人乳腺導管癌細胞BT-474【BT-474】細胞株；BT-474細胞株，人乳腺癌細胞，BT-474價格，BT-474細胞來源，BT-474培養條件，細胞株細胞系，人乳腺導管癌細胞BT-474形態，BT-474消化，BT-474人乳腺導管癌細胞株；盡在慧穎生物，訂購：！

細(xi)胞來源：人(ren)乳(ru)腺導管癌細(xi)胞

細(xi)(xi)胞(bao)(bao)簡介：BT-474細(xi)(xi)胞(bao)(bao)為人乳(ru)腺導(dao)(dao)管(guan)(guan)癌(ai)(ai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，來源于人乳(ru)腺導(dao)(dao)管(guan)(guan)癌(ai)(ai)，中文(wen)名為人乳(ru)腺導(dao)(dao)管(guan)(guan)癌(ai)(ai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，正常(chang)的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)形態為上皮樣，貼壁生長(chang)。

培養基：RPMI-1640 90%, Fetal Bovine Serum 10%

培養(yang)條件(jian)：37℃ 5% CO2

消(xiao)化條(tiao)件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA溶液，消(xiao)化5-10min

傳(chuan)化比例(li)：1：2-1：3

換液時間：3-4天換液一次

凍(dong)存液比例：85%培養基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO

凍存密度：1-3 ×10^6/管(guan)，液氮保(bao)存

庫存狀態：現貨

細胞純度：94％

細胞活力(li)：90％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）

細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)(jun)、酵母和真菌(jun)(jun)

慧穎生物出售高品質，傳代次數少，細胞飽滿，光澤度好，來源背景清晰，售后跟蹤及時到位，*的人乳腺導管癌(ai)細胞(bao)(bao)BT-474【BT-474】細胞(bao)(bao)株(zhu)@慧穎細胞庫出售400多種類細胞株細胞系，20多株耐藥株，細胞來源：中科院、美國ATCC、復旦大學、交通大學、DSMZ、UKNCC、BCRC、日本東京大學、日本IKA中心、Sciencell等。一對一服務，隨時解決細胞培養中疑難問題，跟蹤及時到位，幫您一起完成報告。

注意事項(xiang)：

高壓(ya)消毒實(shi)驗用(yong)品：操(cao)作臺上不是一次性(xing)的(de)物品均需(xu)做(zuo)滅菌處理，無法高壓(ya)的(de)物品應使用(yong)75%酒精消毒。

消毒操作(zuo)間和(he)操作(zuo)臺(tai)：使(shi)用(yong)75%酒精擦拭(shi)無菌間的墻面(mian)(mian)、地面(mian)(mian)，操作(zuo)臺(tai)的臺(tai)面(mian)(mian)，孵(fu)箱，離(li)(li)心機等(deng)。操作(zuo)前須用(yong)紫外線照射無菌間和(he)操作(zuo)臺(tai)30分鐘消毒。入(ru)無菌間須穿隔(ge)離(li)(li)服(fu)，戴手套、口(kou)罩(zhao)、帽子。用(yong)75%酒精洗去手套上的滑(hua)石粉。

無菌操作：操作時(shi)應盡量接(jie)近酒(jiu)精燈(deng)；拿取吸(xi)管(guan)時(shi)，避免接(jie)觸其(qi)使(shi)用端(duan)；不(bu)(bu)要在開(kai)口(kou)(kou)器(qi)皿(min)的(de)上方操作；吸(xi)取不(bu)(bu)同液體應更換吸(xi)管(guan)。不(bu)(bu)能碰瓶口(kou)(kou)。萬(wan)一碰到，更換吸(xi)管(guan)。

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利福(fu)平紙(zhi)片(pian)  5ug

鏈霉(mei)素紙片(pian)  10ug

鏈(lian)霉(mei)素紙片(pian)  300ug

卡那(nei)霉素紙片    30ug

慶大霉素紙片(pian)    10ug

慶大霉素紙片    120ug

四環素紙片  30ug

氯霉素紙片(pian)  30ug

紅霉(mei)素紙(zhi)片  15ug

多粘菌素B紙片(pian)  30ug

復方新諾明SMZ/TMP紙(zhi)片  25ug

林可霉素紙片    2ug

萬(wan)古霉(mei)素紙(zhi)片    30U

環丙(bing)沙星紙片    5ug

阿莫西林紙(zhi)片    10ug

洛美沙星紙(zhi)片(pian)    10ug

克拉霉素(su)紙片    15ug

左氟沙星(xing)紙片    5ug

羅紅(hong)霉素紙(zhi)片    15ug

磷霉(mei)素紙片  200ug

氧氟(fu)沙星紙片    5ug

氨(an)芐西林/棒(bang)酸紙片   30ug

克林霉素紙片(pian)    2ug

甲氧芐啶(ding)紙片    5ug

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丁胺卡那紙片    30ug

頭(tou)孢哌(pai)酮/舒巴坦紙(zhi)片(pian) 75/75ug

諾氟沙星紙片(pian)    10ug

氟羅(luo)沙星紙片    5ug

氨曲南紙(zhi)片  30ug

亞胺(an)培南紙片    10ug

強力(li)霉素紙(zhi)片    30ug

加(jia)替沙(sha)星紙片(pian)    5ug

司帕沙星(xing)紙片    5ug

頭孢(bao)他啶/棒(bang)酸紙片   30/10ug

頭孢噻肟/棒(bang)酸紙片   30/10ug

氨(an)芐(xia)西林/舒巴(ba)坦紙片(pian) 10/10ug

阿(a)奇霉素紙片    15ug

米諾環素紙片    30ug

的培養

【初代培養原理】

將動物機(ji)(ji)體(ti)的各種(zhong)組織從機(ji)(ji)體(ti)中(zhong)(zhong)取出，經各種(zhong)酶(mei)（常(chang)用胰蛋白酶(mei)）、螯合(he)劑(ji)（常(chang)用EDTA）或機(ji)(ji)械(xie)方法處理，分散成單細胞，置合(he)適(shi)的培養(yang)基中(zhong)(zhong)培養(yang)，使細胞得以生(sheng)存、生(sheng)長和(he)繁殖，這一過程(cheng)稱原代培養(yang)。

儀器：培(pei)養(yang)箱（調整至37℃），培(pei)養(yang)瓶(ping)、青霉素瓶(ping)、小(xiao)玻璃漏斗(dou)、平皿、吸(xi)管(guan)、移液管(guan)、紗布(bu)、手術器械、血球計數板、離(li)心機、水浴箱（37℃）

材料：動物組織塊

試劑(ji)：1640培養(yang)基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒(jiu)

【初代(dai)消化培養法(fa)】

（1）準(zhun)備：取各種已消毒(du)的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒(du)20分鐘(zhong)。開始工作(zuo)前先洗手、75%酒精擦拭手至肘(zhou)部(bu)。

（2）布局：點(dian)燃(ran)酒精(jing)燈(deng)，安裝吸管帽。

（3）處(chu)理組(zu)織：把(ba)組(zu)織塊置于燒杯中，用Hanks液(ye)漂洗2~3次，去除血污；如(ru)懷(huai)疑組(zu)織可能(neng)污染，可先置于含有青鏈霉(mei)素的混合液(ye)中30~60分鐘(zhong)。

（4）剪切：用眼科剪把組織(zhi)切成(cheng)2~3毫米大小的塊(kuai)，以便于消化。加入(ru)(ru)比組織(zhi)塊(kuai)總量多30~50倍的胰(yi)蛋白(bai)酶(mei)液，然(ran)后一并倒入(ru)(ru)三角燒(shao)瓶中，結扎瓶口(kou)或塞(sai)(sai)以膠塞(sai)(sai)。

（5）消(xiao)(xiao)化(hua)：或用(yong)恒溫水浴，或置(zhi)于37℃溫箱消(xiao)(xiao)化(hua)均可，消(xiao)(xiao)化(hua)中每隔20分鐘應搖動一次，如用(yong)電磁恒溫攪拌器消(xiao)(xiao)化(hua)更好(hao)。消(xiao)(xiao)化(hua)時間依(yi)組(zu)織(zhi)塊的大小(xiao)和組(zu)織(zhi)的硬(ying)度而定。

（6）分(fen)(fen)(fen)離(li)：在消(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)過程中見消(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)液發混濁(zhuo)時，可用吸(xi)管(guan)吸(xi)出少許消(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)液在鏡下觀察，如組織已分(fen)(fen)(fen)散成細(xi)胞團或單個細(xi)胞，立即終止消(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)，隨即通過適宜不銹鋼(gang)篩，濾掉尚未充分(fen)(fen)(fen)消(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)開的組織塊。低(di)速（500~1000轉/分(fen)(fen)(fen)）離(li)心消(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)液5分(fen)(fen)(fen)鐘，吸(xi)出上清，加(jia)入適量含有血清的培養液。

（7）計(ji)數(shu)：用計(ji)數(shu)板計(ji)數(shu)，如(ru)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液細(xi)胞(bao)密度過大，再補加培養液調整(zheng)后，分(fen)裝入(ru)培養瓶中。對大多數(shu)細(xi)胞(bao)來說(shuo)，pH要求在7.2~7.4范圍(wei)，培養液呈微紅色，如(ru)顏色偏黃，說(shuo)明液體變酸，可用NaHCO23調整(zheng)。

（8）培(pei)養(yang)：置于36.5℃溫箱培(pei)養(yang)，如用(yong)CO2溫箱培(pei)養(yang)，瓶(ping)口需用(yong)紗布(bu)棉塞(sai)或(huo)螺旋帽(mao)堵塞(sai)，紗布(bu)塞(sai)易生霉(mei)菌，每次換(huan)液時需要換(huan)新(xin)塞(sai)。

【初(chu)代(dai)組織塊(kuai)培養法】

《1》剪切(qie)(qie)：把組織小塊置于小燒杯或青霉素小瓶中(zhong)，用(yong)Hanks液漂洗二三次以去掉(diao)表(biao)面血污，吸靜Hanks液，用(yong)眼科剪反復剪切(qie)(qie)1mm3塊為止。

《2》擺(bai)(bai)布(bu)：用彎(wan)頭吸(xi)管(guan)吸(xi)取若干(gan)小塊(kuai)，置(zhi)于培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，用吸(xi)管(guan)彎(wan)頭把組織小塊(kuai)擺(bai)(bai)布(bu)在培養(yang)瓶(ping)底部，小塊(kuai)相互距(ju)離以0.5cm為宜，每一(yi)25ml培養(yang)瓶(ping)底可擺(bai)(bai)布(bu)20~30塊(kuai)。

《3》輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)翻轉培(pei)養瓶(ping)，另瓶(ping)底向上，注意翻瓶(ping)時(shi)(shi)勿另組織(zhi)小(xiao)塊流(liu)動(dong)，塞好瓶(ping)塞，置36.5℃溫箱培(pei)養2小(xiao)時(shi)(shi)左右（勿超過4小(xiao)時(shi)(shi)），使小(xiao)塊微干涸。

《培(pei)(pei)(pei)養》從(cong)微箱中(zhong)取出培(pei)(pei)(pei)養瓶，開(kai)塞，46度(du)斜持培(pei)(pei)(pei)養瓶，箱瓶底(di)腳部輕(qing)輕(qing)注入培(pei)(pei)(pei)養液少許，然后緩(huan)緩(huan)再(zai)把培(pei)(pei)(pei)養瓶翻轉過來，讓培(pei)(pei)(pei)養液慢(man)慢(man)覆(fu)蓋(gai)附于瓶地上(shang)的(de)組織(zhi)小塊(kuai)。置溫箱中(zhong)靜止培(pei)(pei)(pei)養。待細胞從(cong)組織(zhi)塊(kuai)游(you)出數量(liang)增多后。再(zai)補加(jia)培(pei)(pei)(pei)養液。

【傳代(dai)培(pei)養法原理】

細(xi)胞(bao)在培(pei)養瓶(ping)長成致密(mi)單層后(hou)，已基本上飽和，為使細(xi)胞(bao)能繼續生長，同時也(ye)將細(xi)胞(bao)數量擴大(da)，就必須(xu)進(jin)行傳(chuan)代（再培(pei)養）。 傳(chuan)代培(pei)養也(ye)是一(yi)種(zhong)將細(xi)胞(bao)種(zhong)保存下去的方法。同時也(ye)是利用培(pei)養細(xi)胞(bao)進(jin)行各種(zhong)實(shi)驗的必經(jing)過程(cheng)。懸浮型細(xi)胞(bao)直接分(fen)瓶(ping)就可(ke)以，而貼壁(bi)細(xi)胞(bao)需經(jing)消化后(hou)才能分(fen)瓶(ping)。

【材料和(he)試劑】

1）細胞：貼壁細胞株

2）試(shi)劑(ji)：0.25％胰(yi)酶、DMEM 90%,德(de)國SERANA胎牛血清(qing) Fetal Bovine Serum 10%

3）儀器和(he)器材(cai)：倒置(zhi)顯微鏡，培(pei)養箱、培(pei)養瓶、吸管、廢液缸等

【操作步驟】

1）吸除培(pei)養瓶(ping)內舊(jiu)培(pei)養液。

2）向瓶內(nei)加(jia)入胰蛋白酶(mei)和EDTA混(hun)合液少許，以能覆(fu)滿瓶底為限。

3）置溫箱中(zhong)2~5分鐘，當發現細(xi)胞質回縮，細(xi)胞間(jian)隙增大后，立(li)即終(zhong)止消化。

4）吸(xi)除(chu)消(xiao)化液(ye)，向瓶內注(zhu)入(ru)(ru)Hanks液(ye)數毫(hao)升，輕(qing)輕(qing)轉(zhuan)動培養(yang)瓶，把殘(can)余消(xiao)化液(ye)沖掉(diao)。注(zhu)意(yi)加Hanks液(ye)沖洗細胞時，動作要輕(qing)，以(yi)免把已松動的(de)細胞沖掉(diao)流(liu)失，如用(yong)胰蛋白酶(mei)液(ye)單獨消(xiao)化，吸(xi)除(chu)胰蛋白酶(mei)液(ye)后，可不(bu)用(yong)Hanks液(ye)沖洗，直接(jie)加入(ru)(ru)培養(yang)液(ye)。

5）用吸管(guan)吸取營養液輕(qing)輕(qing)反復吹打瓶壁細胞(bao)，使之從瓶壁脫離形(xing)成細胞(bao)懸液。

6）計(ji)數板計(ji)數后，把細胞(bao)懸液分(fen)成等份分(fen)裝(zhuang)入數個培養(yang)(yang)瓶中(zhong)，置溫箱中(zhong)培養(yang)(yang)。

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HaCaT人永生(sheng)化表皮細胞株

A431人皮膚鱗(lin)癌細胞株

CNE人鼻咽癌細胞株(zhu)

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注意：換液時一(yi)半用(yong)我們的培養基，一(yi)半用(yong)你們的，以(yi)免細(xi)胞(bao)不(bu)適應而造成(cheng)生長不(bu)好。