang)瓶中，置于(yu)37℃培養箱中(zhong)消化1-2分(fen)鐘，然后在(zai)顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消化情況，若細(xi)胞(bao)大部分(fen)變圓并脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操作臺，輕敲幾(ji)下(xia)培養瓶后加(jia)少量(liang)培養基(ji)終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培(pei)養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘(zhong)，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹(chui)勻。

4. 將細(xi)胞懸液按1：2到1：5的比例分(fen)到新的含8ml培養基的新皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)。

對于懸浮(fu)細胞，傳代可參考(kao)以下方法(fa)：

方法(fa)一：收集細胞，1000RPM條件(jian)下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后(hou)吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的(de)比例分到新的(de)含(han)8ml培養基的新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yang)基后(hou)，將剩余細(xi)胞(bao)懸(xuan)起，將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1：2到1：3的(de)比例分到(dao)新(xin)的(de)含(han)8ml培養基的新皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)。

3）細(xi)(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)(xi)胞生長狀態良好時，可進(jin)行細(xi)(xi)胞凍(dong)存。貼壁細(xi)(xi)胞凍(dong)存時，棄去培養基后加入(ru)少量胰酶，細(xi)(xi)胞變(bian)圓脫落(luo)后，加入(ru)約1ml含血(xue)清的培(pei)養基(ji)后加入凍存管(guan)中，再添加10%DMSO后(hou)進(jin)行(xing)凍存。懸浮細(xi)胞凍存時，應將(jiang)細(xi)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘(zhong)，少量保(bao)存上清液（防(fang)止(zhi)細胞(bao)吸(xi)走），加(jia)入部(bu)分新鮮培養基，加(jia)入到凍(dong)存管中，在(zai)凍(dong)存管中加(jia)入10%DMSO后(hou)進行凍存(cun)。

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注意事項：

1. 收到細(xi)胞后，若發現干冰已揮(hui)發干凈、凍(dong)存管瓶(ping)蓋脫落、破損及細(xi)胞有污染，請(qing)立即與我們 ！

2. 所有動(dong)物(wu)細胞(bao)均視為有潛在的生物(wu)危害性，必須在二級生物(wu)安全臺內操作(zuo)，并(bing)請(qing)注意(yi)防護，所有廢液及接觸過此(ci)細胞(bao)的器皿(min)需要(yao)滅菌后方能丟棄。