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L56BRC1( L56Br-C1)人乳腺癌細胞 (細胞培養中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染,那么他們污染細胞的特點分別是什么呢?怎樣能夠減少污染現象的發生?)
1-細菌
細菌(jun)(jun)污染(ran)常見的有(you)大(da)腸桿菌(jun)(jun),葡萄球(qiu)菌(jun)(jun)等(deng)。細菌(jun)(jun)污染(ran)較易發(fa)現(xian),在(zai)普通倒置顯微鏡下為黑色細沙(sha)狀,培(pei)養液一般會(hui)在(zai)短時(shi)間內變黃,有(you)時(shi)靜置的培(pei)養液不混,稍加震蕩會(hui)有(you)很多混濁物漂(piao)起。顯微鏡下可見培(pei)養液中有(you)大(da)量圓(yuan)球(qiu)狀顆粒物漂(piao)浮,有(you)時(shi)在(zai)細胞表面及周圍有(you)大(da)量細菌(jun)(jun)存在(zai),細胞停止(zhi)生長并有(you)中毒(du)表現(xian)。
處理:①在培養(yang)液中加(jia)入相(xiang)應(ying)的抗生素,能(neng)夠(gou)預防絕(jue)大多數的細菌污染(ran)。
2-真菌(jun)
真菌(jun)污(wu)(wu)染(ran)是細胞培(pei)養過程中zui常見的(de)一種,尤其梅雨季(ji)節快要到了,進行細胞培(pei)養時更易(yi)污(wu)(wu)染(ran)。污(wu)(wu)染(ran)細胞的(de)多為(wei)煙曲(qu)霉、黑曲(qu)霉、毛霉菌(jun)、孢子霉、白念珠菌(jun)、酵(jiao)母菌(jun)等。霉菌(jun)污(wu)(wu)染(ran)后多數(shu)在(zai)培(pei)養液(ye)(ye)中形成白色或淺黃(huang)色漂(piao)浮物。一般(ban)肉眼可見,較易(yi)被發現,短期(qi)內培(pei)養液(ye)(ye)多不混濁,倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下可見于細胞之間縱(zong)橫交錯穿行的(de)絲狀(zhuang)、管狀(zhuang)、及樹枝狀(zhuang)菌(jun)絲,并懸浮飄蕩在(zai)培(pei)養液(ye)(ye)中。
很多菌(jun)(jun)(jun)絲(si)在高倍鏡(jing)可(ke)見到有鏈狀排列的菌(jun)(jun)(jun)珠(zhu);念珠(zhu)菌(jun)(jun)(jun)或(huo)酵(jiao)母菌(jun)(jun)(jun)形(xing)態呈(cheng)卵形(xing),散在細胞(bao)周(zhou)邊和(he)細胞(bao)之間生(sheng)長。鏡(jing)下看時,要將培養瓶(ping)用酒精棉球擦(ca)干凈,以防止(zhi)與瓶(ping)外尤其瓶(ping)底(di)外面生(sheng)長的菌(jun)(jun)(jun)絲(si)相混(hun)淆(xiao)。
真菌(jun)污(wu)染后,細胞生(sheng)長變(bian)慢,但zui后由于營養(yang)耗盡及毒性(xing)作用(yong)而使細胞脫落死亡(wang)。真菌(jun)生(sheng)長的(de)比(bi)較慢,不象(xiang)細菌(jun)那(nei)么容(rong)易被發(fa)現(xian),但是一旦發(fa)現(xian)有(you)它的(de)存在細胞就被污(wu)染了,也很難救活(huo)了。
3-支原體
支原(yuan)體(ti)(ti)的(de)大小介(jie)于細菌(jun)和病(bing)毒之間,是一種獨立生活的(de)微生物。對熱敏感,對一般抗生素不敏感。支原(yuan)體(ti)(ti)的(de)形態多(duo)變,多(duo)吸(xi)附(fu)在細胞表面和細胞之間。電鏡下(xia)觀察,中心(xin)有高密度的(de)密集顆粒,橫斷面與細胞微絨毛相似。
因國內的(de)血(xue)清(qing)大多數都沒(mei)有(you)做支(zhi)原體陰(yin)性檢測,而支(zhi)原體又是牛血(xue)清(qing)中zui常見的(de)微生物(wu)之一(yi)。支(zhi)原體污(wu)染細胞后,培養液輕微發生混濁(zhuo).但細胞變化(hua)不顯著,隨著細胞的(de)培養會(hui)慢慢死亡。
支(zhi)原體(ti)(ti)污染(ran)(ran)檢測(熒(ying)光染(ran)(ran)色(se)法):DNA和與(yu)DNA特異性結合的(de)熒(ying)光染(ran)(ran)料結合,使得支(zhi)原體(ti)(ti)的(de)DNA著色(se),然(ran)后用(yong)熒(ying)光顯微鏡觀察。鏡下支(zhi)原體(ti)(ti)為散(san)在于細(xi)(xi)胞同圍或附于細(xi)(xi)胞膜表面(mian)的(de)亮綠色(se)小點。
解(jie)決:
1)抗生(sheng)素(su)排除法(fa):支原體污染預防(fang)比(bi)解(jie)決(jue)好。如果不小心(xin)污染后,可加入(ru)高濃(nong)度抗生(sheng)素(su)(常規(gui)使用的5倍(bei)濃(nong)度)作用24-48小時,再(zai)換入(ru)常規(gui)培養液,但該法(fa)不保證有效。推薦用量(liang):慶大霉素(su) 200μg/ml ,四環素(su)10μg/ml ,卡那霉素(su)50μg/ml 。
2)加溫除(chu)菌:支原(yuan)體不耐熱,可以對(dui)(dui)支原(yuan)體污染(ran)的(de)細胞熱處理除(chu)菌。因高溫對(dui)(dui)細胞本身也會產生一定(ding)(ding)影響,故(gu)熱處理前(qian)需先進行預實(shi)驗,確定(ding)(ding)對(dui)(dui)細胞影響zui小(xiao)而能zui大程度的(de)殺死支原(yuan)體的(de)時間。
4-黑膠(jiao)蟲
黑膠蟲的存在目前尚(shang)有(you)爭議,其在低倍下為(wei)黑色點狀,高倍下可(ke)看(kan)見黑色的小蟲游(you)來游(you)去,培養液也是不(bu)渾的,對細(xi)胞(bao)生長狀態不(bu)會有(you)明顯影(ying)響(xiang),在細(xi)胞(bao)增殖旺(wang)盛之后(hou)會自然消失,除(chu)更換血清外無須特(te)殊處(chu)理。
5-原蟲
培(pei)養液可輕(qing)(qing)微渾濁,顯微鏡下那些細(xi)小(xiao)的(de)點狀(zhuang)物(wu)數(shu)量非常(chang)多,輕(qing)(qing)微活動,細(xi)胞(bao)雖然可以生長但繁(fan)殖速度卻(que)明顯減(jian)慢,而且細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好,邊緣不(bu)清楚,細(xi)胞(bao)不(bu)透亮。他(ta)們與(yu)細(xi)胞(bao)可共生但會與(yu)細(xi)胞(bao)爭奪營養。這(zhe)種共生是非常(chang)普遍的(de),但他(ta)們的(de)數(shu)量小(xiao),細(xi)胞(bao)站(zhan)優勢(shi)所(suo)以不(bu)會影(ying)響(xiang)到(dao)細(xi)胞(bao)的(de)正常(chang)生長,只有當(dang)他(ta)們到(dao)達一定的(de)數(shu)量時就會影(ying)響(xiang)到(dao)細(xi)胞(bao)的(de)生長,zui終形成惡性循環。
6-病毒(du)
組織細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養過程中(zhong),如果沒有除去潛在的病(bing)毒(du),就會產(chan)生病(bing)毒(du)污(wu)染(ran)。目前,從原(yuan)代(dai)猴腎(shen)細(xi)胞(bao)(bao)的培(pei)養中(zhong)已(yi)發現不少于20種血清性(xing)病(bing)毒(du)。 盡(jin)管病(bing)毒(du)污(wu)染(ran)的細(xi)胞(bao)(bao)不影響原(yuan)代(dai)培(pei)養,但(dan)生產(chan)疫苗(miao)是不安全的。因此,潛在病(bing)毒(du)是細(xi)胞(bao)(bao)大量生產(chan)和(he)疫苗(miao)、干(gan)擾素等(deng)生物制品制作中(zhong)的難題。
7-非同種細胞污染
即細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)交叉(cha)污(wu)染,由于細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培養(yang)操作時各細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株所需的器材和溶(rong)液沒有(you)嚴(yan)格分(fen)開(kai),往往會使一(yi)種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)被另(ling)一(yi)種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)污(wu)染。目前,世界上已(yi)有(you)幾十種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)都被HeLa細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)所污(wu)染,致使許多實驗(yan)宣告無(wu)效。非細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培養(yang)物所造成的化(hua)學(xue)成分(fen)的污(wu)染也偶有(you)發生,大多是由于細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培養(yang)所需物品(pin)清洗消毒不*而帶入(ru)一(yi)些(xie)有(you)毒化(hua)學(xue)物質所致。
污染是細胞(bao)培(pei)養的(de)大敵(di),預(yu)防和(he)避免污染是成功(gong)培(pei)養細胞(bao)的(de)關鍵之(zhi)一(yi)。危機意識要貫徹實驗的(de)始終,否則不僅浪費時間,而且浪費人力(li)、物力(li),甚(shen)至造(zao)成無法彌(mi)補的(de)損失。
L56BRC1( L56Br-C1)人乳腺癌細胞(如何預防細胞培養的污染和清除這些污染物呢?)慧穎 細胞庫 技術為您解答:
一、污染的預防(fang)
預防是防止細胞(bao)培(pei)養過程中發(fa)生污染的辦法。只有預防工(gong)作做(zuo)在前,才能(neng)將(jiang)發(fa)生污染的可能(neng)性降到zui小程度。一般預防可從(cong)以下幾方面著手:
1-從操作者做起
1操作(zuo)者責(ze)任心要(yao)強,要(yao)細心穩重,操作(zuo)技(ji)術要(yao)熟練(lian)。進無(wu)菌室前要(yao)用肥皂洗(xi)手(shou)或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘,按(an)規定穿隔離衣。進入后關好門,坐(zuo)下來盡(jin)量少(shao)走動。工作(zuo)開始要(yao)先(xian)用75%酒精棉球擦手(shou)、擦瓶(ping)(ping)口和燒灼瓶(ping)(ping)口。事先(xian)要(yao)嚴(yan)格檢查器(qi)材(cai)、溶液(ye)和培養物,不(bu)要(yao)把污(wu)染品或未經消毒的物品帶入無(wu)菌室內,更不(bu)能隨便(bian)使(shi)用,以免造成大批污(wu)染。
2、操作(zuo)者動作(zuo)要輕,必須在火焰周圍無菌區內打(da)開瓶(ping)口,并(bing)將瓶(ping)口轉動燒灼(zhuo)。操作(zuo)時盡量不要談(tan)話,若(ruo)打(da)噴嚏或咳嗽應(ying)轉向(xiang)背面。
3、操作(zuo)時要常更換吸(xi)(xi)管,切勿(wu)一根吸(xi)(xi)管做到底。一旦發現吸(xi)(xi)管口接(jie)觸了(le)手和(he)其(qi)他污(wu)染物品應(ying)棄去(qu)。實(shi)(shi)驗(yan)完畢及(ji)時收拾,保持實(shi)(shi)驗(yan)室(shi)清潔(jie)整齊,zui后用消毒水浸泡的紗(sha)布擦臺面。
2-從物品、用品消毒(du)滅菌著手(shou)
細(xi)胞培養所用(yong)物品清(qing)洗、消(xiao)毒(du)要*,各種溶(rong)液(ye)滅菌(jun)(jun)除菌(jun)(jun)要仔細(xi),并(bing)在無菌(jun)(jun)試驗陰(yin)性(xing)后(hou)才能使用(yong)。操作室(shi)及(ji)剩(sheng)余(yu)的(de)無菌(jun)(jun)器(qi)材要定期清(qing)潔(jie)消(xiao)毒(du)滅菌(jun)(jun)。
3-防止細胞交叉污染
在(zai)進行(xing)(xing)多種細胞培養操作(zuo)時(shi),所用器(qi)具要(yao)嚴格區分,做(zuo)上標記便于(yu)辨(bian)別。并按順序進行(xing)(xing)操作(zuo),避免一起進行(xing)(xing)時(shi)易發生混亂。
在進行換液(ye)或傳(chuan)代(dai)操作時,注(zhu)射器和滴管(guan)不要觸及細胞培(pei)養(yang)瓶瓶口,以免把細胞帶到培(pei)養(yang)液(ye)中污染(ran)其他細胞。
所(suo)有細胞(bao)一旦購置,或從別處引入,或自己建立,均應(ying)及(ji)早留種凍存(cun),一旦發生污染可棄(qi)之復蘇(su),重新(xin)培(pei)養。
二、污染的清除
培養細(xi)胞(bao)(bao)一經污(wu)染(ran)(ran),多數較難處理。如果污(wu)染(ran)(ran)細(xi)胞(bao)(bao)價值(zhi)不大(da),宜棄之;有細(xi)胞(bao)(bao)株留存的或可購置的,可在尋找原因后*消毒操(cao)作室,復(fu)蘇或重新購置細(xi)胞(bao)(bao),再培養。若污(wu)染(ran)(ran)細(xi)胞(bao)(bao)價值(zhi)較大(da),又難于(yu)重新得(de)到,可采(cai)取以下辦法(fa)清除。
1-使用(yong)抗生(sheng)素
抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)對殺(sha)滅(mie)細菌(jun)較有(you)效(xiao)。聯合用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)比單獨用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)效(xiao)果好(hao)。預防用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)比污染(ran)(ran)后(hou)再用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)效(xiao)果好(hao)。預防用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)一般用(yong)(yong)(yong)(yong)雙抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(青霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)100u/mL加(jia)(jia)(jia)鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)100μg/mL),污染(ran)(ran)后(hou)清(qing)(qing)除(chu)(chu)用(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)需(xu)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)大于常(chang)用(yong)(yong)(yong)(yong)量5~10倍的沖洗法(fa),于加(jia)(jia)(jia)藥(yao)后(hou)作用(yong)(yong)(yong)(yong)24~48小時(shi),再換常(chang)規(gui)培(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)(ye)。此法(fa)在(zai)污染(ran)(ran)早(zao)期可能有(you)效(xiao)。所用(yong)(yong)(yong)(yong)抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)品種(zhong)除(chu)(chu)青霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)外,還(huan)可用(yong)(yong)(yong)(yong)慶大霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、卡那霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、多粘菌(jun)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、四環(huan)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、制(zhi)霉(mei)(mei)菌(jun)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)等(deng)。常(chang)用(yong)(yong)(yong)(yong)400~800μg/mL卡那霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)或200μg/mL四環(huan)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)處(chu)理(li),每隔2~3日換液(ye)(ye)(ye)(ye)1次(ci),傳1~2代(dai)進行治療。近年來有(you)報道,4-氟(fu),2-羥基(ji)喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截耳素(su)(su)(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)(sheng)物(Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huan)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)(sheng)物(BM-2)等(deng)三(san)種(zhong)抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)單用(yong)(yong)(yong)(yong)或合用(yong)(yong)(yong)(yong)對殺(sha)滅(mie)支原(yuan)體有(you)效(xiao)。這(zhe)三(san)種(zhong)抗(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)均用(yong)(yong)(yong)(yong)PBS配成250濃縮液(ye)(ye)(ye)(ye),-20℃保存備用(yong)(yong)(yong)(yong),使用(yong)(yong)(yong)(yong)濃度Cip為(wei)10μg/mL,BM-1為(wei)10μg/mL,BM-2為(wei)5μg/mL。使用(yong)(yong)(yong)(yong)時(shi)先吸除(chu)(chu)污染(ran)(ran)的培(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)(ye),加(jia)(jia)(jia)入含BM-1的RPMI1640培(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)(ye),3天后(hou)再吸除(chu)(chu)培(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)(ye),加(jia)(jia)(jia)入含BM-2的RPMI1640培(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)(ye),培(pei)養(yang)(yang)(yang)4天,如(ru)此連續3個輪(lun)次(ci),直至用(yong)(yong)(yong)(yong)33258熒光染(ran)(ran)色鏡(jing)檢證明(ming)已清(qing)(qing)除(chu)(chu)支原(yuan)體后(hou),再加(jia)(jia)(jia)正常(chang)培(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)(ye)培(pei)養(yang)(yang)(yang)傳代(dai)3-4次(ci)。
2-使(shi)用支原體特(te)異性血清
用5%的兔支原(yuan)體免(mian)疫血清(血凝效價1:320以上(shang))可(ke)(ke)去除支原(yuan)體污(wu)染(ran),因特異抗體可(ke)(ke)抑(yi)制支原(yuan)體生長,故經抗血清處(chu)理后11天即轉為陰性(xing),并且5個(ge)月后仍為陰性(xing)。但此法(fa)比較麻煩,不如用抗生素(su)方(fang)便、經濟(ji)。
3-加溫處理(li)
將污染的組織(zhi)培養物放在41℃培養18小時,可(ke)(ke)殺死支(zhi)(zhi)原體(ti),但對細(xi)胞(bao)(bao)有不(bu)良(liang)影響(xiang)。所(suo)以在處(chu)(chu)理(li)(li)前要(yao)進行預試驗,摸索能(neng)zui大(da)限度殺死支(zhi)(zhi)原體(ti)又對細(xi)胞(bao)(bao)影響(xiang)zui小的加熱時間。此法有時不(bu)可(ke)(ke)靠。若先用藥物處(chu)(chu)理(li)(li)后,再以41℃加溫處(chu)(chu)理(li)(li)效果更(geng)佳。
4-其他方法
除了上述去除污染(ran)的(de)方法(fa)外,還(huan)有(you)動物體內接種除菌法(fa)、巨噬(shi)細胞吞噬(shi)法(fa)、污染(ran)培養(yang)瓶(ping)中加(jia)溴尿嘧啶再(zai)用光照(zhao)射(she)的(de)方法(fa)及過濾法(fa)等,但(dan)均較麻煩,且效果不確定。所(suo)以一旦支原(yuan)體污染(ran),除非有(you)特(te)別重要價值,一般(ban)均棄之(zhi)重新(xin)培養(yang)。
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人試(shi)劑(ji)(ji)盒,人elisa試(shi)劑(ji)(ji)盒,酶聯免疫試(shi)劑(ji)(ji)盒
植物(wu)病(bing)毒、細菌(jun)、真菌(jun)、植物(wu)激素和轉基因作(zuo)物(wu)的農業(ye)診斷試劑盒
動植物(wu)(wu)疾(ji)病診斷類如豬、牛、羊、馬等家(jia)畜和禽(qin)類以及(ji)寵(chong)物(wu)(wu)類檢測試劑盒(he)
15596026 TRIzol試劑
15596018 TRIzol試劑
11668027 脂質體2000轉染試(shi)劑(ji)
11668019 脂質體2000轉染試劑
13778075 RNAiMAX轉染(ran)試劑(ji)
17504044 B-27(黃顏(yan)色(se))
12587010 B-27 (黃(huang)顏色)不含維(wei)生素(su)A
17502048 N-2 (粉紅顏(yan)色)