HT-3細(xi)胞(bao) 細(xi)胞(bao)株培養(yang) 由上(shang)海慧穎(ying)生物科技(ji)有(you)限公(gong)司提供

產品名(ming)稱(cheng)：HT-3細胞

中(zhong)午名(ming)稱：人(ren)子(zi)宮頸癌細(xi)胞(bao)

生長狀態(tai)：貼壁(bi)|懸(xuan)浮|半(ban)貼壁(bi)半(ban)懸(xuan)浮

細胞形(xing)(xing)態：上皮樣(yang)|成纖維細胞樣(yang)|鎖形(xing)(xing)|不規(gui)則(ze)

培養(yang)基：1640|DMEM|IMDM|EMEM

庫存狀態(tai)：現貨(huo)

慧穎生物提(ti)供400多種類細(xi)(xi)胞(bao)株(zhu)(zhu)(zhu)細(xi)(xi)胞(bao)系，20多株(zhu)(zhu)(zhu)穩(wen)定耐(nai)藥株(zhu)(zhu)(zhu)，細(xi)(xi)胞(bao)狀態良好，存活率高(gao)，活性強(qiang)，*，復(fu)蘇周期短(duan)，售(shou)后(hou)跟蹤及時到位。2016年新學期開(kai)學，*，凡購買我(wo)單位細(xi)(xi)胞(bao)株(zhu)(zhu)(zhu)，我(wo)司(si)可提(ti)供德(de)國*SERANA品(pin)牌南美源胎(tai)牛血清(qing)試(shi)用(yong)裝約(yue)20-50ML/瓶裝，讓您的細(xi)(xi)胞(bao)澎湃，潤(run)起來(lai)，具體(ti)活動詳(xiang)情，請致電： 4！

HT-3細(xi)(xi)胞 細(xi)(xi)胞株(zhu)培養（細胞(bao)(bao)(bao)培養(yang)中常見的(de)生物污(wu)(wu)染(ran)類(lei)型有7種，分別是細菌污(wu)(wu)染(ran)、支原體(ti)污(wu)(wu)染(ran)、原蟲(chong)污(wu)(wu)染(ran)、黑膠蟲(chong)污(wu)(wu)染(ran)、真(zhen)菌污(wu)(wu)染(ran)、病毒(du)污(wu)(wu)染(ran)以及非細胞(bao)(bao)(bao)污(wu)(wu)染(ran)，那么(me)他們污(wu)(wu)染(ran)細胞(bao)(bao)(bao)的(de)特點分別是什(shen)么(me)呢？怎樣(yang)能夠減少污(wu)(wu)染(ran)現象的(de)發生？）

1-細(xi)菌

細(xi)菌(jun)污(wu)染(ran)常(chang)見(jian)的有(you)(you)大(da)腸桿菌(jun)，葡萄(tao)球菌(jun)等。細(xi)菌(jun)污(wu)染(ran)較(jiao)易發(fa)現，在(zai)普通倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下為(wei)黑(hei)色細(xi)沙狀，培(pei)養(yang)(yang)液(ye)一般(ban)會(hui)在(zai)短時(shi)間(jian)內變黃，有(you)(you)時(shi)靜置(zhi)的培(pei)養(yang)(yang)液(ye)不混，稍加震(zhen)蕩(dang)會(hui)有(you)(you)很多混濁物(wu)漂(piao)起。顯微(wei)鏡(jing)下可見(jian)培(pei)養(yang)(yang)液(ye)中有(you)(you)大(da)量圓球狀顆(ke)粒物(wu)漂(piao)浮，有(you)(you)時(shi)在(zai)細(xi)胞表面(mian)及周圍有(you)(you)大(da)量細(xi)菌(jun)存在(zai)，細(xi)胞停止生(sheng)長并有(you)(you)中毒表現。

處理：①在(zai)培(pei)養(yang)液中加入相應的抗生素，能夠預防絕大(da)多數的細菌污(wu)染。

2-真(zhen)菌

真菌(jun)(jun)(jun)污染(ran)是細胞培養(yang)過程(cheng)中(zhong)zui常(chang)見的一(yi)種，尤其(qi)梅雨季節(jie)快要(yao)到(dao)了，進(jin)行(xing)細胞培養(yang)時更(geng)易污染(ran)。污染(ran)細胞的多為煙曲霉(mei)、黑(hei)曲霉(mei)、毛霉(mei)菌(jun)(jun)(jun)、孢子(zi)霉(mei)、白念(nian)珠菌(jun)(jun)(jun)、酵母菌(jun)(jun)(jun)等。霉(mei)菌(jun)(jun)(jun)污染(ran)后多數在培養(yang)液(ye)中(zhong)形成白色或(huo)淺黃色漂浮物。一(yi)般肉眼可見，較易被發(fa)現，短(duan)期內培養(yang)液(ye)多不混(hun)濁，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下可見于細胞之間縱橫交錯(cuo)穿行(xing)的絲(si)狀、管(guan)狀、及(ji)樹(shu)枝(zhi)狀菌(jun)(jun)(jun)絲(si)，并懸(xuan)浮飄蕩在培養(yang)液(ye)中(zhong)。

很多菌絲(si)在(zai)高倍(bei)鏡(jing)可見到有鏈狀(zhuang)排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形態呈卵形，散在(zai)細(xi)胞(bao)周邊和細(xi)胞(bao)之間生長(chang)(chang)。鏡(jing)下(xia)看時，要(yao)將培養瓶(ping)用(yong)酒精棉球(qiu)擦干凈，以(yi)防(fang)止(zhi)與瓶(ping)外尤其瓶(ping)底外面生長(chang)(chang)的菌絲(si)相混淆。

真菌污染后，細胞生(sheng)長(chang)變慢，但zui后由于營養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。真菌生(sheng)長(chang)的比(bi)較慢，不象細菌那(nei)么容易(yi)被(bei)發(fa)現(xian)，但是一(yi)旦(dan)發(fa)現(xian)有它的存在細胞就被(bei)污染了，也(ye)很(hen)難救(jiu)活了。

3-支原體

支原體的(de)大小(xiao)介于細菌和(he)病(bing)毒(du)之間(jian)，是一種獨立生(sheng)(sheng)活的(de)微生(sheng)(sheng)物。對熱敏感(gan)，對一般抗生(sheng)(sheng)素不敏感(gan)。支原體的(de)形態多變，多吸附在(zai)細胞表面和(he)細胞之間(jian)。電鏡(jing)下觀察(cha)，中心有(you)高密度的(de)密集顆(ke)粒，橫(heng)斷面與細胞微絨毛相似。

因國內(nei)的血清大多(duo)數(shu)都沒有做支(zhi)原體(ti)(ti)陰性檢測(ce)，而(er)支(zhi)原體(ti)(ti)又是牛血清中zui常見的微生物之一(yi)。支(zhi)原體(ti)(ti)污染細(xi)胞后，培養液(ye)輕微發生混(hun)濁．但細(xi)胞變化不顯(xian)著，隨著細(xi)胞的培養會慢(man)慢(man)死亡。

支原體污染(ran)檢測（熒(ying)(ying)光(guang)染(ran)色(se)(se)法）：DNA和與DNA特(te)異性結(jie)合的(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)染(ran)料結(jie)合，使(shi)得支原體的(de)(de)DNA著色(se)(se)，然后用熒(ying)(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)。鏡(jing)下(xia)支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的(de)(de)亮(liang)綠(lv)色(se)(se)小(xiao)點。

解決：

1）抗生素(su)排除法(fa)：支(zhi)原體(ti)污染預防比解決好。如果不(bu)(bu)小心污染后，可加入(ru)高濃(nong)度抗生素(su)（常(chang)規使用(yong)的5倍(bei)濃(nong)度）作用(yong)24-48小時，再換(huan)入(ru)常(chang)規培養液，但(dan)該法(fa)不(bu)(bu)保證有(you)效。推薦用(yong)量：慶大霉(mei)素(su) 200μg/ml ,四(si)環素(su)10μg/ml ，卡那霉(mei)素(su)50μg/ml 。

2）加溫(wen)除菌：支原(yuan)體(ti)(ti)不耐熱，可以對(dui)支原(yuan)體(ti)(ti)污(wu)染的(de)細(xi)胞(bao)熱處理除菌。因高(gao)溫(wen)對(dui)細(xi)胞(bao)本(ben)身也會產生一定影響(xiang)，故熱處理前需先進行預實驗，確定對(dui)細(xi)胞(bao)影響(xiang)zui小(xiao)而能zui大(da)程度(du)的(de)殺死(si)支原(yuan)體(ti)(ti)的(de)時間。

4-黑膠蟲

黑(hei)膠蟲的(de)存在(zai)目前尚有(you)爭議(yi)，其在(zai)低倍(bei)下為黑(hei)色點狀(zhuang)，高倍(bei)下可看見黑(hei)色的(de)小蟲游來游去，培養液也是(shi)不渾的(de)，對細(xi)胞生長狀(zhuang)態(tai)不會有(you)明顯影(ying)響，在(zai)細(xi)胞增殖(zhi)旺盛之后會自(zi)然消(xiao)失(shi)，除更換血清(qing)外無須特殊(shu)處理。

5-原蟲

培(pei)養液可輕微渾(hun)濁，顯(xian)微鏡下那些細(xi)(xi)(xi)小的(de)點狀(zhuang)物數量非常多(duo)，輕微活動，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)雖(sui)然(ran)可以生長但(dan)(dan)繁(fan)殖速度卻明(ming)顯(xian)減慢(man)，而(er)且細(xi)(xi)(xi)胞(bao)狀(zhuang)態不好(hao)，邊(bian)緣不清楚，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)不透亮。他們與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)可共(gong)生但(dan)(dan)會與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)爭奪營養。這種共(gong)生是(shi)非常普(pu)遍的(de)，但(dan)(dan)他們的(de)數量小，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)站優勢所以不會影響到細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)正常生長，只有當(dang)他們到達一(yi)定(ding)的(de)數量時(shi)就(jiu)會影響到細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)生長，zui終形成惡(e)性循環。

6-病毒

組(zu)織細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)過程中，如果沒(mei)有(you)除(chu)去(qu)潛在的病(bing)(bing)毒(du)(du)，就會產生病(bing)(bing)毒(du)(du)污染(ran)。目(mu)前，從原(yuan)代猴腎細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的培(pei)養(yang)中已發(fa)現(xian)不少于20種血清性(xing)病(bing)(bing)毒(du)(du)。 盡管病(bing)(bing)毒(du)(du)污染(ran)的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)不影響原(yuan)代培(pei)養(yang)，但生產疫苗是不安全的。因(yin)此，潛在病(bing)(bing)毒(du)(du)是細(xi)(xi)胞(bao)(bao)大量生產和疫苗、干擾(rao)素等生物(wu)制品制作中的難題。

7-非同種細(xi)胞(bao)污染

即細(xi)胞(bao)(bao)交叉(cha)污(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)，由(you)于細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)操作時(shi)各細(xi)胞(bao)(bao)株(zhu)所(suo)(suo)需的器材(cai)和溶(rong)液沒有嚴格分開，往往會使一種細(xi)胞(bao)(bao)被(bei)另一種細(xi)胞(bao)(bao)污(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)。目前，世界上已有幾十種細(xi)胞(bao)(bao)都被(bei)HeLa細(xi)胞(bao)(bao)所(suo)(suo)污(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)，致使許多實驗宣(xuan)告(gao)無效。非細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)物所(suo)(suo)造成(cheng)的化(hua)學(xue)成(cheng)分的污(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)也偶有發生，大多是由(you)于細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)所(suo)(suo)需物品清洗消毒不*而帶入(ru)一些有毒化(hua)學(xue)物質(zhi)所(suo)(suo)致。

污染是(shi)細(xi)胞培養的(de)大(da)敵，預防和避免污染是(shi)成功(gong)培養細(xi)胞的(de)關鍵之一。危機意(yi)識要貫徹(che)實驗的(de)始終，否(fou)則不(bu)僅浪費時間，而且浪費人力(li)、物(wu)力(li)，甚至造成無法彌補的(de)損失。

一、HT-3細(xi)胞(bao) 細(xi)胞(bao)株(zhu)培(pei)養污染的預防

預防(fang)是防(fang)止細胞(bao)培(pei)養(yang)過程中發(fa)生污(wu)染(ran)的(de)辦法。只有(you)預防(fang)工作做(zuo)在前，才能(neng)將發(fa)生污(wu)染(ran)的(de)可能(neng)性降到zui小程度。一般預防(fang)可從以下幾方面著(zhu)手：

（一）從操作(zuo)者做(zuo)起

1、操(cao)作者責(ze)任(ren)心(xin)要(yao)(yao)強，要(yao)(yao)細心(xin)穩(wen)重，操(cao)作技術(shu)要(yao)(yao)熟(shu)練。進無菌室(shi)前要(yao)(yao)用(yong)肥皂洗(xi)手或用(yong)5%新潔爾滅浸(jin)泡5分鐘(zhong)，按規(gui)定(ding)穿隔離衣。進入后關好門，坐下來盡量少走動(dong)。工作開始要(yao)(yao)先(xian)用(yong)75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事(shi)先(xian)要(yao)(yao)嚴格(ge)檢查器材、溶(rong)液和培養(yang)物，不要(yao)(yao)把污(wu)染品或未經(jing)消毒的物品帶入無菌室(shi)內，更(geng)不能隨便使(shi)用(yong)，以免造成大批污(wu)染。

2、操作(zuo)(zuo)者動作(zuo)(zuo)要輕，必(bi)須在火焰周圍無菌區內打開瓶(ping)口，并將瓶(ping)口轉(zhuan)動燒灼。操作(zuo)(zuo)時盡量(liang)不要談(tan)話，若打噴嚏或咳(ke)嗽(sou)應轉(zhuan)向背面(mian)。

3、操作時要常更換吸管(guan)，切(qie)勿一根吸管(guan)做到底(di)。一旦發現吸管(guan)口接觸了手和其(qi)他污染物品應(ying)棄去。實驗完畢及(ji)時收拾，保持實驗室清潔整齊，zui后用消(xiao)毒水浸(jin)泡的(de)紗布擦臺(tai)面。

（二(er)）從物品(pin)、用品(pin)消毒滅菌(jun)著手

細(xi)胞培(pei)養(yang)所用(yong)物品清(qing)洗、消毒要*，各種(zhong)溶液滅菌(jun)除菌(jun)要仔細(xi)，并在(zai)無菌(jun)試驗(yan)陰性后才能使用(yong)。操作室及剩(sheng)余的無菌(jun)器材(cai)要定期清(qing)潔消毒滅菌(jun)。

（三）防止細(xi)胞(bao)交叉污染(ran)

在進(jin)行多種細胞培養(yang)操作時(shi)，所用(yong)器具要嚴格(ge)區分(fen)，做上標記便于辨別。并(bing)按順序進(jin)行操作，避免一起(qi)進(jin)行時(shi)易發(fa)生混亂。

在進(jin)行換(huan)液或傳代操(cao)作時，注射器和滴管不要(yao)觸及細胞培(pei)養瓶(ping)瓶(ping)口，以免把細胞帶到培(pei)養液中污染其(qi)他細胞。

所有細胞一旦(dan)購置(zhi)，或從別處引入(ru)，或自己建立，均應及早留種凍存(cun)，一旦(dan)發(fa)生污染可棄之(zhi)復蘇，重新培養。

二、污染(ran)的清除

培(pei)養細胞(bao)一經污(wu)染，多(duo)數較難(nan)處理(li)。如(ru)果污(wu)染細胞(bao)價(jia)值(zhi)不大，宜棄之；有(you)細胞(bao)株(zhu)留(liu)存的或(huo)可(ke)購(gou)置(zhi)的，可(ke)在尋找(zhao)原因后*消(xiao)毒操作室，復蘇或(huo)重(zhong)(zhong)新(xin)購(gou)置(zhi)細胞(bao)，再培(pei)養。若(ruo)污(wu)染細胞(bao)價(jia)值(zhi)較大，又難(nan)于(yu)重(zhong)(zhong)新(xin)得到，可(ke)采取以下(xia)辦(ban)法(fa)清(qing)除。

（一）使用抗(kang)生素

抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)對(dui)殺(sha)滅(mie)細菌(jun)較有(you)效(xiao)(xiao)。聯合用(yong)(yong)(yong)藥(yao)比(bi)單(dan)獨用(yong)(yong)(yong)藥(yao)效(xiao)(xiao)果(guo)好。預(yu)防用(yong)(yong)(yong)藥(yao)比(bi)污染后(hou)再(zai)(zai)用(yong)(yong)(yong)藥(yao)效(xiao)(xiao)果(guo)好。預(yu)防用(yong)(yong)(yong)藥(yao)一般用(yong)(yong)(yong)雙抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)（青(qing)霉素(su)(su)(su)100u/mL加鏈(lian)霉素(su)(su)(su)100μg/mL），污染后(hou)清除用(yong)(yong)(yong)藥(yao)需采用(yong)(yong)(yong)大于(yu)常用(yong)(yong)(yong)量(liang)5～10倍的(de)沖洗法，于(yu)加藥(yao)后(hou)作用(yong)(yong)(yong)24～48小時，再(zai)(zai)換(huan)常規培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)。此法在污染早期可(ke)能有(you)效(xiao)(xiao)。所用(yong)(yong)(yong)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)品種除青(qing)霉素(su)(su)(su)、鏈(lian)霉素(su)(su)(su)外，還可(ke)用(yong)(yong)(yong)慶大霉素(su)(su)(su)、卡(ka)那霉素(su)(su)(su)、多粘菌(jun)素(su)(su)(su)、四(si)環(huan)(huan)素(su)(su)(su)、制霉菌(jun)素(su)(su)(su)等(deng)。常用(yong)(yong)(yong)400～800μg/mL卡(ka)那霉素(su)(su)(su)或200μg/mL四(si)環(huan)(huan)素(su)(su)(su)處理，每隔2～3日(ri)換(huan)液(ye)1次，傳1～2代進行治療。近年來有(you)報(bao)道，4-氟(fu)，2-羥(qian)基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳(er)素(su)(su)(su)衍生(sheng)物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四(si)環(huan)(huan)素(su)(su)(su)衍生(sheng)物（BM-2）等(deng)三種抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)單(dan)用(yong)(yong)(yong)或合用(yong)(yong)(yong)對(dui)殺(sha)滅(mie)支原體(ti)有(you)效(xiao)(xiao)。這三種抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)均用(yong)(yong)(yong)PBS配成(cheng)250濃(nong)縮液(ye)，-20℃保存備用(yong)(yong)(yong)，使用(yong)(yong)(yong)濃(nong)度(du)Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。使用(yong)(yong)(yong)時先(xian)吸(xi)除污染的(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)，加入(ru)含BM-1的(de)RPMI1640培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)，3天后(hou)再(zai)(zai)吸(xi)除培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)，加入(ru)含BM-2的(de)RPMI1640培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)，培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)4天，如此連續(xu)3個輪次，直至用(yong)(yong)(yong)33258熒光染色鏡檢(jian)證明已清除支原體(ti)后(hou)，再(zai)(zai)加正常培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)傳代3-4次。

（二）使用支原體(ti)特異性血清

用(yong)5%的兔支(zhi)原體免疫血(xue)清（血(xue)凝效價1:320以上）可去(qu)除支(zhi)原體污(wu)染(ran)，因特異抗(kang)體可抑制(zhi)支(zhi)原體生長，故經抗(kang)血(xue)清處理后11天(tian)即轉為陰(yin)性，并且5個(ge)月后仍為陰(yin)性。但此法比較麻煩，不如用(yong)抗(kang)生素方便、經濟。

（三(san)）加溫(wen)處(chu)理

將污染的組織(zhi)培(pei)養物放在41℃培(pei)養18小(xiao)時，可殺死(si)支原體(ti)(ti)，但對細胞有不良影(ying)響(xiang)(xiang)。所以(yi)在處(chu)(chu)理前要進(jin)行(xing)預試驗，摸索能zui大限度殺死(si)支原體(ti)(ti)又對細胞影(ying)響(xiang)(xiang)zui小(xiao)的加熱時間。此法有時不可靠。若(ruo)先用藥物處(chu)(chu)理后(hou)，再以(yi)41℃加溫處(chu)(chu)理效果更佳。

（四）其(qi)他方法

除(chu)了上(shang)述去除(chu)污(wu)(wu)染的方法(fa)外，還有動(dong)物(wu)體(ti)內(nei)接種除(chu)菌(jun)法(fa)、巨噬(shi)細胞吞噬(shi)法(fa)、污(wu)(wu)染培養瓶中加(jia)溴尿(niao)嘧啶(ding)再(zai)用光照(zhao)射的方法(fa)及(ji)過濾(lv)法(fa)等，但均較麻煩，且效(xiao)果不確定。所以(yi)一旦(dan)支原體(ti)污(wu)(wu)染，除(chu)非有特別重要價值，一般均棄之(zhi)重新培養。

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