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人宮(gong)頸(jing)癌細(xi)胞(bao)(bao)系：hela細(xi)胞(bao)(bao)，HT-3細(xi)胞(bao)(bao)，C33A細(xi)胞(bao)(bao)，SN12C細(xi)胞(bao)(bao)，SKG-IIIa細(xi)胞(bao)(bao)，Hela S3細(xi)胞(bao)(bao)，DoTc2-4510細(xi)胞(bao)(bao)，Ca Ski細(xi)胞(bao)(bao) ，ME-180細(xi)胞(bao)(bao)等

DC2.4細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)株(zhu)  MC38細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)株(zhu)，MLE-12細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，bEND.3細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) HT-22細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HK-2細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) THP-1細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) WRO細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) FRO細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) Molt-4細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)系 SH-SY-5Y細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) U87-MG細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)

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SHIN3細(xi)胞|慧穎科(ke)研(yan)用|人卵巢癌(ai)細(xi)胞 （細(xi)胞(bao)培(pei)養中常(chang)見(jian)的生(sheng)物(wu)污(wu)(wu)(wu)染(ran)類型(xing)有(you)7種，分(fen)別(bie)是細(xi)菌污(wu)(wu)(wu)染(ran)、支原(yuan)體污(wu)(wu)(wu)染(ran)、原(yuan)蟲(chong)(chong)污(wu)(wu)(wu)染(ran)、黑膠蟲(chong)(chong)污(wu)(wu)(wu)染(ran)、真菌污(wu)(wu)(wu)染(ran)、病(bing)毒污(wu)(wu)(wu)染(ran)以及(ji)非細(xi)胞(bao)污(wu)(wu)(wu)染(ran)，那么他們污(wu)(wu)(wu)染(ran)細(xi)胞(bao)的特(te)點分(fen)別(bie)是什么呢？怎(zen)樣能(neng)夠減少污(wu)(wu)(wu)染(ran)現象(xiang)的發生(sheng)？）

1-細菌

細菌(jun)(jun)污染常見的(de)有(you)(you)(you)(you)大腸桿菌(jun)(jun)，葡萄球菌(jun)(jun)等。細菌(jun)(jun)污染較易發現，在普通倒置顯(xian)微(wei)鏡下為黑色細沙狀，培養液(ye)一(yi)般會在短時(shi)間內變黃(huang)，有(you)(you)(you)(you)時(shi)靜置的(de)培養液(ye)不混，稍加震蕩(dang)會有(you)(you)(you)(you)很多混濁物(wu)(wu)漂(piao)起(qi)。顯(xian)微(wei)鏡下可見培養液(ye)中有(you)(you)(you)(you)大量圓(yuan)球狀顆粒(li)物(wu)(wu)漂(piao)浮，有(you)(you)(you)(you)時(shi)在細胞表面及周圍有(you)(you)(you)(you)大量細菌(jun)(jun)存(cun)在，細胞停止生長并有(you)(you)(you)(you)中毒表現。

處理(li)：①在培(pei)養液中(zhong)加入相應(ying)的(de)抗生(sheng)素，能夠預防(fang)絕大多數的(de)細(xi)菌(jun)污(wu)染(ran)。

2-真菌

真菌(jun)污(wu)(wu)染是細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)(yang)過程中zui常見(jian)的一(yi)種(zhong)，尤其梅(mei)雨季(ji)節快要到(dao)了，進行(xing)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)(yang)時更易污(wu)(wu)染。污(wu)(wu)染細(xi)胞(bao)的多(duo)為煙曲霉(mei)、黑曲霉(mei)、毛霉(mei)菌(jun)、孢子(zi)霉(mei)、白念珠菌(jun)、酵母菌(jun)等。霉(mei)菌(jun)污(wu)(wu)染后多(duo)數在(zai)培(pei)養(yang)(yang)液(ye)中形成白色(se)或淺黃色(se)漂浮物(wu)。一(yi)般肉眼可(ke)見(jian)，較(jiao)易被發現，短期內培(pei)養(yang)(yang)液(ye)多(duo)不混濁(zhuo)，倒置顯微鏡下可(ke)見(jian)于細(xi)胞(bao)之間縱橫交(jiao)錯(cuo)穿(chuan)行(xing)的絲狀(zhuang)、管狀(zhuang)、及樹枝狀(zhuang)菌(jun)絲，并(bing)懸浮飄(piao)蕩在(zai)培(pei)養(yang)(yang)液(ye)中。

很多(duo)菌(jun)(jun)絲(si)在(zai)高倍(bei)鏡可見到有鏈狀排列的(de)(de)菌(jun)(jun)珠；念珠菌(jun)(jun)或(huo)酵母菌(jun)(jun)形(xing)態呈卵形(xing)，散在(zai)細胞周邊(bian)和(he)細胞之間生長(chang)。鏡下看時(shi)，要將(jiang)培(pei)養瓶(ping)(ping)用酒精棉球擦干凈(jing)，以防止與瓶(ping)(ping)外(wai)(wai)尤其瓶(ping)(ping)底外(wai)(wai)面生長(chang)的(de)(de)菌(jun)(jun)絲(si)相(xiang)混淆。

真(zhen)菌(jun)污(wu)(wu)染(ran)后(hou)(hou)，細(xi)(xi)胞(bao)生(sheng)(sheng)長(chang)變慢，但(dan)zui后(hou)(hou)由于營養耗盡及(ji)毒性作用(yong)而使細(xi)(xi)胞(bao)脫落死亡(wang)。真(zhen)菌(jun)生(sheng)(sheng)長(chang)的比較(jiao)慢，不(bu)象細(xi)(xi)菌(jun)那(nei)么容易被(bei)發現，但(dan)是一(yi)旦(dan)發現有它的存(cun)在細(xi)(xi)胞(bao)就被(bei)污(wu)(wu)染(ran)了，也(ye)很難救活了。

3-支原體

支原體(ti)的(de)(de)(de)大(da)小介于細(xi)菌和(he)(he)病毒之間，是一種獨立生(sheng)活的(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)物。對(dui)熱敏(min)(min)感(gan)，對(dui)一般抗(kang)生(sheng)素(su)不敏(min)(min)感(gan)。支原體(ti)的(de)(de)(de)形態(tai)多變，多吸(xi)附在(zai)細(xi)胞表面和(he)(he)細(xi)胞之間。電(dian)鏡下觀察(cha)，中心有高密度的(de)(de)(de)密集顆粒(li)，橫斷面與細(xi)胞微(wei)絨毛相似。

因國內(nei)的(de)血清(qing)大多數都沒有做(zuo)支(zhi)原體陰性檢測，而支(zhi)原體又(you)是牛血清(qing)中(zhong)zui常見的(de)微生(sheng)物之一(yi)。支(zhi)原體污染細胞后，培養液輕微發(fa)生(sheng)混濁．但細胞變化不(bu)顯著(zhu)，隨著(zhu)細胞的(de)培養會慢慢死亡(wang)。

支(zhi)原(yuan)體污染檢(jian)測（熒光(guang)染色(se)法）：DNA和與DNA特異(yi)性結合(he)的(de)熒光(guang)染料結合(he)，使得支(zhi)原(yuan)體的(de)DNA著色(se)，然后(hou)用熒光(guang)顯微鏡(jing)觀察。鏡(jing)下支(zhi)原(yuan)體為散(san)在(zai)于細胞同圍或附于細胞膜(mo)表面的(de)亮綠色(se)小點。

解(jie)決：

1）抗(kang)生素(su)排(pai)除法(fa)：支原體污(wu)染(ran)預防比(bi)解決(jue)好。如果不(bu)小心污(wu)染(ran)后，可(ke)加入(ru)高濃(nong)度(du)抗(kang)生素(su)（常(chang)規(gui)使用的(de)5倍(bei)濃(nong)度(du)）作(zuo)用24-48小時，再(zai)換入(ru)常(chang)規(gui)培養(yang)液(ye)，但該法(fa)不(bu)保證有效。推薦用量：慶大霉素(su) 200μg/ml ,四環素(su)10μg/ml ，卡那(nei)霉素(su)50μg/ml 。

2）加溫除菌(jun)：支(zhi)原體(ti)不耐熱，可以(yi)對支(zhi)原體(ti)污染的(de)細(xi)胞(bao)熱處(chu)理除菌(jun)。因高溫對細(xi)胞(bao)本(ben)身也會(hui)產生一(yi)定影響(xiang)，故熱處(chu)理前需先進行預實(shi)驗，確定對細(xi)胞(bao)影響(xiang)zui小(xiao)而(er)能zui大程度(du)的(de)殺死支(zhi)原體(ti)的(de)時(shi)間。

4-黑膠蟲(chong)

黑膠蟲(chong)的存(cun)在(zai)目前(qian)尚有爭議，其在(zai)低倍下為黑色(se)點(dian)狀，高(gao)倍下可(ke)看見黑色(se)的小蟲(chong)游來游去，培(pei)養液也是(shi)不渾的，對細胞生長(chang)狀態不會有明顯影(ying)響，在(zai)細胞增殖(zhi)旺盛之后會自然消失(shi)，除更換血清外(wai)無須特(te)殊處理。

5-原(yuan)蟲

培(pei)養(yang)液(ye)可(ke)(ke)輕微渾濁，顯微鏡(jing)下那些細小(xiao)的(de)(de)點狀(zhuang)物數量(liang)非常多，輕微活動，細胞(bao)(bao)雖然可(ke)(ke)以生長但(dan)繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞(bao)(bao)狀(zhuang)態不(bu)好，邊緣不(bu)清(qing)楚，細胞(bao)(bao)不(bu)透亮。他(ta)(ta)們與(yu)細胞(bao)(bao)可(ke)(ke)共生但(dan)會(hui)(hui)與(yu)細胞(bao)(bao)爭奪營養(yang)。這種共生是非常普遍的(de)(de)，但(dan)他(ta)(ta)們的(de)(de)數量(liang)小(xiao)，細胞(bao)(bao)站優(you)勢(shi)所以不(bu)會(hui)(hui)影響到(dao)細胞(bao)(bao)的(de)(de)正常生長，只有當他(ta)(ta)們到(dao)達一定的(de)(de)數量(liang)時就會(hui)(hui)影響到(dao)細胞(bao)(bao)的(de)(de)生長，zui終(zhong)形(xing)成(cheng)惡性循環(huan)。

6-病毒

組織(zhi)細(xi)胞(bao)培養過程中(zhong)，如(ru)果(guo)沒有除去潛(qian)在(zai)的(de)病毒，就(jiu)會產生病毒污染。目前(qian)，從(cong)原代(dai)猴腎細(xi)胞(bao)的(de)培養中(zhong)已發現不少于20種血(xue)清(qing)性病毒。 盡(jin)管病毒污染的(de)細(xi)胞(bao)不影(ying)響(xiang)原代(dai)培養，但生產疫(yi)(yi)苗是不安全的(de)。因此，潛(qian)在(zai)病毒是細(xi)胞(bao)大(da)量生產和疫(yi)(yi)苗、干擾素等生物制品制作中(zhong)的(de)難題。

7-非同種細胞污染(ran)

即細(xi)胞(bao)(bao)交叉污染，由于細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)操作時各細(xi)胞(bao)(bao)株所需的器(qi)材和溶液沒有嚴格分(fen)開(kai)，往(wang)往(wang)會使(shi)一(yi)種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)被另一(yi)種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)污染。目前(qian)，世界上已有幾十種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)都被HeLa細(xi)胞(bao)(bao)所污染，致使(shi)許多實驗宣告無效。非細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)物(wu)(wu)所造成的化學成分(fen)的污染也(ye)偶(ou)有發(fa)生，大(da)多是由于細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)所需物(wu)(wu)品清洗消毒不*而(er)帶入一(yi)些(xie)有毒化學物(wu)(wu)質所致。

污染是細(xi)胞培養的大敵(di)，預防和避免污染是成功(gong)培養細(xi)胞的關(guan)鍵之一(yi)。危機意識(shi)要貫徹實驗的始終，否則不僅浪(lang)費時間，而(er)且(qie)浪(lang)費人力、物力，甚至造成無法彌補的損失(shi)。

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一、污(wu)染(ran)的預防

預防(fang)(fang)是(shi)防(fang)(fang)止細胞培(pei)養過程中發生污(wu)染的辦法。只有預防(fang)(fang)工作做(zuo)在(zai)前，才能將(jiang)發生污(wu)染的可能性降(jiang)到zui小程度。一般預防(fang)(fang)可從以下幾方面著(zhu)手：

1-從(cong)操作者做起

1操作者責任心(xin)要(yao)(yao)(yao)強，要(yao)(yao)(yao)細(xi)心(xin)穩重，操作技術要(yao)(yao)(yao)熟練。進無(wu)(wu)菌(jun)(jun)室前要(yao)(yao)(yao)用(yong)肥(fei)皂洗手(shou)(shou)或用(yong)5%新潔爾滅浸(jin)泡(pao)5分鐘，按規(gui)定穿(chuan)隔離(li)衣。進入后關好門，坐下來盡量少(shao)走動。工(gong)作開始要(yao)(yao)(yao)先(xian)用(yong)75%酒(jiu)精棉球擦(ca)(ca)手(shou)(shou)、擦(ca)(ca)瓶(ping)口和燒灼瓶(ping)口。事先(xian)要(yao)(yao)(yao)嚴格檢查器(qi)材(cai)、溶液和培養物，不要(yao)(yao)(yao)把污(wu)染品或未經消毒的物品帶入無(wu)(wu)菌(jun)(jun)室內，更不能隨便使(shi)用(yong)，以免造成大批污(wu)染。

2、操(cao)作者動作要輕，必(bi)須在火焰周圍無菌區(qu)內打開瓶口，并將瓶口轉動燒(shao)灼。操(cao)作時盡量(liang)不要談(tan)話，若打噴(pen)嚏或(huo)咳嗽應轉向背面(mian)。

3、操(cao)作時要常(chang)更換吸管(guan)，切勿一根吸管(guan)做到(dao)底。一旦發現吸管(guan)口接觸了手和其他污(wu)染物(wu)品應(ying)棄去(qu)。實(shi)驗(yan)完(wan)畢及時收(shou)拾，保持實(shi)驗(yan)室清(qing)潔整(zheng)齊，zui后用消毒水浸泡的紗布(bu)擦臺面。

2-從物品、用品消(xiao)毒滅菌著手

細胞培養所用物品清洗、消毒要*，各種溶(rong)液滅菌(jun)(jun)除菌(jun)(jun)要仔細，并在無菌(jun)(jun)試驗(yan)陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌(jun)(jun)器材要定期清潔消毒滅菌(jun)(jun)。

3-防(fang)止細胞交叉污染

在進行(xing)多種細胞(bao)培養操作(zuo)時，所(suo)用器具要(yao)嚴格區(qu)分，做上(shang)標(biao)記便于辨別。并按順序(xu)進行(xing)操作(zuo)，避免(mian)一起進行(xing)時易發(fa)生混(hun)亂(luan)。

在進行換液或傳代(dai)操作時(shi)，注(zhu)射器和(he)滴管(guan)不要(yao)觸及細(xi)胞培養(yang)瓶瓶口，以免把細(xi)胞帶到(dao)培養(yang)液中污染其他(ta)細(xi)胞。

所有(you)細(xi)胞一旦(dan)購置(zhi)，或從(cong)別處引入，或自己建立，均(jun)應及早留種凍存，一旦(dan)發(fa)生(sheng)污染可棄(qi)之復蘇，重新培養。

二、污染(ran)的清除

培養細(xi)(xi)胞(bao)一經污(wu)(wu)染，多數較(jiao)難處(chu)理。如果污(wu)(wu)染細(xi)(xi)胞(bao)價值(zhi)不大，宜棄(qi)之；有細(xi)(xi)胞(bao)株留存的(de)或可購(gou)置的(de)，可在尋找原因后*消毒操作室，復(fu)蘇或重(zhong)新(xin)購(gou)置細(xi)(xi)胞(bao)，再培養。若污(wu)(wu)染細(xi)(xi)胞(bao)價值(zhi)較(jiao)大，又難于重(zhong)新(xin)得(de)到，可采取以下辦(ban)法清除。

1-使用抗生(sheng)素

抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)對殺(sha)滅細菌較(jiao)有效。聯合(he)用(yong)(yong)藥比單(dan)獨用(yong)(yong)藥效果好。預防用(yong)(yong)藥比污(wu)染后(hou)(hou)再(zai)用(yong)(yong)藥效果好。預防用(yong)(yong)藥一般用(yong)(yong)雙抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)（青霉(mei)素(su)(su)(su)100u/mL加(jia)鏈霉(mei)素(su)(su)(su)100μg/mL），污(wu)染后(hou)(hou)清(qing)除(chu)(chu)(chu)用(yong)(yong)藥需(xu)采(cai)用(yong)(yong)大(da)于常(chang)用(yong)(yong)量5～10倍的(de)沖洗法，于加(jia)藥后(hou)(hou)作用(yong)(yong)24～48小(xiao)時(shi)，再(zai)換(huan)常(chang)規培(pei)(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)。此法在污(wu)染早期(qi)可(ke)能(neng)有效。所用(yong)(yong)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)品種除(chu)(chu)(chu)青霉(mei)素(su)(su)(su)、鏈霉(mei)素(su)(su)(su)外，還可(ke)用(yong)(yong)慶大(da)霉(mei)素(su)(su)(su)、卡那霉(mei)素(su)(su)(su)、多粘菌素(su)(su)(su)、四(si)(si)環素(su)(su)(su)、制霉(mei)菌素(su)(su)(su)等(deng)。常(chang)用(yong)(yong)400～800μg/mL卡那霉(mei)素(su)(su)(su)或(huo)200μg/mL四(si)(si)環素(su)(su)(su)處理，每隔(ge)2～3日換(huan)液(ye)(ye)(ye)(ye)1次(ci)，傳1～2代(dai)進行治療。近(jin)年來有報道，4-氟(fu)，2-羥(qian)基(ji)喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素(su)(su)(su)衍(yan)生(sheng)物(wu)（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四(si)(si)環素(su)(su)(su)衍(yan)生(sheng)物(wu)（BM-2）等(deng)三種抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)單(dan)用(yong)(yong)或(huo)合(he)用(yong)(yong)對殺(sha)滅支原(yuan)體有效。這三種抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)均用(yong)(yong)PBS配成250濃縮(suo)液(ye)(ye)(ye)(ye)，-20℃保存(cun)備用(yong)(yong)，使用(yong)(yong)濃度(du)Cip為(wei)10μg/mL，BM-1為(wei)10μg/mL，BM-2為(wei)5μg/mL。使用(yong)(yong)時(shi)先吸(xi)除(chu)(chu)(chu)污(wu)染的(de)培(pei)(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)，加(jia)入(ru)含BM-1的(de)RPMI1640培(pei)(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)，3天后(hou)(hou)再(zai)吸(xi)除(chu)(chu)(chu)培(pei)(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)，加(jia)入(ru)含BM-2的(de)RPMI1640培(pei)(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)，培(pei)(pei)養4天，如此連續(xu)3個輪次(ci)，直(zhi)至用(yong)(yong)33258熒光染色鏡檢證(zheng)明已清(qing)除(chu)(chu)(chu)支原(yuan)體后(hou)(hou)，再(zai)加(jia)正常(chang)培(pei)(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)培(pei)(pei)養傳代(dai)3-4次(ci)。

2-使(shi)用支原體(ti)(ti)特異性血清

用(yong)5%的(de)兔支(zhi)原體(ti)免疫血清（血凝效價1:320以上）可(ke)去除(chu)支(zhi)原體(ti)污(wu)染，因特(te)異(yi)抗(kang)體(ti)可(ke)抑制支(zhi)原體(ti)生長，故經(jing)抗(kang)血清處理后11天即轉為陰性(xing)，并且5個(ge)月后仍(reng)為陰性(xing)。但此法(fa)比較麻煩(fan)，不如用(yong)抗(kang)生素方便、經(jing)濟(ji)。

3-加溫處理

將(jiang)污(wu)染的組(zu)織培養物放(fang)在41℃培養18小(xiao)時(shi)(shi)，可殺死支(zhi)原(yuan)體，但對細胞有不良影(ying)響(xiang)。所以在處(chu)理(li)前要進行(xing)預(yu)試(shi)驗，摸索能(neng)zui大限度殺死支(zhi)原(yuan)體又對細胞影(ying)響(xiang)zui小(xiao)的加熱時(shi)(shi)間。此法有時(shi)(shi)不可靠(kao)。若先(xian)用藥(yao)物處(chu)理(li)后，再以41℃加溫處(chu)理(li)效果更佳。

4-其他方(fang)法

除了(le)上述去除污染的(de)方法外，還有動物體(ti)內接種(zhong)除菌(jun)法、巨噬細胞吞(tun)噬法、污染培養(yang)瓶中加溴尿(niao)嘧啶再用光照射的(de)方法及過濾法等，但均較麻煩，且效果不(bu)確(que)定。所以一(yi)旦支(zhi)原體(ti)污染，除非有特別重(zhong)要價值，一(yi)般(ban)均棄之重(zhong)新培養(yang)。

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小(xiao)鼠試劑(ji)盒,小鼠elisa試劑(ji)盒,酶聯免(mian)疫試(shi)劑盒

大鼠試劑盒(he),大鼠ELISA試劑盒(he),酶(mei)聯免疫試劑盒(he)

人試劑盒,人elisa試劑盒,酶聯(lian)免疫(yi)試劑盒

植物病(bing)毒、細(xi)菌、真菌、植物激素和轉(zhuan)基因作(zuo)物的農(nong)業診斷試劑(ji)盒

動植物疾病(bing)診斷類(lei)如豬、牛、羊、馬等家(jia)畜和禽類(lei)以及(ji)寵物類(lei)檢測試劑盒

15596026   TRIzol試(shi)劑  

15596018   TRIzol試劑  

11668027   脂質體(ti)(ti)2000轉染試劑

11668019   脂質體2000轉染試劑

13778075   RNAiMAX轉染試劑

17504044   B-27（黃顏色）      

12587010   B-27 （黃(huang)顏色(se)）不含(han)維生素A

17502048    N-2 （粉紅顏(yan)色）