2016年新(xin)學期開學之際，慧(hui)穎(ying)(ying)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)庫(ku)人宮頸(jing)(jing)癌細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)系熱賣中，慧(hui)穎(ying)(ying)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)庫(ku)人宮頸(jing)(jing)癌細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)種類多，囊括：Hela細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、HT-3細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、C33A細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、SN12C細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、SKG-IIIa細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、Hela S3細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、DoTc2-4510細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、U14細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、Ca Ski細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、Hela-s3細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、C-33 A細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、ME-180細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、MS751細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、SiHa細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)等，*，存(cun)活(huo)率高，活(huo)性強，*，凡購買我單位細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)株，我司可提供德(de)國*SERANA品牌南美源胎牛血清試用裝約20-50ML/瓶裝，讓您的細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)澎湃，潤起來，具體活(huo)動詳情，請致電： 4！

人(ren)宮頸癌(ai)細胞系熱(re)賣，Hela，HT-3，Hela，C33A，Ca Ski，SN12C細胞（細胞培養中常(chang)見的生物污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)類型有7種，分別是細菌污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)、支原(yuan)(yuan)體污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)、原(yuan)(yuan)蟲污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)、黑膠蟲污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)、真菌污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)、病毒污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)以及非細胞污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)，那么他(ta)們污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)細胞的特點分別是什么呢？怎樣能夠減少污(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)現(xian)象的發生？）

1-細菌(jun)

細(xi)(xi)菌(jun)污(wu)染常(chang)見的有(you)(you)大腸桿菌(jun)，葡萄(tao)球菌(jun)等。細(xi)(xi)菌(jun)污(wu)染較易發現，在(zai)(zai)普(pu)通倒(dao)置顯微鏡(jing)下為黑(hei)色細(xi)(xi)沙狀，培(pei)養液(ye)一般(ban)會在(zai)(zai)短時(shi)間內變黃，有(you)(you)時(shi)靜置的培(pei)養液(ye)不(bu)混，稍加震蕩會有(you)(you)很多混濁(zhuo)物漂起。顯微鏡(jing)下可見培(pei)養液(ye)中(zhong)有(you)(you)大量圓(yuan)球狀顆粒物漂浮，有(you)(you)時(shi)在(zai)(zai)細(xi)(xi)胞表面及(ji)周圍有(you)(you)大量細(xi)(xi)菌(jun)存在(zai)(zai)，細(xi)(xi)胞停止生長并(bing)有(you)(you)中(zhong)毒表現。

處理：①在(zai)培養(yang)液(ye)中加入(ru)相應的抗生素(su)，能夠預(yu)防絕大多數的細菌污(wu)染。

2-真(zhen)菌

真(zhen)菌(jun)污(wu)染是細(xi)胞培養過程(cheng)中(zhong)zui常見(jian)(jian)的(de)一(yi)種，尤其梅雨(yu)季(ji)節快要到了，進行(xing)細(xi)胞培養時更易(yi)污(wu)染。污(wu)染細(xi)胞的(de)多為(wei)煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌(jun)、孢(bao)子霉、白念珠菌(jun)、酵母菌(jun)等。霉菌(jun)污(wu)染后多數在培養液(ye)(ye)中(zhong)形成白色或(huo)淺黃色漂浮物。一(yi)般肉眼可見(jian)(jian)，較(jiao)易(yi)被發(fa)現，短期內培養液(ye)(ye)多不(bu)混濁，倒置(zhi)顯微鏡下可見(jian)(jian)于細(xi)胞之間縱橫交錯(cuo)穿行(xing)的(de)絲狀(zhuang)、管(guan)狀(zhuang)、及樹枝狀(zhuang)菌(jun)絲，并懸(xuan)浮飄蕩在培養液(ye)(ye)中(zhong)。

很多菌絲在(zai)(zai)高倍鏡(jing)可見到(dao)有鏈(lian)狀(zhuang)排列的菌珠；念珠菌或(huo)酵母(mu)菌形態呈卵形，散在(zai)(zai)細(xi)胞(bao)周邊和細(xi)胞(bao)之間生(sheng)長(chang)。鏡(jing)下看時(shi)，要(yao)將(jiang)培養瓶(ping)用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶(ping)外尤其瓶(ping)底(di)外面生(sheng)長(chang)的菌絲相混淆。

真菌污染后，細胞(bao)(bao)生長變慢(man)，但zui后由于營養(yang)耗盡及毒(du)性作用(yong)而(er)使細胞(bao)(bao)脫落死(si)亡(wang)。真菌生長的(de)(de)比較慢(man)，不象細菌那么容易被發(fa)現(xian)，但是一(yi)旦發(fa)現(xian)有它的(de)(de)存在細胞(bao)(bao)就被污染了(le)，也很(hen)難救活了(le)。

3-支原體

支原(yuan)體的(de)大小介于細(xi)(xi)菌和(he)病毒之(zhi)(zhi)間(jian)，是一種獨立生活的(de)微生物。對(dui)熱(re)敏感，對(dui)一般抗生素不敏感。支原(yuan)體的(de)形態多變，多吸附在細(xi)(xi)胞(bao)表面和(he)細(xi)(xi)胞(bao)之(zhi)(zhi)間(jian)。電鏡下觀察(cha)，中心有高密(mi)度的(de)密(mi)集(ji)顆(ke)粒，橫斷(duan)面與細(xi)(xi)胞(bao)微絨毛(mao)相似。

因國(guo)內的(de)血清大(da)多數都(dou)沒(mei)有做(zuo)支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)陰性檢測，而支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)又是牛(niu)血清中zui常見的(de)微(wei)生(sheng)物之一。支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)污染細胞后(hou)，培(pei)(pei)養(yang)液輕微(wei)發生(sheng)混濁．但細胞變化(hua)不顯著(zhu)，隨(sui)著(zhu)細胞的(de)培(pei)(pei)養(yang)會慢(man)慢(man)死亡。

支原體(ti)污染(ran)檢(jian)測（熒光(guang)(guang)染(ran)色(se)法）：DNA和與DNA特(te)異性結合(he)的熒光(guang)(guang)染(ran)料(liao)結合(he)，使得支原體(ti)的DNA著(zhu)色(se)，然后用熒光(guang)(guang)顯微(wei)鏡觀(guan)察。鏡下支原體(ti)為散在于細胞(bao)同圍或(huo)附于細胞(bao)膜(mo)表面(mian)的亮綠色(se)小點。

解決：

1）抗(kang)生(sheng)素排除法：支原體污(wu)染預防(fang)比解決好。如果不小心污(wu)染后，可加入高濃度抗(kang)生(sheng)素（常規(gui)使用的5倍濃度）作用24-48小時，再換入常規(gui)培養液，但(dan)該法不保證有效。推薦用量(liang)：慶大霉素 200μg/ml ,四環素10μg/ml ，卡那霉素50μg/ml 。

2）加(jia)溫(wen)除(chu)菌：支原(yuan)體(ti)(ti)不(bu)耐熱，可以對(dui)支原(yuan)體(ti)(ti)污染的(de)細胞熱處理除(chu)菌。因高溫(wen)對(dui)細胞本身也會產生一定影(ying)響(xiang)，故熱處理前需(xu)先(xian)進行預實驗，確(que)定對(dui)細胞影(ying)響(xiang)zui小而能zui大程(cheng)度的(de)殺死(si)支原(yuan)體(ti)(ti)的(de)時間。

4-黑(hei)膠蟲

黑膠蟲(chong)(chong)的存在目(mu)前尚(shang)有(you)爭議，其在低倍(bei)下為黑色點(dian)狀，高倍(bei)下可看見(jian)黑色的小蟲(chong)(chong)游(you)來游(you)去，培(pei)養液也(ye)是不渾的，對(dui)細胞生長狀態不會有(you)明顯影響，在細胞增殖旺盛(sheng)之后會自然(ran)消失，除更換血清外無須特殊(shu)處理。

5-原蟲

培(pei)養液可(ke)輕微渾濁，顯微鏡下那(nei)些細(xi)(xi)小(xiao)的(de)(de)點狀物數量(liang)非常多，輕微活動(dong)，細(xi)(xi)胞雖然可(ke)以生(sheng)長但繁殖速(su)度(du)卻(que)明顯減慢，而且細(xi)(xi)胞狀態不(bu)好，邊緣(yuan)不(bu)清楚(chu)，細(xi)(xi)胞不(bu)透亮。他們(men)與細(xi)(xi)胞可(ke)共生(sheng)但會(hui)與細(xi)(xi)胞爭奪營養。這種共生(sheng)是非常普遍(bian)的(de)(de)，但他們(men)的(de)(de)數量(liang)小(xiao)，細(xi)(xi)胞站(zhan)優勢所以不(bu)會(hui)影響到細(xi)(xi)胞的(de)(de)正常生(sheng)長，只有當(dang)他們(men)到達一定的(de)(de)數量(liang)時就會(hui)影響到細(xi)(xi)胞的(de)(de)生(sheng)長，zui終形成惡性(xing)循(xun)環。

6-病毒

組織細(xi)胞培(pei)養(yang)過程中，如果(guo)沒有除去潛在的(de)病毒，就會產生病毒污(wu)染。目前，從原代(dai)猴腎細(xi)胞的(de)培(pei)養(yang)中已發現(xian)不少(shao)于20種(zhong)血清性病毒。 盡管(guan)病毒污(wu)染的(de)細(xi)胞不影響原代(dai)培(pei)養(yang)，但生產疫(yi)苗是不安全的(de)。因此，潛在病毒是細(xi)胞大量(liang)生產和疫(yi)苗、干擾素等生物制品制作中的(de)難題。

7-非同種細(xi)胞污染

即細(xi)(xi)(xi)胞(bao)交叉污(wu)染，由(you)于(yu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作時各細(xi)(xi)(xi)胞(bao)株所(suo)需的器材(cai)和溶(rong)液沒有(you)(you)嚴格分(fen)開，往往會使一(yi)(yi)種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)被(bei)(bei)另一(yi)(yi)種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)污(wu)染。目前，世界上(shang)已有(you)(you)幾十種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)都被(bei)(bei)HeLa細(xi)(xi)(xi)胞(bao)所(suo)污(wu)染，致使許多實(shi)驗宣告(gao)無效。非細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)物所(suo)造成(cheng)的化學成(cheng)分(fen)的污(wu)染也(ye)偶有(you)(you)發生，大多是由(you)于(yu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)所(suo)需物品(pin)清洗消毒不(bu)*而帶(dai)入一(yi)(yi)些(xie)有(you)(you)毒化學物質(zhi)所(suo)致。

污染是(shi)細(xi)(xi)胞培養的大敵，預防和避免污染是(shi)成功培養細(xi)(xi)胞的關鍵之一(yi)。危機意識要貫徹實驗的始終(zhong)，否則不僅(jin)浪(lang)費(fei)時(shi)間，而且浪(lang)費(fei)人力、物力，甚至造成無法彌(mi)補的損失。

人宮頸癌細(xi)胞(bao)系熱賣(mai)，Hela，HT-3，Hela，C33A，Ca Ski，SN12C細(xi)胞(bao)（如何預防細胞(bao)培養的污(wu)染(ran)和清除(chu)這些(xie)污(wu)染(ran)物呢？）慧穎 細胞(bao)庫(ku) 技術(shu)為(wei)您解答：

一、污染的預防

預(yu)防(fang)是防(fang)止細胞培養過(guo)程中發(fa)生(sheng)(sheng)污染的辦法。只有預(yu)防(fang)工作做在前，才能(neng)將發(fa)生(sheng)(sheng)污染的可(ke)能(neng)性降(jiang)到zui小程度。一般(ban)預(yu)防(fang)可(ke)從以下幾方(fang)面著手：

1-從操作(zuo)者做起

1操(cao)作者責任心(xin)要(yao)(yao)強(qiang)，要(yao)(yao)細心(xin)穩重，操(cao)作技術要(yao)(yao)熟練(lian)。進(jin)無菌(jun)(jun)室前(qian)要(yao)(yao)用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分(fen)鐘(zhong)，按規定穿隔離衣。進(jin)入后關(guan)好門，坐下來盡量少走(zou)動。工(gong)作開始要(yao)(yao)先(xian)用75%酒精棉球擦(ca)手、擦(ca)瓶(ping)口和燒灼瓶(ping)口。事先(xian)要(yao)(yao)嚴格(ge)檢查(cha)器材、溶液和培養(yang)物，不(bu)要(yao)(yao)把污染品或未經消毒(du)的物品帶入無菌(jun)(jun)室內(nei)，更(geng)不(bu)能(neng)隨便(bian)使(shi)用，以(yi)免造(zao)成大批污染。

2、操(cao)作者動(dong)作要輕(qing)，必(bi)須在火焰周圍無菌區內(nei)打(da)開瓶口，并將瓶口轉(zhuan)動(dong)燒灼。操(cao)作時盡量不要談(tan)話，若打(da)噴(pen)嚏或咳嗽應轉(zhuan)向背面(mian)。

3、操作時(shi)要(yao)常更(geng)換(huan)吸管(guan)，切勿(wu)一根吸管(guan)做到底。一旦發現(xian)吸管(guan)口接(jie)觸了手和其他污染物(wu)品應棄去。實(shi)驗完畢及時(shi)收拾，保持實(shi)驗室清潔整齊，zui后(hou)用消毒(du)水浸泡(pao)的紗布擦(ca)臺面。

2-從(cong)物品、用品消毒滅菌著(zhu)手

細(xi)胞(bao)培養所用物品清洗(xi)、消(xiao)毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細(xi)，并在(zai)無菌試驗陰性(xing)后(hou)才能使用。操(cao)作室及剩余的(de)無菌器材要定期清潔消(xiao)毒滅菌。

3-防(fang)止(zhi)細胞(bao)交叉污染

在進行多種(zhong)細胞培養操作時(shi)，所(suo)用器具要嚴格區分(fen)，做上標記(ji)便于辨別(bie)。并(bing)按順序進行操作，避免一起進行時(shi)易發(fa)生混亂。

在進行換液或傳代操作時(shi)，注射器(qi)和滴(di)管不要觸(chu)及細(xi)胞(bao)(bao)培養瓶瓶口，以免(mian)把細(xi)胞(bao)(bao)帶(dai)到培養液中污染其他細(xi)胞(bao)(bao)。

所有細胞一旦購置，或從別(bie)處引入，或自(zi)己(ji)建立，均(jun)應(ying)及早留種凍存，一旦發生污染可棄之復蘇(su)，重(zhong)新培(pei)養(yang)。

二(er)、污(wu)染(ran)的清除

培養細(xi)胞(bao)一經污染，多數(shu)較(jiao)難處(chu)理(li)。如果污染細(xi)胞(bao)價值不大(da)，宜(yi)棄之；有細(xi)胞(bao)株留存的(de)或(huo)可購(gou)置(zhi)的(de)，可在(zai)尋找(zhao)原因后(hou)*消毒(du)操作室，復(fu)蘇或(huo)重新(xin)購(gou)置(zhi)細(xi)胞(bao)，再培養。若污染細(xi)胞(bao)價值較(jiao)大(da)，又難于重新(xin)得到，可采(cai)取以(yi)下辦法(fa)清(qing)除。

1-使用抗生(sheng)素(su)

抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)對殺滅細菌較有效(xiao)(xiao)。聯合(he)用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)比單獨(du)用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)效(xiao)(xiao)果好。預防(fang)用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)比污(wu)(wu)染(ran)后(hou)再用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)效(xiao)(xiao)果好。預防(fang)用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)一般用(yong)(yong)(yong)(yong)雙抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)（青(qing)霉(mei)素(su)100u/mL加(jia)(jia)鏈霉(mei)素(su)100μg/mL），污(wu)(wu)染(ran)后(hou)清(qing)除(chu)用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)需采用(yong)(yong)(yong)(yong)大(da)于(yu)常用(yong)(yong)(yong)(yong)量5～10倍的(de)沖洗法(fa)，于(yu)加(jia)(jia)藥(yao)(yao)后(hou)作用(yong)(yong)(yong)(yong)24～48小時(shi)，再換常規培(pei)養(yang)液(ye)(ye)。此(ci)法(fa)在污(wu)(wu)染(ran)早期可能有效(xiao)(xiao)。所用(yong)(yong)(yong)(yong)抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)品種(zhong)除(chu)青(qing)霉(mei)素(su)、鏈霉(mei)素(su)外，還可用(yong)(yong)(yong)(yong)慶(qing)大(da)霉(mei)素(su)、卡那(nei)霉(mei)素(su)、多粘菌素(su)、四環(huan)(huan)素(su)、制霉(mei)菌素(su)等。常用(yong)(yong)(yong)(yong)400～800μg/mL卡那(nei)霉(mei)素(su)或(huo)200μg/mL四環(huan)(huan)素(su)處理，每隔2～3日換液(ye)(ye)1次(ci)，傳1～2代進行(xing)治療(liao)。近(jin)年來有報道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素(su)衍生(sheng)(sheng)(sheng)物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huan)(huan)素(su)衍生(sheng)(sheng)(sheng)物（BM-2）等三(san)種(zhong)抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)單用(yong)(yong)(yong)(yong)或(huo)合(he)用(yong)(yong)(yong)(yong)對殺滅支原(yuan)體(ti)有效(xiao)(xiao)。這三(san)種(zhong)抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)均用(yong)(yong)(yong)(yong)PBS配(pei)成250濃(nong)縮(suo)液(ye)(ye)，-20℃保存備(bei)用(yong)(yong)(yong)(yong)，使用(yong)(yong)(yong)(yong)濃(nong)度Cip為(wei)10μg/mL，BM-1為(wei)10μg/mL，BM-2為(wei)5μg/mL。使用(yong)(yong)(yong)(yong)時(shi)先吸(xi)除(chu)污(wu)(wu)染(ran)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)(ye)，加(jia)(jia)入含BM-1的(de)RPMI1640培(pei)養(yang)液(ye)(ye)，3天后(hou)再吸(xi)除(chu)培(pei)養(yang)液(ye)(ye)，加(jia)(jia)入含BM-2的(de)RPMI1640培(pei)養(yang)液(ye)(ye)，培(pei)養(yang)4天，如此(ci)連續3個輪次(ci)，直至用(yong)(yong)(yong)(yong)33258熒光染(ran)色(se)鏡檢證明(ming)已清(qing)除(chu)支原(yuan)體(ti)后(hou)，再加(jia)(jia)正常培(pei)養(yang)液(ye)(ye)培(pei)養(yang)傳代3-4次(ci)。

2-使用支原(yuan)體特(te)異性血清

用(yong)5%的兔(tu)支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)免疫血清(qing)(qing)（血凝效價(jia)1:320以(yi)上）可去除支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)污染，因特(te)異抗(kang)(kang)體(ti)可抑(yi)制支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)生長(chang)，故經抗(kang)(kang)血清(qing)(qing)處理后11天即轉為(wei)(wei)陰性，并且5個月(yue)后仍為(wei)(wei)陰性。但此法比較麻(ma)煩，不如用(yong)抗(kang)(kang)生素方便、經濟。

3-加溫處理(li)

將污染的(de)(de)組織(zhi)培養(yang)(yang)物(wu)放在41℃培養(yang)(yang)18小時，可(ke)殺(sha)死(si)支原體，但對細胞(bao)(bao)有(you)不良影響。所(suo)以在處(chu)理前要進行(xing)預(yu)試驗，摸索能zui大限度殺(sha)死(si)支原體又對細胞(bao)(bao)影響zui小的(de)(de)加熱時間(jian)。此(ci)法有(you)時不可(ke)靠。若先用藥物(wu)處(chu)理后，再以41℃加溫處(chu)理效果更(geng)佳。

4-其(qi)他(ta)方法

除(chu)了上述去除(chu)污染(ran)(ran)的方法(fa)外，還(huan)有(you)動物體內接種除(chu)菌(jun)法(fa)、巨噬細胞吞噬法(fa)、污染(ran)(ran)培養(yang)瓶中加溴尿嘧啶再用光(guang)照(zhao)射的方法(fa)及過(guo)濾法(fa)等，但(dan)均(jun)較麻(ma)煩，且(qie)效果不確定。所以一(yi)旦支原體污染(ran)(ran)，除(chu)非有(you)特別重要(yao)價值，一(yi)般均(jun)棄之重新培養(yang)。

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