人結(jie)腸癌(ai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)系：SW48細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SW480細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，CACO-2細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SW620細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-8細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT/V細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-116細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，LoVo細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HRT-18細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HT-29細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)等

人宮頸癌細胞(bao)(bao)(bao)系：hela細胞(bao)(bao)(bao)，HT-3細胞(bao)(bao)(bao)，C33A細胞(bao)(bao)(bao)，SN12C細胞(bao)(bao)(bao)，SKG-IIIa細胞(bao)(bao)(bao)，Hela S3細胞(bao)(bao)(bao)，DoTc2-4510細胞(bao)(bao)(bao)，Ca Ski細胞(bao)(bao)(bao) ，ME-180細胞(bao)(bao)(bao)等

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OVCAR5細胞 OVCAR5細胞 卵巢癌細胞（細胞培養中常見的生物污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)類型有7種，分別是細菌污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)、支原體污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)、原蟲(chong)污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)、黑膠(jiao)蟲(chong)污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)、真菌污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)、病毒污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)以(yi)及(ji)非細胞污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)，那么他們污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)細胞的特(te)點分別是什么呢？怎樣(yang)能夠減少污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)現象的發生？）

1-細菌

細(xi)菌污染常見(jian)的有(you)大腸(chang)桿菌，葡萄(tao)球菌等。細(xi)菌污染較易發現，在(zai)(zai)普(pu)通倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)為黑色細(xi)沙狀，培(pei)養液(ye)一(yi)般會(hui)在(zai)(zai)短(duan)時(shi)間內變黃(huang)，有(you)時(shi)靜置的培(pei)養液(ye)不混(hun)，稍加震蕩會(hui)有(you)很多(duo)混(hun)濁物漂起。顯(xian)微鏡(jing)下(xia)可見(jian)培(pei)養液(ye)中(zhong)(zhong)有(you)大量圓球狀顆粒(li)物漂浮(fu)，有(you)時(shi)在(zai)(zai)細(xi)胞(bao)表(biao)面(mian)及(ji)周圍有(you)大量細(xi)菌存在(zai)(zai)，細(xi)胞(bao)停止生長并有(you)中(zhong)(zhong)毒表(biao)現。

處理：①在培養液(ye)中加入相(xiang)應的(de)抗生素(su)，能(neng)夠預防絕大多數的(de)細菌污染(ran)。

2-真菌(jun)

真菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染是細(xi)(xi)胞(bao)培養過程中zui常見的(de)一種，尤(you)其梅雨季(ji)節快要到了(le)，進行(xing)細(xi)(xi)胞(bao)培養時更易污(wu)染。污(wu)染細(xi)(xi)胞(bao)的(de)多為煙曲霉(mei)(mei)、黑曲霉(mei)(mei)、毛霉(mei)(mei)菌(jun)(jun)(jun)、孢子霉(mei)(mei)、白念珠(zhu)菌(jun)(jun)(jun)、酵(jiao)母菌(jun)(jun)(jun)等。霉(mei)(mei)菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染后多數(shu)在(zai)培養液中形(xing)成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可(ke)見，較易被發現(xian)，短期內培養液多不混濁，倒置顯微鏡(jing)下可(ke)見于細(xi)(xi)胞(bao)之間縱橫交錯(cuo)穿(chuan)行(xing)的(de)絲狀、管狀、及樹枝狀菌(jun)(jun)(jun)絲，并懸浮飄蕩在(zai)培養液中。

很(hen)多菌(jun)絲在高倍鏡可見到有(you)鏈狀排列的菌(jun)珠(zhu)；念珠(zhu)菌(jun)或酵(jiao)母菌(jun)形態呈卵形，散在細胞周邊和細胞之間生(sheng)長。鏡下看時，要將(jiang)培養瓶(ping)用(yong)酒精棉(mian)球擦干凈，以防止與(yu)瓶(ping)外(wai)尤其瓶(ping)底外(wai)面生(sheng)長的菌(jun)絲相混淆(xiao)。

真菌污染后(hou)，細(xi)胞生長(chang)變慢，但(dan)zui后(hou)由于營養耗盡及毒性(xing)作用而使細(xi)胞脫落死亡。真菌生長(chang)的比較慢，不象細(xi)菌那么容易被(bei)發(fa)現(xian)，但(dan)是一旦發(fa)現(xian)有它的存在細(xi)胞就被(bei)污染了(le)，也很難救(jiu)活(huo)了(le)。

3-支(zhi)原體(ti)

支原(yuan)體(ti)的大(da)小介于細菌和(he)病(bing)毒之間，是一(yi)種獨(du)立生(sheng)活的微(wei)生(sheng)物。對熱(re)敏感，對一(yi)般(ban)抗(kang)生(sheng)素不敏感。支原(yuan)體(ti)的形態多變，多吸附在細胞(bao)表面和(he)細胞(bao)之間。電鏡下觀察，中心有高密度的密集顆粒，橫斷面與細胞(bao)微(wei)絨毛(mao)相似。

因國內的血清大多數(shu)都沒有做支(zhi)原體陰性檢測，而支(zhi)原體又是(shi)牛血清中(zhong)zui常見(jian)的微(wei)生(sheng)物之一(yi)。支(zhi)原體污染(ran)細(xi)胞(bao)后，培養液輕(qing)微(wei)發生(sheng)混濁．但細(xi)胞(bao)變化不顯著(zhu)，隨(sui)著(zhu)細(xi)胞(bao)的培養會慢慢死亡。

支(zhi)原體污染檢測(ce)（熒光(guang)(guang)染色法）：DNA和(he)與DNA特(te)異(yi)性結合的熒光(guang)(guang)染料(liao)結合，使得支(zhi)原體的DNA著色，然后用熒光(guang)(guang)顯微鏡(jing)觀察(cha)。鏡(jing)下支(zhi)原體為散在于(yu)細(xi)胞(bao)同圍(wei)或附于(yu)細(xi)胞(bao)膜(mo)表面(mian)的亮綠色小點(dian)。

解決：

1）抗生素排除法：支原體污(wu)染預(yu)防(fang)比解決(jue)好。如果(guo)不小心污(wu)染后(hou)，可加入(ru)高濃(nong)度抗生素（常規使用(yong)(yong)的5倍濃(nong)度）作(zuo)用(yong)(yong)24-48小時(shi)，再換入(ru)常規培(pei)養液，但該法不保證有效。推薦用(yong)(yong)量：慶大霉素 200μg/ml ,四環素10μg/ml ，卡那霉素50μg/ml 。

2）加溫除菌(jun)：支(zhi)(zhi)原(yuan)體不耐(nai)熱(re)，可以對(dui)支(zhi)(zhi)原(yuan)體污染(ran)的(de)細胞(bao)熱(re)處理除菌(jun)。因高溫對(dui)細胞(bao)本身(shen)也會(hui)產生一(yi)定影響(xiang)，故熱(re)處理前需(xu)先進行預實驗，確定對(dui)細胞(bao)影響(xiang)zui小而能(neng)zui大程度的(de)殺死支(zhi)(zhi)原(yuan)體的(de)時(shi)間。

4-黑膠蟲

黑膠蟲的(de)存在目(mu)前尚(shang)有(you)爭(zheng)議(yi)，其在低倍(bei)下為黑色(se)點狀，高(gao)倍(bei)下可看見黑色(se)的(de)小蟲游(you)來游(you)去，培養液也是(shi)不(bu)渾的(de)，對細胞生長狀態(tai)不(bu)會有(you)明顯影(ying)響，在細胞增(zeng)殖旺盛之(zhi)后會自然(ran)消失，除更(geng)換血清外無須特(te)殊處理(li)。

5-原蟲

培養液可(ke)輕(qing)微渾濁(zhuo)，顯微鏡下(xia)那些(xie)細(xi)小(xiao)的(de)點狀(zhuang)物數(shu)量(liang)非常多，輕(qing)微活動，細(xi)胞(bao)雖然可(ke)以生(sheng)(sheng)長但(dan)繁殖速度卻明顯減慢(man)，而且細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，邊(bian)緣(yuan)不(bu)清(qing)楚，細(xi)胞(bao)不(bu)透(tou)亮。他們(men)與(yu)細(xi)胞(bao)可(ke)共(gong)生(sheng)(sheng)但(dan)會與(yu)細(xi)胞(bao)爭奪營(ying)養。這種共(gong)生(sheng)(sheng)是非常普遍(bian)的(de)，但(dan)他們(men)的(de)數(shu)量(liang)小(xiao)，細(xi)胞(bao)站優勢(shi)所以不(bu)會影響到細(xi)胞(bao)的(de)正常生(sheng)(sheng)長，只(zhi)有(you)當他們(men)到達一定的(de)數(shu)量(liang)時就會影響到細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)(sheng)長，zui終形成惡性循環(huan)。

6-病毒(du)

組(zu)織細(xi)胞培養過程中(zhong)，如果沒有(you)除去潛(qian)在(zai)的病毒(du)，就會產(chan)(chan)生病毒(du)污(wu)染(ran)。目前(qian)，從原代猴腎細(xi)胞的培養中(zhong)已(yi)發現(xian)不(bu)少(shao)于20種血清(qing)性(xing)病毒(du)。 盡管(guan)病毒(du)污(wu)染(ran)的細(xi)胞不(bu)影響原代培養，但生產(chan)(chan)疫(yi)苗是不(bu)安全的。因此，潛(qian)在(zai)病毒(du)是細(xi)胞大量生產(chan)(chan)和疫(yi)苗、干擾素(su)等生物制品制作中(zhong)的難題。

7-非同種細胞污染

即細胞(bao)(bao)交(jiao)叉污(wu)染(ran)(ran)，由(you)于細胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)操作時各細胞(bao)(bao)株所(suo)(suo)(suo)需的(de)器(qi)材和溶液沒有嚴格分(fen)開，往往會使(shi)一種細胞(bao)(bao)被(bei)另(ling)一種細胞(bao)(bao)污(wu)染(ran)(ran)。目前，世界(jie)上已有幾十種細胞(bao)(bao)都被(bei)HeLa細胞(bao)(bao)所(suo)(suo)(suo)污(wu)染(ran)(ran)，致(zhi)使(shi)許多實驗宣告無效。非細胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)物所(suo)(suo)(suo)造成的(de)化學(xue)成分(fen)的(de)污(wu)染(ran)(ran)也偶有發生(sheng)，大多是(shi)由(you)于細胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)所(suo)(suo)(suo)需物品清(qing)洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xue)物質所(suo)(suo)(suo)致(zhi)。

污染(ran)(ran)是細(xi)胞(bao)(bao)培養的大敵，預防和避(bi)免污染(ran)(ran)是成功培養細(xi)胞(bao)(bao)的關鍵之一。危機意識(shi)要貫徹(che)實驗(yan)的始終，否則不僅浪費時(shi)間，而且浪費人力、物力，甚至造成無(wu)法彌補(bu)的損失(shi)。

（如何預防細胞培(pei)養的污染和清除這些(xie)污染物呢？）慧(hui)穎 細胞庫 技術(shu)為(wei)您(nin)解答：

一、污染的預防

預防(fang)(fang)是防(fang)(fang)止細胞培養過(guo)程(cheng)中發生污染的(de)辦(ban)法。只有預防(fang)(fang)工作做(zuo)在前，才能(neng)將發生污染的(de)可能(neng)性降到zui小程(cheng)度。一般預防(fang)(fang)可從以下幾方面著手：

1-從操(cao)作者(zhe)做起

1操(cao)作者責任(ren)心要強，要細心穩重，操(cao)作技術要熟練。進無菌室前要用(yong)(yong)肥皂洗(xi)手或(huo)用(yong)(yong)5%新潔爾滅浸(jin)泡5分鐘，按規(gui)定穿隔離衣。進入后關好門，坐下來盡量(liang)少走動。工作開始要先用(yong)(yong)75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼(zhuo)瓶口。事先要嚴格檢查器材、溶液和培養物，不要把污(wu)染(ran)品(pin)或(huo)未(wei)經消毒的物品(pin)帶入無菌室內，更不能隨便使用(yong)(yong)，以(yi)免造成大批污(wu)染(ran)。

2、操作(zuo)者(zhe)動(dong)作(zuo)要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，并將(jiang)瓶口轉動(dong)燒灼(zhuo)。操作(zuo)時盡量不要談話，若打噴(pen)嚏或咳(ke)嗽應轉向背面(mian)。

3、操作時(shi)要常更換吸管，切(qie)勿(wu)一根吸管做到底。一旦發現(xian)吸管口接(jie)觸(chu)了手和其他污染物品(pin)應棄去。實(shi)驗(yan)完畢及(ji)時(shi)收拾，保(bao)持實(shi)驗(yan)室清潔整齊(qi)，zui后用(yong)消(xiao)毒水浸泡的(de)紗布(bu)擦(ca)臺(tai)面。

2-從物品、用(yong)品消毒滅菌著手(shou)

細胞培(pei)養所用(yong)物(wu)品清(qing)洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔(zi)細，并在無菌試驗(yan)陰(yin)性后才能使(shi)用(yong)。操作室(shi)及剩余的無菌器材要定期清(qing)潔(jie)消毒滅菌。

3-防止細(xi)胞交叉污染

在進行(xing)(xing)多種細胞(bao)培養操作(zuo)時(shi)，所用器具要(yao)嚴格區分(fen)，做(zuo)上標(biao)記便于(yu)辨別(bie)。并按順序進行(xing)(xing)操作(zuo)，避(bi)免一起(qi)進行(xing)(xing)時(shi)易發生混亂。

在(zai)進行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細(xi)胞(bao)培(pei)養瓶瓶口，以免把細(xi)胞(bao)帶到(dao)培(pei)養液中(zhong)污染其他細(xi)胞(bao)。

所有細胞一旦購(gou)置(zhi)，或從別處引入(ru)，或自(zi)己建(jian)立，均應及早留(liu)種(zhong)凍存，一旦發生污染可棄之復蘇，重新(xin)培(pei)養。

二、污染的清除

培(pei)養(yang)細胞(bao)一經污(wu)染(ran)，多數較難處(chu)理。如果(guo)污(wu)染(ran)細胞(bao)價值不大，宜(yi)棄之；有(you)細胞(bao)株留存的(de)或(huo)可購置(zhi)的(de)，可在尋(xun)找原因后*消(xiao)毒操作室，復蘇或(huo)重新購置(zhi)細胞(bao)，再培(pei)養(yang)。若(ruo)污(wu)染(ran)細胞(bao)價值較大，又難于重新得(de)到，可采取以下辦(ban)法清(qing)除。

1-使用抗生素

抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)對殺(sha)滅細菌較(jiao)有(you)(you)效(xiao)。聯合用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)比單獨用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)效(xiao)果好(hao)。預防用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)比污(wu)染后再(zai)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)效(xiao)果好(hao)。預防用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)一般用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)雙抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)（青(qing)霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)100u/mL加鏈霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)100μg/mL），污(wu)染后清除(chu)(chu)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)需(xu)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)大于常(chang)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)量5～10倍的沖洗(xi)法，于加藥(yao)后作用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)24～48小時，再(zai)換常(chang)規(gui)培(pei)養(yang)液(ye)。此法在污(wu)染早期可能有(you)(you)效(xiao)。所用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)品種除(chu)(chu)青(qing)霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)、鏈霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)外，還(huan)可用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)慶大霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)、卡(ka)那霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)、多粘菌素(su)(su)(su)(su)(su)、四環(huan)素(su)(su)(su)(su)(su)、制(zhi)霉(mei)菌素(su)(su)(su)(su)(su)等。常(chang)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)400～800μg/mL卡(ka)那霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)或(huo)(huo)200μg/mL四環(huan)素(su)(su)(su)(su)(su)處理，每隔2～3日換液(ye)1次(ci)，傳(chuan)(chuan)1～2代(dai)進行治療。近(jin)年來有(you)(you)報道(dao)，4-氟，2-羥基喹(kui)啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素(su)(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)物(wu)（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huan)素(su)(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)物(wu)（BM-2）等三種抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)單用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)或(huo)(huo)合用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)對殺(sha)滅支原體有(you)(you)效(xiao)。這三種抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)均(jun)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)PBS配(pei)成(cheng)250濃(nong)縮(suo)液(ye)，-20℃保存備用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)，使用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)濃(nong)度Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。使用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)時先(xian)吸除(chu)(chu)污(wu)染的培(pei)養(yang)液(ye)，加入(ru)含BM-1的RPMI1640培(pei)養(yang)液(ye)，3天(tian)后再(zai)吸除(chu)(chu)培(pei)養(yang)液(ye)，加入(ru)含BM-2的RPMI1640培(pei)養(yang)液(ye)，培(pei)養(yang)4天(tian)，如此連續3個輪(lun)次(ci)，直(zhi)至用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)33258熒光(guang)染色鏡檢證(zheng)明已清除(chu)(chu)支原體后，再(zai)加正常(chang)培(pei)養(yang)液(ye)培(pei)養(yang)傳(chuan)(chuan)代(dai)3-4次(ci)。

2-使(shi)用支原體特異性血(xue)清

用5%的兔支(zhi)原(yuan)體(ti)免(mian)疫血清(qing)(qing)（血凝效(xiao)價1:320以上）可去除(chu)支(zhi)原(yuan)體(ti)污染，因(yin)特異抗(kang)體(ti)可抑制(zhi)支(zhi)原(yuan)體(ti)生(sheng)長，故經抗(kang)血清(qing)(qing)處理后11天即轉為(wei)陰(yin)性，并且5個月后仍(reng)為(wei)陰(yin)性。但此法比較麻煩(fan)，不如(ru)用抗(kang)生(sheng)素方便、經濟。

3-加(jia)溫處理

將污染的(de)組(zu)織培(pei)養(yang)(yang)物放在41℃培(pei)養(yang)(yang)18小時，可殺死支原體，但對(dui)細胞(bao)有(you)不良(liang)影(ying)響(xiang)。所以(yi)在處理(li)(li)前要進行預試驗，摸索能zui大限度殺死支原體又對(dui)細胞(bao)影(ying)響(xiang)zui小的(de)加熱(re)時間。此法有(you)時不可靠。若(ruo)先用藥物處理(li)(li)后，再以(yi)41℃加溫處理(li)(li)效果更佳。

4-其他(ta)方法

除(chu)了上(shang)述去除(chu)污染(ran)的(de)方法外，還有(you)動物體(ti)內接種除(chu)菌法、巨噬細(xi)胞吞噬法、污染(ran)培養瓶中加溴尿嘧啶再(zai)用光照射的(de)方法及(ji)過濾法等，但均(jun)較麻煩，且效果不確定。所以一旦支原體(ti)污染(ran)，除(chu)非有(you)特別重(zhong)要價(jia)值，一般均(jun)棄之重(zhong)新培養。

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植物病毒(du)、細(xi)菌、真菌、植物激(ji)素和轉基因作物的農業診斷試劑(ji)盒

動植(zhi)物(wu)疾病診(zhen)斷類如豬、牛、羊、馬(ma)等家畜和(he)禽類以及寵物(wu)類檢測試(shi)劑盒(he)

15596026   TRIzol試劑  

15596018   TRIzol試劑  

11668027   脂質體2000轉(zhuan)染試劑(ji)

11668019   脂(zhi)質體2000轉染試(shi)劑

13778075   RNAiMAX轉染(ran)試劑

17504044   B-27（黃顏色）      

12587010   B-27 （黃顏色）不含維生(sheng)素A

17502048    N-2 （粉紅顏色）