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人(ren)結腸(chang)癌細胞(bao)系，SW48，SW480，HCT-8，HCT-116，caco-2，報價(jia)|說明書（細(xi)胞培(pei)養中常見的生物污染類型有(you)7種，分別(bie)是細(xi)菌污染、支原(yuan)體(ti)污染、原(yuan)蟲(chong)污染、黑膠(jiao)蟲(chong)污染、真菌污染、病毒污染以及(ji)非細(xi)胞污染，那么他(ta)們污染細(xi)胞的特點分別(bie)是什么呢？怎樣(yang)能夠減少污染現(xian)象的發生？）

1-細(xi)菌

細(xi)菌(jun)污(wu)(wu)染常見的有大腸桿(gan)菌(jun)，葡萄球菌(jun)等。細(xi)菌(jun)污(wu)(wu)染較(jiao)易發現，在(zai)普通倒置顯微鏡(jing)下為黑色細(xi)沙狀，培(pei)養(yang)液一般會在(zai)短時間內變黃，有時靜置的培(pei)養(yang)液不混，稍加震蕩會有很多混濁(zhuo)物(wu)漂(piao)起(qi)。顯微鏡(jing)下可見培(pei)養(yang)液中有大量圓球狀顆(ke)粒物(wu)漂(piao)浮，有時在(zai)細(xi)胞表面(mian)及(ji)周圍(wei)有大量細(xi)菌(jun)存在(zai)，細(xi)胞停止生長并有中毒表現。

處理：①在(zai)培養液中加(jia)入相(xiang)應的抗(kang)生(sheng)素(su)，能(neng)夠(gou)預防絕大多數的細(xi)菌(jun)污染(ran)。

2-真菌

真菌(jun)污(wu)(wu)染(ran)是細(xi)(xi)胞(bao)培養(yang)過程(cheng)中(zhong)zui常見(jian)的(de)一種，尤其梅雨季節(jie)快(kuai)要到(dao)了，進行細(xi)(xi)胞(bao)培養(yang)時更易(yi)污(wu)(wu)染(ran)。污(wu)(wu)染(ran)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)多為煙曲霉、黑曲霉、毛(mao)霉菌(jun)、孢(bao)子(zi)霉、白念珠菌(jun)、酵母(mu)菌(jun)等。霉菌(jun)污(wu)(wu)染(ran)后多數在培養(yang)液中(zhong)形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見(jian)，較易(yi)被發現，短期內(nei)培養(yang)液多不混濁，倒置顯微鏡下可見(jian)于細(xi)(xi)胞(bao)之(zhi)間(jian)縱橫交錯穿行的(de)絲狀、管狀、及樹枝狀菌(jun)絲，并懸浮飄蕩在培養(yang)液中(zhong)。

很多(duo)菌(jun)(jun)絲(si)在(zai)高倍鏡(jing)可見到有鏈狀排(pai)列的菌(jun)(jun)珠；念珠菌(jun)(jun)或酵母(mu)菌(jun)(jun)形(xing)態呈卵(luan)形(xing)，散在(zai)細胞周邊和細胞之間生(sheng)長。鏡(jing)下(xia)看時，要將培養瓶(ping)用酒精棉球(qiu)擦(ca)干凈，以防止(zhi)與瓶(ping)外尤其瓶(ping)底外面生(sheng)長的菌(jun)(jun)絲(si)相混淆。

真(zhen)菌污染后，細胞生長(chang)變慢，但zui后由于營(ying)養耗(hao)盡及毒(du)性作用而使細胞脫落死亡。真(zhen)菌生長(chang)的比(bi)較慢，不象(xiang)細菌那么容(rong)易(yi)被發現，但是(shi)一旦發現有(you)它(ta)的存在細胞就被污染了(le)(le)，也(ye)很難(nan)救活了(le)(le)。

3-支原體

支原體(ti)(ti)的大(da)小介于(yu)細(xi)(xi)菌和(he)病(bing)毒之間(jian)，是一種獨立生(sheng)活的微生(sheng)物(wu)。對熱敏(min)感，對一般抗生(sheng)素不敏(min)感。支原體(ti)(ti)的形態多變，多吸附(fu)在細(xi)(xi)胞(bao)表面和(he)細(xi)(xi)胞(bao)之間(jian)。電(dian)鏡下觀察(cha)，中(zhong)心有(you)高密度的密集顆粒，橫斷面與細(xi)(xi)胞(bao)微絨毛相似(si)。

因國內(nei)的血清大多數都沒有(you)做支原(yuan)體(ti)(ti)陰(yin)性檢測，而支原(yuan)體(ti)(ti)又是(shi)牛血清中zui常見的微(wei)生物之一。支原(yuan)體(ti)(ti)污(wu)染細(xi)(xi)胞(bao)后，培養液(ye)輕微(wei)發生混濁．但細(xi)(xi)胞(bao)變化不顯著(zhu)，隨著(zhu)細(xi)(xi)胞(bao)的培養會慢(man)慢(man)死(si)亡。

支(zhi)原(yuan)體污染(ran)(ran)檢測（熒光染(ran)(ran)色法）：DNA和與(yu)DNA特異(yi)性結合的熒光染(ran)(ran)料(liao)結合，使得支(zhi)原(yuan)體的DNA著色，然后(hou)用熒光顯微鏡觀察。鏡下支(zhi)原(yuan)體為(wei)散在于細胞同圍(wei)或附于細胞膜表面的亮綠(lv)色小(xiao)點。

解決：

1）抗生素排(pai)除法：支原體(ti)污染預(yu)防比解決好。如果不(bu)小(xiao)心污染后，可加入高濃(nong)度抗生素（常規(gui)使(shi)用(yong)的5倍(bei)濃(nong)度）作用(yong)24-48小(xiao)時，再換入常規(gui)培(pei)養液，但該法不(bu)保證有效。推薦用(yong)量：慶大霉素 200μg/ml ,四環素10μg/ml ，卡(ka)那霉素50μg/ml 。

2）加溫(wen)除菌：支原(yuan)體(ti)不耐(nai)熱(re)，可以對(dui)(dui)支原(yuan)體(ti)污(wu)染的(de)細胞(bao)(bao)熱(re)處理除菌。因(yin)高溫(wen)對(dui)(dui)細胞(bao)(bao)本身(shen)也會產生一定(ding)影(ying)響，故熱(re)處理前需先進行(xing)預實驗，確定(ding)對(dui)(dui)細胞(bao)(bao)影(ying)響zui小(xiao)而能zui大程度的(de)殺(sha)死支原(yuan)體(ti)的(de)時(shi)間。

4-黑膠(jiao)蟲

黑(hei)膠蟲的(de)存在(zai)目前尚(shang)有爭議，其在(zai)低倍下(xia)為黑(hei)色點狀(zhuang)，高(gao)倍下(xia)可看見黑(hei)色的(de)小蟲游來游去，培養液也是不(bu)渾(hun)的(de)，對細(xi)胞生長狀(zhuang)態不(bu)會(hui)有明顯影響(xiang)，在(zai)細(xi)胞增殖旺盛(sheng)之后會(hui)自然消失，除更換血清外無須特殊處理(li)。

5-原蟲

培養液可(ke)輕(qing)(qing)微(wei)渾(hun)濁，顯微(wei)鏡下(xia)那些細(xi)(xi)(xi)小的(de)(de)點狀物(wu)數(shu)量非常(chang)多，輕(qing)(qing)微(wei)活動，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)雖然可(ke)以(yi)生(sheng)長但(dan)(dan)(dan)繁殖速度(du)卻明顯減慢，而且細(xi)(xi)(xi)胞(bao)狀態不好，邊緣不清楚，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)不透亮。他們(men)(men)與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)可(ke)共生(sheng)但(dan)(dan)(dan)會(hui)與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)爭奪營養。這種共生(sheng)是非常(chang)普遍(bian)的(de)(de)，但(dan)(dan)(dan)他們(men)(men)的(de)(de)數(shu)量小，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)站(zhan)優勢所以(yi)不會(hui)影響(xiang)到細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)正(zheng)常(chang)生(sheng)長，只有當他們(men)(men)到達(da)一定的(de)(de)數(shu)量時就會(hui)影響(xiang)到細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)生(sheng)長，zui終(zhong)形成惡性(xing)循環。

6-病毒

組織細胞培(pei)養過程中(zhong)，如果(guo)沒有除去潛在(zai)的(de)病(bing)(bing)毒，就會(hui)產生病(bing)(bing)毒污染。目前，從(cong)原代猴腎細胞的(de)培(pei)養中(zhong)已發現不少于(yu)20種血清(qing)性病(bing)(bing)毒。 盡管病(bing)(bing)毒污染的(de)細胞不影響原代培(pei)養，但生產疫苗(miao)是不安全的(de)。因(yin)此，潛在(zai)病(bing)(bing)毒是細胞大量生產和疫苗(miao)、干擾素等生物制品制作中(zhong)的(de)難題。

7-非同(tong)種細胞污(wu)染

即(ji)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)交叉污(wu)染，由于細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)操(cao)作時各(ge)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株所(suo)需(xu)的(de)器材和溶液沒有(you)嚴格(ge)分開，往往會使一(yi)種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)被另一(yi)種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)污(wu)染。目前(qian)，世界上已有(you)幾(ji)十(shi)種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)都被HeLa細(xi)(xi)胞(bao)(bao)所(suo)污(wu)染，致使許多(duo)(duo)實驗(yan)宣告無效。非細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)物所(suo)造成(cheng)的(de)化(hua)學(xue)成(cheng)分的(de)污(wu)染也偶有(you)發生，大多(duo)(duo)是由于細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)所(suo)需(xu)物品清(qing)洗消毒不*而帶入一(yi)些(xie)有(you)毒化(hua)學(xue)物質所(suo)致。

污染是(shi)細胞培養的(de)大(da)敵，預防和避免污染是(shi)成功培養細胞的(de)關(guan)鍵之一(yi)。危(wei)機意識要貫徹實驗(yan)的(de)始終，否(fou)則不僅浪(lang)費時間(jian)，而(er)且浪(lang)費人力(li)、物(wu)力(li)，甚(shen)至造成無法(fa)彌補的(de)損失。

人(ren)結腸癌細胞系，SW48，SW480，HCT-8，HCT-116，caco-2，報價|說明(ming)書（如何預防(fang)細胞培養的污染和清除這些污染物呢(ni)？）慧穎 細胞庫 技(ji)術為您解答(da)：

一、污(wu)染的預(yu)防

預防(fang)是防(fang)止(zhi)細(xi)胞(bao)培(pei)養過程中發(fa)生污染(ran)(ran)的辦法。只有預防(fang)工(gong)作做在前，才能將發(fa)生污染(ran)(ran)的可能性降到zui小(xiao)程度。一般(ban)預防(fang)可從以下幾方(fang)面著手：

1-從(cong)操作者(zhe)做(zuo)起

1操作者(zhe)責任心(xin)要(yao)強，要(yao)細心(xin)穩重，操作技術要(yao)熟練。進無菌室前要(yao)用肥皂洗手或用5%新潔爾(er)滅浸泡5分鐘，按規(gui)定穿隔離(li)衣。進入(ru)后關好門(men)，坐下來盡(jin)量少走動(dong)。工作開始(shi)要(yao)先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒(shao)灼瓶口。事先要(yao)嚴(yan)格檢(jian)查器材、溶(rong)液和培養(yang)物，不要(yao)把(ba)污染品(pin)或未經消毒的物品(pin)帶入(ru)無菌室內(nei)，更不能隨(sui)便使用，以免造(zao)成(cheng)大批污染。

2、操作(zuo)者(zhe)動(dong)(dong)作(zuo)要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口(kou)，并將瓶口(kou)轉(zhuan)動(dong)(dong)燒灼。操作(zuo)時(shi)盡(jin)量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應轉(zhuan)向背面。

3、操(cao)作時(shi)要(yao)常(chang)更換吸管(guan)，切勿(wu)一(yi)根吸管(guan)做到底。一(yi)旦(dan)發現(xian)吸管(guan)口(kou)接觸了(le)手和(he)其(qi)他污(wu)染物品應棄去(qu)。實(shi)驗完畢及時(shi)收拾，保持實(shi)驗室清潔整齊，zui后(hou)用消(xiao)毒水浸泡的紗布(bu)擦臺(tai)面。

2-從物品、用品消毒滅菌著(zhu)手

細(xi)胞培養所用(yong)物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除(chu)菌要仔細(xi)，并(bing)在無菌試驗陰性后(hou)才(cai)能使(shi)用(yong)。操作室及剩余的無菌器材(cai)要定期清潔消毒滅菌。

3-防止細胞交叉污染

在(zai)進(jin)行(xing)(xing)多種細胞培養操作(zuo)時，所用器具要嚴格區分，做上標記便(bian)于辨別。并按(an)順序(xu)進(jin)行(xing)(xing)操作(zuo)，避免一起(qi)進(jin)行(xing)(xing)時易發生混亂(luan)。

在(zai)進行(xing)換液或傳(chuan)代操作時，注射器和(he)滴(di)管不要觸及細胞培(pei)養(yang)瓶瓶口，以免把細胞帶到培(pei)養(yang)液中污染其(qi)他細胞。

所有(you)細胞一旦購(gou)置(zhi)，或(huo)從別處引入(ru)，或(huo)自己建(jian)立，均應及早(zao)留種(zhong)凍存，一旦發生污(wu)染可棄之復蘇，重新培(pei)養。

二、污染的清除

培(pei)養細胞(bao)一(yi)經污染，多數較難(nan)處(chu)理。如果污染細胞(bao)價值(zhi)(zhi)不大(da)，宜棄(qi)之；有細胞(bao)株留存(cun)的(de)或(huo)可(ke)購置(zhi)的(de)，可(ke)在尋找原因后*消毒操(cao)作(zuo)室，復蘇或(huo)重新購置(zhi)細胞(bao)，再培(pei)養。若污染細胞(bao)價值(zhi)(zhi)較大(da)，又難(nan)于重新得到，可(ke)采取以下(xia)辦法清除。

1-使(shi)用(yong)抗(kang)生素

抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)對(dui)殺(sha)滅細菌(jun)較有(you)效。聯合(he)用藥(yao)(yao)比單(dan)獨用藥(yao)(yao)效果好。預防用藥(yao)(yao)比污染(ran)后(hou)再用藥(yao)(yao)效果好。預防用藥(yao)(yao)一般(ban)用雙抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)（青霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)100u/mL加(jia)鏈(lian)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)100μg/mL），污染(ran)后(hou)清除(chu)(chu)用藥(yao)(yao)需采(cai)用大于常(chang)用量5～10倍的沖洗(xi)法(fa)，于加(jia)藥(yao)(yao)后(hou)作用24～48小時，再換常(chang)規培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)。此法(fa)在(zai)污染(ran)早期可能有(you)效。所用抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)品(pin)種除(chu)(chu)青霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、鏈(lian)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)外，還可用慶大霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、卡那霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、多粘菌(jun)素(su)(su)(su)(su)、四(si)環素(su)(su)(su)(su)、制霉(mei)(mei)(mei)菌(jun)素(su)(su)(su)(su)等(deng)(deng)。常(chang)用400～800μg/mL卡那霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)或200μg/mL四(si)環素(su)(su)(su)(su)處理，每隔2～3日換液(ye)(ye)(ye)1次(ci)(ci)，傳1～2代進(jin)行治療。近年來有(you)報道，4-氟，2-羥基(ji)喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截(jie)耳素(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)物(wu)（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四(si)環素(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)物(wu)（BM-2）等(deng)(deng)三種抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)單(dan)用或合(he)用對(dui)殺(sha)滅支原體有(you)效。這三種抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)均用PBS配成250濃(nong)縮液(ye)(ye)(ye)，-20℃保存備用，使用濃(nong)度Cip為(wei)10μg/mL，BM-1為(wei)10μg/mL，BM-2為(wei)5μg/mL。使用時先吸(xi)除(chu)(chu)污染(ran)的培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)，加(jia)入(ru)含(han)(han)BM-1的RPMI1640培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)，3天(tian)后(hou)再吸(xi)除(chu)(chu)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)，加(jia)入(ru)含(han)(han)BM-2的RPMI1640培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)，培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)4天(tian)，如此連續(xu)3個輪次(ci)(ci)，直至用33258熒光染(ran)色鏡(jing)檢證明(ming)已(yi)清除(chu)(chu)支原體后(hou)，再加(jia)正常(chang)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)傳代3-4次(ci)(ci)。

2-使用支(zhi)原體特異性(xing)血(xue)清

用(yong)5%的兔(tu)支(zhi)原體(ti)(ti)免(mian)疫(yi)血(xue)清(qing)（血(xue)凝效價(jia)1:320以(yi)上）可(ke)去除支(zhi)原體(ti)(ti)污染，因特異抗體(ti)(ti)可(ke)抑制支(zhi)原體(ti)(ti)生長，故經(jing)抗血(xue)清(qing)處(chu)理后(hou)11天即轉為(wei)(wei)陰性，并且(qie)5個(ge)月后(hou)仍為(wei)(wei)陰性。但(dan)此法比較(jiao)麻(ma)煩，不如用(yong)抗生素方便(bian)、經(jing)濟。

3-加溫處理

將污染的組織培養(yang)物放在41℃培養(yang)18小(xiao)時(shi)，可殺死支原體(ti)，但對(dui)(dui)細(xi)胞(bao)有不(bu)良影響。所(suo)以(yi)在處理(li)(li)(li)前要進行(xing)預試驗，摸索能zui大限度殺死支原體(ti)又對(dui)(dui)細(xi)胞(bao)影響zui小(xiao)的加(jia)熱時(shi)間。此(ci)法有時(shi)不(bu)可靠(kao)。若(ruo)先用藥物處理(li)(li)(li)后(hou)，再(zai)以(yi)41℃加(jia)溫處理(li)(li)(li)效(xiao)果更佳。

4-其(qi)他方法

除(chu)了上述去除(chu)污染的方法(fa)外，還(huan)有(you)動物體(ti)內接(jie)種除(chu)菌法(fa)、巨噬(shi)細胞吞噬(shi)法(fa)、污染培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)加溴尿(niao)嘧啶(ding)再用(yong)光照射的方法(fa)及(ji)過濾法(fa)等，但均(jun)較(jiao)麻煩，且(qie)效果不確定。所以一旦支(zhi)原體(ti)污染，除(chu)非有(you)特(te)別重要價值，一般均(jun)棄之重新培(pei)(pei)養(yang)。

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