人結腸癌(ai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)系：SW48細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，SW480細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，CACO-2細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，SW620細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，HCT-8細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，HCT/V細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，HCT-116細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，LoVo細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，HRT-18細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，HT-29細(xi)(xi)(xi)胞(bao)等

人宮頸癌細(xi)(xi)(xi)胞(bao)系(xi)：hela細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，HT-3細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，C33A細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，SN12C細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，SKG-IIIa細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，Hela S3細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，DoTc2-4510細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，Ca Ski細(xi)(xi)(xi)胞(bao) ，ME-180細(xi)(xi)(xi)胞(bao)等

DC2.4細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)株(zhu)  MC38細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)株(zhu)，MLE-12細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，bEND.3細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) HT-22細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，HK-2細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) THP-1細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) WRO細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) FRO細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) Molt-4細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)系 SH-SY-5Y細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) U87-MG細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)

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1-細菌(jun)

細(xi)菌污染常見(jian)的有(you)(you)大(da)(da)(da)腸桿菌，葡萄球(qiu)菌等。細(xi)菌污染較(jiao)易(yi)發現，在普(pu)通(tong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)為黑色細(xi)沙狀，培養液(ye)一(yi)般(ban)會在短時(shi)間內變(bian)黃，有(you)(you)時(shi)靜置(zhi)的培養液(ye)不混，稍加震蕩會有(you)(you)很多混濁物漂起。顯(xian)微鏡下(xia)可(ke)見(jian)培養液(ye)中有(you)(you)大(da)(da)(da)量(liang)圓球(qiu)狀顆粒物漂浮，有(you)(you)時(shi)在細(xi)胞(bao)(bao)表面(mian)及周圍有(you)(you)大(da)(da)(da)量(liang)細(xi)菌存在，細(xi)胞(bao)(bao)停止(zhi)生長并(bing)有(you)(you)中毒表現。

處理：①在培(pei)養液中加入相應的(de)抗生素，能夠預防絕大多數(shu)的(de)細菌污染。

2-真菌

真菌(jun)(jun)(jun)污(wu)(wu)染(ran)是細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)(yang)過(guo)程中(zhong)(zhong)zui常見(jian)的(de)一種，尤其(qi)梅雨季節快要到(dao)了，進行細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)(yang)時(shi)更易污(wu)(wu)染(ran)。污(wu)(wu)染(ran)細(xi)胞(bao)的(de)多(duo)(duo)為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌(jun)(jun)(jun)、孢子霉、白念珠菌(jun)(jun)(jun)、酵母菌(jun)(jun)(jun)等。霉菌(jun)(jun)(jun)污(wu)(wu)染(ran)后多(duo)(duo)數在培養(yang)(yang)(yang)液(ye)中(zhong)(zhong)形成白色或淺黃(huang)色漂浮物。一般肉(rou)眼可(ke)見(jian)，較易被發(fa)現，短期內培養(yang)(yang)(yang)液(ye)多(duo)(duo)不混濁(zhuo)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下可(ke)見(jian)于細(xi)胞(bao)之間縱(zong)橫交錯(cuo)穿行的(de)絲(si)狀、管狀、及樹枝狀菌(jun)(jun)(jun)絲(si)，并懸浮飄蕩在培養(yang)(yang)(yang)液(ye)中(zhong)(zhong)。

很多菌(jun)(jun)絲(si)在(zai)(zai)高倍鏡(jing)可見到有鏈狀排(pai)列的(de)菌(jun)(jun)珠；念珠菌(jun)(jun)或酵母菌(jun)(jun)形(xing)(xing)態(tai)呈卵形(xing)(xing)，散(san)在(zai)(zai)細胞(bao)周邊和細胞(bao)之間(jian)生長。鏡(jing)下看(kan)時，要將(jiang)培養瓶(ping)用酒精棉(mian)球擦干凈，以防(fang)止(zhi)與瓶(ping)外(wai)(wai)尤其瓶(ping)底(di)外(wai)(wai)面生長的(de)菌(jun)(jun)絲(si)相混淆。

真菌(jun)污染后，細(xi)胞(bao)生(sheng)長變慢，但zui后由于營養(yang)耗盡及(ji)毒性(xing)作用而使細(xi)胞(bao)脫落死亡。真菌(jun)生(sheng)長的比較慢，不象細(xi)菌(jun)那(nei)么容易被(bei)發現，但是一旦發現有它的存在細(xi)胞(bao)就(jiu)被(bei)污染了，也很難救活了。

3-支原體(ti)

支(zhi)原體的(de)(de)大小介(jie)于細(xi)菌和(he)病毒之(zhi)間，是一種(zhong)獨(du)立生(sheng)活的(de)(de)微(wei)生(sheng)物。對熱敏(min)感(gan)，對一般抗生(sheng)素不敏(min)感(gan)。支(zhi)原體的(de)(de)形態多變，多吸附(fu)在(zai)細(xi)胞(bao)表(biao)面(mian)(mian)和(he)細(xi)胞(bao)之(zhi)間。電鏡(jing)下觀察，中心有高密(mi)度的(de)(de)密(mi)集顆粒(li)，橫斷面(mian)(mian)與細(xi)胞(bao)微(wei)絨毛相似。

因(yin)國(guo)內(nei)的血清大多數都沒(mei)有做(zuo)支原體(ti)(ti)陰性檢測，而支原體(ti)(ti)又是牛血清中(zhong)zui常見的微生物之一。支原體(ti)(ti)污染細胞后，培養(yang)液輕微發生混濁．但(dan)細胞變化不(bu)顯著(zhu)，隨著(zhu)細胞的培養(yang)會慢(man)(man)慢(man)(man)死亡。

支(zhi)原體(ti)污染(ran)檢測（熒光染(ran)色法）：DNA和與DNA特異性結(jie)合的(de)熒光染(ran)料(liao)結(jie)合，使得支(zhi)原體(ti)的(de)DNA著色，然(ran)后用熒光顯(xian)微鏡觀察。鏡下支(zhi)原體(ti)為散在于(yu)細胞(bao)同圍(wei)或附(fu)于(yu)細胞(bao)膜(mo)表面的(de)亮(liang)綠(lv)色小點(dian)。

解(jie)決(jue)：

1）抗生(sheng)素排(pai)除法：支原體(ti)(ti)污染預防比(bi)解(jie)決(jue)好。如果不(bu)小(xiao)心污染后，可(ke)加(jia)入高濃度抗生(sheng)素（常(chang)規(gui)使用的5倍濃度）作用24-48小(xiao)時，再(zai)換(huan)入常(chang)規(gui)培養液，但該法不(bu)保證(zheng)有(you)效。推(tui)薦用量：慶大霉素 200μg/ml ,四環素10μg/ml ，卡那霉素50μg/ml 。

2）加溫除菌(jun)：支原體不耐熱(re)，可以對(dui)(dui)支原體污染的(de)細胞(bao)熱(re)處理(li)除菌(jun)。因高溫對(dui)(dui)細胞(bao)本身也會產生一定(ding)(ding)影響(xiang)，故熱(re)處理(li)前需先進行(xing)預(yu)實驗，確定(ding)(ding)對(dui)(dui)細胞(bao)影響(xiang)zui小而能zui大(da)程度的(de)殺(sha)死支原體的(de)時間(jian)。

4-黑膠(jiao)蟲(chong)

黑(hei)膠(jiao)蟲的存在目前尚有爭(zheng)議，其在低倍下為黑(hei)色點狀，高倍下可看(kan)見黑(hei)色的小蟲游(you)來游(you)去，培養液(ye)也是不渾的，對細(xi)胞(bao)生長狀態不會(hui)有明顯影(ying)響，在細(xi)胞(bao)增殖(zhi)旺盛之后會(hui)自然消失，除(chu)更換血清外無須特殊處理。

5-原(yuan)蟲

培養液可輕微渾(hun)濁，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)那些細(xi)(xi)小的(de)點狀物數(shu)量非常(chang)(chang)多，輕微活動，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)雖然(ran)可以(yi)生(sheng)(sheng)(sheng)長但繁(fan)殖速度卻(que)明顯(xian)減慢，而(er)且(qie)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)狀態不(bu)(bu)好，邊(bian)緣不(bu)(bu)清(qing)楚，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)不(bu)(bu)透亮。他們(men)與細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)可共(gong)生(sheng)(sheng)(sheng)但會(hui)(hui)與細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)爭奪營養。這種共(gong)生(sheng)(sheng)(sheng)是非常(chang)(chang)普遍的(de)，但他們(men)的(de)數(shu)量小，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)站優勢所以(yi)不(bu)(bu)會(hui)(hui)影響到細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)正(zheng)常(chang)(chang)生(sheng)(sheng)(sheng)長，只有當他們(men)到達一定的(de)數(shu)量時就(jiu)會(hui)(hui)影響到細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)生(sheng)(sheng)(sheng)長，zui終形成惡性循(xun)環(huan)。

6-病毒

組織細(xi)胞(bao)培養(yang)過(guo)程中(zhong)，如(ru)果(guo)沒有除去潛在(zai)的(de)(de)病毒，就會產(chan)生病毒污染。目(mu)前(qian)，從原代猴腎細(xi)胞(bao)的(de)(de)培養(yang)中(zhong)已發現不少(shao)于20種血(xue)清性(xing)病毒。 盡管病毒污染的(de)(de)細(xi)胞(bao)不影響原代培養(yang)，但(dan)生產(chan)疫苗(miao)(miao)是(shi)不安(an)全的(de)(de)。因此，潛在(zai)病毒是(shi)細(xi)胞(bao)大量生產(chan)和(he)疫苗(miao)(miao)、干擾素等生物制(zhi)品制(zhi)作中(zhong)的(de)(de)難題。

7-非同種細胞污染

即細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞交叉污(wu)染，由于(yu)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞培養(yang)操作時各細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞株所(suo)需的(de)器(qi)材(cai)和溶(rong)液沒(mei)有(you)嚴格分開，往往會(hui)使一種細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞被另一種細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞污(wu)染。目前，世界上已有(you)幾十種細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞都被HeLa細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞所(suo)污(wu)染，致(zhi)使許多實(shi)驗(yan)宣告無(wu)效。非細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞培養(yang)物所(suo)造成(cheng)的(de)化學(xue)成(cheng)分的(de)污(wu)染也偶有(you)發生，大多是由于(yu)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞培養(yang)所(suo)需物品清洗消毒不*而帶入一些(xie)有(you)毒化學(xue)物質所(suo)致(zhi)。

污染(ran)是細胞培養的(de)(de)大敵，預防和避(bi)免污染(ran)是成功(gong)培養細胞的(de)(de)關鍵之一。危機意識要貫徹(che)實驗的(de)(de)始終，否則不僅(jin)浪費時間(jian)，而且浪費人(ren)力(li)、物力(li)，甚至造(zao)成無法彌補的(de)(de)損失。

（如何預(yu)防細胞培養的(de)污(wu)染(ran)(ran)和清(qing)除(chu)這些污(wu)染(ran)(ran)物呢？）慧穎 細胞庫 技術為您解答：

一、污染(ran)的預防

預防(fang)是(shi)防(fang)止細(xi)胞培養過(guo)程中發生(sheng)污染(ran)的辦法。只(zhi)有(you)預防(fang)工作做在前，才(cai)能(neng)將發生(sheng)污染(ran)的可能(neng)性降到(dao)zui小程度。一般預防(fang)可從以下幾方面著(zhu)手：

1-從操作者做(zuo)起

1操作(zuo)者責任心要(yao)(yao)(yao)強，要(yao)(yao)(yao)細心穩重，操作(zuo)技術(shu)要(yao)(yao)(yao)熟練。進無菌室前要(yao)(yao)(yao)用(yong)(yong)(yong)肥皂洗手或(huo)用(yong)(yong)(yong)5%新潔(jie)爾滅浸泡5分鐘，按規定穿隔離衣。進入(ru)后關好門，坐下來盡量少走(zou)動。工作(zuo)開(kai)始(shi)要(yao)(yao)(yao)先用(yong)(yong)(yong)75%酒(jiu)精棉(mian)球擦(ca)手、擦(ca)瓶口和燒灼瓶口。事先要(yao)(yao)(yao)嚴格檢查器材(cai)、溶液和培養物(wu)(wu)，不要(yao)(yao)(yao)把污染(ran)品(pin)或(huo)未(wei)經消毒的物(wu)(wu)品(pin)帶入(ru)無菌室內，更不能(neng)隨便使用(yong)(yong)(yong)，以(yi)免造成(cheng)大批污染(ran)。

2、操作(zuo)者動作(zuo)要輕，必(bi)須在火焰周圍無菌(jun)區內打開(kai)瓶(ping)口，并將(jiang)瓶(ping)口轉(zhuan)動燒灼。操作(zuo)時盡量不要談話，若打噴嚏(ti)或(huo)咳嗽應轉(zhuan)向背面。

3、操作(zuo)時(shi)要常更換吸(xi)管，切勿(wu)一根(gen)吸(xi)管做到底。一旦發現(xian)吸(xi)管口接觸了手和(he)其他污染(ran)物(wu)品應棄(qi)去。實驗(yan)完畢(bi)及時(shi)收拾，保持實驗(yan)室清潔整齊，zui后(hou)用消毒水浸泡(pao)的紗布擦臺(tai)面。

2-從物品(pin)、用品(pin)消(xiao)毒滅菌著手

細胞(bao)培(pei)養所用物品清(qing)洗、消毒(du)要(yao)*，各種溶液(ye)滅(mie)菌(jun)除菌(jun)要(yao)仔細，并在無菌(jun)試(shi)驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌(jun)器材要(yao)定期清(qing)潔(jie)消毒(du)滅(mie)菌(jun)。

3-防止細胞交(jiao)叉污染

在進(jin)行(xing)多種細(xi)胞培養操作時，所(suo)用器具(ju)要嚴格(ge)區分，做上標記便于辨別。并按順序進(jin)行(xing)操作，避(bi)免一起進(jin)行(xing)時易發(fa)生混亂(luan)。

在進行換液或傳代操作時，注射器(qi)和滴管不要觸及細胞培養(yang)瓶瓶口，以免把(ba)細胞帶到(dao)培養(yang)液中污染(ran)其他細胞。

所有(you)細胞(bao)一(yi)旦購置，或從(cong)別處引入，或自己建立(li)，均應及(ji)早留種凍存，一(yi)旦發生污染可棄之復蘇(su)，重新培養。

二(er)、污染(ran)的清(qing)除

培(pei)養(yang)細胞(bao)(bao)一(yi)經污(wu)染，多(duo)數較難(nan)處理。如果污(wu)染細胞(bao)(bao)價值(zhi)不大，宜棄之；有(you)細胞(bao)(bao)株留存的(de)或可購置的(de)，可在(zai)尋找(zhao)原因后*消毒(du)操作室(shi)，復蘇或重(zhong)新購置細胞(bao)(bao)，再(zai)培(pei)養(yang)。若(ruo)污(wu)染細胞(bao)(bao)價值(zhi)較大，又(you)難(nan)于(yu)重(zhong)新得到，可采取以下辦法清除(chu)。

1-使(shi)用抗生(sheng)素

抗(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)對(dui)殺(sha)滅細(xi)菌(jun)(jun)較有(you)效(xiao)(xiao)。聯合(he)(he)用藥(yao)比(bi)單獨用藥(yao)效(xiao)(xiao)果好。預防(fang)用藥(yao)比(bi)污(wu)染(ran)后再(zai)(zai)用藥(yao)效(xiao)(xiao)果好。預防(fang)用藥(yao)一般用雙抗(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)（青霉素(su)(su)(su)100u/mL加(jia)鏈(lian)霉素(su)(su)(su)100μg/mL），污(wu)染(ran)后清(qing)(qing)除用藥(yao)需(xu)采用大于(yu)常(chang)(chang)用量5～10倍的沖洗法，于(yu)加(jia)藥(yao)后作用24～48小時，再(zai)(zai)換常(chang)(chang)規培(pei)養(yang)(yang)液(ye)(ye)。此法在污(wu)染(ran)早(zao)期可能有(you)效(xiao)(xiao)。所用抗(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)品種(zhong)除青霉素(su)(su)(su)、鏈(lian)霉素(su)(su)(su)外(wai)，還可用慶(qing)大霉素(su)(su)(su)、卡那霉素(su)(su)(su)、多粘菌(jun)(jun)素(su)(su)(su)、四環(huan)素(su)(su)(su)、制霉菌(jun)(jun)素(su)(su)(su)等(deng)。常(chang)(chang)用400～800μg/mL卡那霉素(su)(su)(su)或200μg/mL四環(huan)素(su)(su)(su)處理，每隔2～3日換液(ye)(ye)1次，傳(chuan)1～2代進(jin)行治(zhi)療(liao)。近(jin)年來有(you)報(bao)道，4-氟(fu)，2-羥基喹(kui)啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)物(wu)（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huan)素(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)物(wu)（BM-2）等(deng)三(san)種(zhong)抗(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)單用或合(he)(he)用對(dui)殺(sha)滅支(zhi)原(yuan)體有(you)效(xiao)(xiao)。這(zhe)三(san)種(zhong)抗(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)均用PBS配(pei)成(cheng)250濃縮液(ye)(ye)，-20℃保存(cun)備(bei)用，使用濃度Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。使用時先(xian)吸除污(wu)染(ran)的培(pei)養(yang)(yang)液(ye)(ye)，加(jia)入含BM-1的RPMI1640培(pei)養(yang)(yang)液(ye)(ye)，3天(tian)后再(zai)(zai)吸除培(pei)養(yang)(yang)液(ye)(ye)，加(jia)入含BM-2的RPMI1640培(pei)養(yang)(yang)液(ye)(ye)，培(pei)養(yang)(yang)4天(tian)，如此連續3個輪次，直至用33258熒光染(ran)色(se)鏡檢(jian)證明已清(qing)(qing)除支(zhi)原(yuan)體后，再(zai)(zai)加(jia)正常(chang)(chang)培(pei)養(yang)(yang)液(ye)(ye)培(pei)養(yang)(yang)傳(chuan)代3-4次。

2-使用支原體(ti)特異性血(xue)清(qing)

用5%的兔支原(yuan)(yuan)體免疫血(xue)清（血(xue)凝效價1:320以上）可去除(chu)支原(yuan)(yuan)體污染，因特異抗(kang)(kang)體可抑制(zhi)支原(yuan)(yuan)體生長，故經抗(kang)(kang)血(xue)清處理(li)后11天即轉為(wei)陰性，并且(qie)5個月后仍為(wei)陰性。但此法比較(jiao)麻煩，不如用抗(kang)(kang)生素方便、經濟。

3-加溫處理

將污染的組織培養物放在(zai)41℃培養18小(xiao)時，可殺死支原體(ti)，但(dan)對細(xi)(xi)胞(bao)有(you)不(bu)良影(ying)響。所(suo)以在(zai)處(chu)理前要進(jin)行預試驗，摸索能zui大限度殺死支原體(ti)又對細(xi)(xi)胞(bao)影(ying)響zui小(xiao)的加(jia)熱時間。此法(fa)有(you)時不(bu)可靠。若(ruo)先用藥物處(chu)理后(hou)，再以41℃加(jia)溫處(chu)理效果更佳。

4-其他(ta)方(fang)法

除了上(shang)述去除污染(ran)的方法外，還有動(dong)物體(ti)內接種(zhong)除菌法、巨噬細胞(bao)吞噬法、污染(ran)培(pei)養(yang)瓶中加溴尿嘧(mi)啶(ding)再用光照射(she)的方法及過濾(lv)法等，但(dan)均較麻煩，且效(xiao)果不確定。所以一(yi)旦支原體(ti)污染(ran)，除非(fei)有特(te)別(bie)重(zhong)(zhong)要價值(zhi)，一(yi)般均棄(qi)之(zhi)重(zhong)(zhong)新培(pei)養(yang)。

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綿羊試劑盒(he),綿羊elisa試(shi)劑盒,酶聯免疫試劑盒

馬試劑盒,馬elisa試劑盒,酶聯(lian)免(mian)疫試劑(ji)盒

駱駝試劑盒,駱駝elisa試劑(ji)盒,酶聯免疫試劑盒(he)

鹿試劑盒,鹿elisa試劑(ji)盒,酶聯(lian)免疫(yi)試(shi)劑盒(he)

雞試劑(ji)盒,雞(ji)ELISA試劑盒,酶聯免疫試劑(ji)盒

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小鼠試(shi)劑盒,小鼠elisa試(shi)劑盒,酶聯免疫試劑盒(he)

大鼠試(shi)劑盒(he),大鼠ELISA試劑(ji)盒,酶(mei)聯免疫試劑盒(he)

人試劑盒,人elisa試劑盒,酶(mei)聯免疫試(shi)劑盒

植物(wu)(wu)病毒(du)、細菌、真菌、植物(wu)(wu)激素和(he)轉基因作物(wu)(wu)的農業診(zhen)斷試劑(ji)盒

動植物(wu)疾(ji)病診斷類(lei)如豬(zhu)、牛(niu)、羊、馬等家(jia)畜和禽(qin)類(lei)以及寵物(wu)類(lei)檢測試劑盒

15596026   TRIzol試劑  

15596018   TRIzol試劑  

11668027   脂(zhi)質體(ti)2000轉染試劑(ji)

11668019   脂(zhi)質體(ti)2000轉染試劑

13778075   RNAiMAX轉染試劑

17504044   B-27（黃(huang)顏色）      

12587010   B-27 （黃顏色）不含維生素A

17502048    N-2 （粉紅顏色）