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HCC1395細胞,人乳腺導管癌細胞

  • 產品型號:
  • 產品時間:2024-08-13
  • 簡要描述:HCC1395細胞,人乳腺導管癌細胞,慧穎細胞庫提供HCC1395的價格、 培養條件以及注意事項等。慧穎細胞庫,擁有完善的細胞庫管理體系,供應400多種類細胞株細胞系:國內/外優質細胞供應,種類齊全,質量保證,,100%放心免費售后!自細胞庫成立至今,供應于全國各省市地區,擁有北京上海各地中科院研究所,復旦,瑞金,上藥所等各大小型院校及企業。
  • 產品簡介

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乳腺癌(ai)細胞:HCC1395細胞,人乳腺導(dao)管癌(ai)細胞  

            SUM149PT細(xi)胞(bao),人乳腺癌細(xi)胞(bao)

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卵巢癌細(xi)胞(bao)  UWB1.289細(xi)胞(bao),人卵巢癌細(xi)胞(bao)

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            OVCAR4細胞,人(ren)卵(luan)巢癌細胞

            OVCAR5細(xi)胞,人卵巢癌細(xi)胞

(細(xi)胞(bao)培養中常(chang)見(jian)的生物(wu)污(wu)(wu)(wu)(wu)染類(lei)型有7種,分(fen)別(bie)是細(xi)菌污(wu)(wu)(wu)(wu)染、支原體(ti)污(wu)(wu)(wu)(wu)染、原蟲污(wu)(wu)(wu)(wu)染、黑(hei)膠蟲污(wu)(wu)(wu)(wu)染、真菌污(wu)(wu)(wu)(wu)染、病毒污(wu)(wu)(wu)(wu)染以(yi)及非細(xi)胞(bao)污(wu)(wu)(wu)(wu)染,那么他們污(wu)(wu)(wu)(wu)染細(xi)胞(bao)的特點分(fen)別(bie)是什么呢?怎(zen)樣能夠減(jian)少(shao)污(wu)(wu)(wu)(wu)染現象的發(fa)生?)

1-細菌

細菌(jun)污(wu)染常見的有(you)(you)大腸桿菌(jun),葡(pu)萄球(qiu)菌(jun)等(deng)。細菌(jun)污(wu)染較易發現,在普通倒置顯(xian)微鏡下為黑色細沙狀(zhuang),培養(yang)液一般(ban)會在短時間內(nei)變黃,有(you)(you)時靜置的培養(yang)液不混,稍加震蕩(dang)會有(you)(you)很多混濁物漂起。顯(xian)微鏡下可見培養(yang)液中有(you)(you)大量(liang)圓球(qiu)狀(zhuang)顆(ke)粒物漂浮,有(you)(you)時在細胞表(biao)(biao)面及周(zhou)圍有(you)(you)大量(liang)細菌(jun)存在,細胞停止(zhi)生長并有(you)(you)中毒表(biao)(biao)現。

處理:①在培養(yang)液中加入相應的抗(kang)生素,能(neng)夠預防絕大多(duo)數(shu)的細(xi)菌污染(ran)。

2-真菌(jun)

真(zhen)菌(jun)(jun)污(wu)(wu)染(ran)是(shi)細胞(bao)培養(yang)過程中(zhong)(zhong)zui常見(jian)(jian)的(de)一種(zhong),尤其梅雨季節快要到了,進(jin)行(xing)細胞(bao)培養(yang)時更(geng)易(yi)(yi)污(wu)(wu)染(ran)。污(wu)(wu)染(ran)細胞(bao)的(de)多(duo)(duo)為煙(yan)曲霉(mei)、黑(hei)曲霉(mei)、毛霉(mei)菌(jun)(jun)、孢子霉(mei)、白念珠菌(jun)(jun)、酵母菌(jun)(jun)等。霉(mei)菌(jun)(jun)污(wu)(wu)染(ran)后多(duo)(duo)數在培養(yang)液(ye)中(zhong)(zhong)形成白色或(huo)淺黃色漂浮(fu)物。一般(ban)肉眼可見(jian)(jian),較(jiao)易(yi)(yi)被(bei)發現,短期內培養(yang)液(ye)多(duo)(duo)不混(hun)濁,倒置(zhi)顯微鏡下(xia)可見(jian)(jian)于細胞(bao)之(zhi)間縱橫(heng)交錯穿(chuan)行(xing)的(de)絲狀、管狀、及樹枝狀菌(jun)(jun)絲,并懸(xuan)浮(fu)飄蕩在培養(yang)液(ye)中(zhong)(zhong)。

很多(duo)菌(jun)(jun)絲在高倍鏡可(ke)見(jian)到有鏈(lian)狀(zhuang)排(pai)列的(de)菌(jun)(jun)珠;念珠菌(jun)(jun)或酵母菌(jun)(jun)形態呈(cheng)卵(luan)形,散在細(xi)胞(bao)周邊和(he)細(xi)胞(bao)之間生長。鏡下看時,要將(jiang)培養瓶用酒精棉球(qiu)擦(ca)干凈,以(yi)防止與(yu)瓶外尤其(qi)瓶底外面生長的(de)菌(jun)(jun)絲相混淆(xiao)。

真(zhen)菌污染(ran)后,細(xi)胞(bao)(bao)生長(chang)變慢(man),但zui后由于營養耗盡及毒性作用而使細(xi)胞(bao)(bao)脫落死亡。真(zhen)菌生長(chang)的比較慢(man),不象細(xi)菌那么容易(yi)被發(fa)現,但是一旦(dan)發(fa)現有它的存(cun)在(zai)細(xi)胞(bao)(bao)就被污染(ran)了,也很難救活了。

3-支原體

支原體(ti)的大(da)小(xiao)介于細(xi)(xi)菌和(he)(he)病毒之間,是(shi)一種獨立生活的微生物。對(dui)(dui)熱(re)敏(min)感(gan),對(dui)(dui)一般抗生素(su)不敏(min)感(gan)。支原體(ti)的形態多(duo)變,多(duo)吸附在細(xi)(xi)胞表面(mian)(mian)和(he)(he)細(xi)(xi)胞之間。電鏡下觀察,中心有高密度的密集顆粒,橫斷(duan)面(mian)(mian)與細(xi)(xi)胞微絨毛相似。

因國內的血清(qing)大多數都沒有做支原體陰性檢測,而支原體又(you)是牛血清(qing)中zui常見的微生(sheng)物(wu)之一。支原體污染細(xi)胞后(hou),培養液輕(qing)微發(fa)生(sheng)混濁.但細(xi)胞變化不顯著,隨著細(xi)胞的培養會慢慢死亡(wang)。

支(zhi)(zhi)原(yuan)體污染檢測(熒光染色(se)法):DNA和與(yu)DNA特(te)異性結(jie)合(he)(he)的(de)(de)熒光染料結(jie)合(he)(he),使得支(zhi)(zhi)原(yuan)體的(de)(de)DNA著色(se),然后用(yong)熒光顯微鏡觀察。鏡下支(zhi)(zhi)原(yuan)體為散在于(yu)細(xi)胞同圍或附于(yu)細(xi)胞膜表面的(de)(de)亮綠色(se)小點(dian)。

解(jie)決(jue):

1)抗生素排(pai)除(chu)法:支原(yuan)體污染預防比解決好。如果不(bu)小心污染后,可加入高濃度抗生素(常(chang)規(gui)使(shi)用(yong)的5倍濃度)作用(yong)24-48小時,再換(huan)入常(chang)規(gui)培養液,但該法不(bu)保證有效。推(tui)薦用(yong)量:慶大霉(mei)素 200μg/ml ,四環(huan)素10μg/ml ,卡那霉(mei)素50μg/ml 。

2)加溫(wen)除菌:支原體不耐(nai)熱(re),可以對(dui)支原體污染的(de)細(xi)(xi)(xi)胞熱(re)處理除菌。因高溫(wen)對(dui)細(xi)(xi)(xi)胞本身也會產生一(yi)定影響,故熱(re)處理前需先進行預實驗,確定對(dui)細(xi)(xi)(xi)胞影響zui小(xiao)而(er)能zui大程度的(de)殺死支原體的(de)時間。

4-黑膠蟲

黑膠蟲的(de)(de)存在(zai)(zai)目前(qian)尚有爭議,其在(zai)(zai)低倍(bei)(bei)下為黑色(se)(se)點狀,高(gao)倍(bei)(bei)下可(ke)看見黑色(se)(se)的(de)(de)小蟲游(you)(you)來游(you)(you)去,培(pei)養液也(ye)是不(bu)渾的(de)(de),對細(xi)胞(bao)生長狀態不(bu)會有明顯影(ying)響,在(zai)(zai)細(xi)胞(bao)增殖(zhi)旺盛之后會自然(ran)消失,除更換(huan)血(xue)清外無須(xu)特殊處理。

5-原蟲

培養(yang)液可輕微渾濁,顯(xian)微鏡(jing)下(xia)那些細小(xiao)的點狀物(wu)數量(liang)非常(chang)多(duo),輕微活動,細胞雖然可以(yi)生長但繁殖速度卻明顯(xian)減慢,而且(qie)細胞狀態(tai)不(bu)好,邊緣不(bu)清(qing)楚,細胞不(bu)透亮。他們與細胞可共(gong)生但會(hui)與細胞爭奪營養(yang)。這種共(gong)生是非常(chang)普遍的,但他們的數量(liang)小(xiao),細胞站(zhan)優勢(shi)所(suo)以(yi)不(bu)會(hui)影響到(dao)細胞的正常(chang)生長,只有當他們到(dao)達一(yi)定的數量(liang)時就(jiu)會(hui)影響到(dao)細胞的生長,zui終形成惡性循環(huan)。

6-病毒

組織細胞(bao)培養過程中,如果沒有除去潛(qian)在(zai)的(de)病(bing)(bing)(bing)毒,就會產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)病(bing)(bing)(bing)毒污染。目前,從原代猴腎細胞(bao)的(de)培養中已發現不少于(yu)20種血清性病(bing)(bing)(bing)毒。 盡管病(bing)(bing)(bing)毒污染的(de)細胞(bao)不影響原代培養,但生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)疫苗(miao)是不安全的(de)。因(yin)此,潛(qian)在(zai)病(bing)(bing)(bing)毒是細胞(bao)大量生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)和(he)疫苗(miao)、干擾素(su)等(deng)生(sheng)(sheng)物制品制作中的(de)難題。

7-非同種細胞污染

即(ji)細(xi)胞(bao)(bao)交叉污(wu)染(ran),由(you)于細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養操作時各細(xi)胞(bao)(bao)株(zhu)所(suo)(suo)需(xu)(xu)的器材和溶液沒(mei)有(you)(you)嚴(yan)格分開(kai),往往會使一種細(xi)胞(bao)(bao)被另一種細(xi)胞(bao)(bao)污(wu)染(ran)。目前,世界上(shang)已(yi)有(you)(you)幾十種細(xi)胞(bao)(bao)都被HeLa細(xi)胞(bao)(bao)所(suo)(suo)污(wu)染(ran),致(zhi)使許(xu)多(duo)實(shi)驗宣告無效。非細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養物所(suo)(suo)造成的化學(xue)成分的污(wu)染(ran)也偶有(you)(you)發(fa)生,大(da)多(duo)是由(you)于細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養所(suo)(suo)需(xu)(xu)物品清洗消(xiao)毒不*而(er)帶入一些有(you)(you)毒化學(xue)物質所(suo)(suo)致(zhi)。

污染(ran)是細(xi)胞(bao)培養的(de)大敵,預(yu)防和避免(mian)污染(ran)是成功(gong)培養細(xi)胞(bao)的(de)關鍵之一。危機意識(shi)要貫(guan)徹實驗的(de)始(shi)終,否則不(bu)僅浪(lang)費時間,而且浪(lang)費人力、物力,甚至(zhi)造成無法彌補的(de)損失(shi)。

(如何(he)預防細(xi)胞(bao)培養(yang)的污(wu)染(ran)和清除(chu)這些(xie)污(wu)染(ran)物呢?)慧穎 細(xi)胞(bao)庫 技術為您解答:

一、污染的預防

預防(fang)是防(fang)止細胞(bao)培(pei)養過程(cheng)中發(fa)生(sheng)污(wu)染的辦(ban)法。只(zhi)有預防(fang)工(gong)作做在前,才能將發(fa)生(sheng)污(wu)染的可能性降到zui小程(cheng)度。一般(ban)預防(fang)可從以下幾(ji)方面著手:

1-從操作(zuo)者做起

1操作(zuo)者責任(ren)心(xin)(xin)要(yao)(yao)強(qiang),要(yao)(yao)細心(xin)(xin)穩重,操作(zuo)技術要(yao)(yao)熟練(lian)。進(jin)無菌(jun)室(shi)(shi)前要(yao)(yao)用(yong)肥(fei)皂洗手(shou)(shou)或用(yong)5%新潔爾滅浸泡(pao)5分鐘,按規定穿隔(ge)離衣。進(jin)入(ru)后關好門,坐下來盡量少(shao)走動(dong)。工作(zuo)開始要(yao)(yao)先用(yong)75%酒精棉(mian)球擦手(shou)(shou)、擦瓶口和燒灼(zhuo)瓶口。事(shi)先要(yao)(yao)嚴格檢查器(qi)材、溶液和培養物(wu),不要(yao)(yao)把污染品(pin)或未經消(xiao)毒(du)的物(wu)品(pin)帶入(ru)無菌(jun)室(shi)(shi)內(nei),更不能隨便使(shi)用(yong),以(yi)免造(zao)成大(da)批污染。

2、操作(zuo)者動(dong)(dong)作(zuo)要輕,必須(xu)在火焰(yan)周(zhou)圍無(wu)菌區內打開瓶口(kou),并將(jiang)瓶口(kou)轉動(dong)(dong)燒灼。操作(zuo)時盡量(liang)不(bu)要談話(hua),若(ruo)打噴嚏或咳嗽應轉向背(bei)面。

3、操作時(shi)要常(chang)更換吸管(guan),切勿一根吸管(guan)做到(dao)底。一旦發現吸管(guan)口接觸了手和其(qi)他污染物品應棄(qi)去。實驗完畢(bi)及時(shi)收拾,保持實驗室(shi)清潔(jie)整齊,zui后用消毒(du)水(shui)浸泡(pao)的紗布擦臺(tai)面。

2-從物品、用品消毒滅菌著手(shou)

細胞培(pei)養(yang)所(suo)用物品清洗、消毒要*,各(ge)種(zhong)溶液滅(mie)菌(jun)除菌(jun)要仔細,并在無菌(jun)試(shi)驗陰性后(hou)才能使(shi)用。操作(zuo)室及剩余的無菌(jun)器材(cai)要定期(qi)清潔消毒滅(mie)菌(jun)。

3-防止細胞交叉污(wu)染

在進(jin)(jin)行多種細胞培養操作(zuo)時,所用(yong)器具(ju)要嚴格區分,做上標記(ji)便于辨(bian)別。并(bing)按順(shun)序進(jin)(jin)行操作(zuo),避免一起進(jin)(jin)行時易發生混亂。

在(zai)進行換液(ye)或傳代操作(zuo)時,注(zhu)射器和滴(di)管不要觸及細(xi)胞培(pei)養瓶瓶口,以(yi)免(mian)把細(xi)胞帶到(dao)培(pei)養液(ye)中(zhong)污染其他細(xi)胞。

所有(you)細胞一旦(dan)購置,或從別處引入(ru),或自(zi)己建立,均應及(ji)早留種(zhong)凍存,一旦(dan)發(fa)生污(wu)染可棄之復蘇(su),重新(xin)培(pei)養。

二、污染的清除(chu)

培養細(xi)(xi)(xi)胞一經(jing)污染(ran),多數較(jiao)難處理(li)。如果污染(ran)細(xi)(xi)(xi)胞價(jia)值不(bu)大(da),宜棄之;有細(xi)(xi)(xi)胞株(zhu)留(liu)存的或可(ke)購置的,可(ke)在尋找原(yuan)因后*消(xiao)毒操作室,復蘇(su)或重新購置細(xi)(xi)(xi)胞,再培養。若污染(ran)細(xi)(xi)(xi)胞價(jia)值較(jiao)大(da),又(you)難于重新得到,可(ke)采取以下辦法清除。

1-使(shi)用抗生素

抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)對殺(sha)滅細菌較有效。聯合(he)用(yong)(yong)(yong)(yong)藥比(bi)單獨用(yong)(yong)(yong)(yong)藥效果好(hao)。預防用(yong)(yong)(yong)(yong)藥比(bi)污(wu)(wu)染(ran)后(hou)再用(yong)(yong)(yong)(yong)藥效果好(hao)。預防用(yong)(yong)(yong)(yong)藥一(yi)般用(yong)(yong)(yong)(yong)雙(shuang)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(青霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)100u/mL加(jia)(jia)鏈(lian)霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)100μg/mL),污(wu)(wu)染(ran)后(hou)清(qing)除(chu)用(yong)(yong)(yong)(yong)藥需采用(yong)(yong)(yong)(yong)大(da)于常用(yong)(yong)(yong)(yong)量5~10倍的沖(chong)洗法,于加(jia)(jia)藥后(hou)作用(yong)(yong)(yong)(yong)24~48小(xiao)時,再換常規培(pei)養(yang)液。此法在污(wu)(wu)染(ran)早期可能有效。所用(yong)(yong)(yong)(yong)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)品種除(chu)青霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、鏈(lian)霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)外,還可用(yong)(yong)(yong)(yong)慶大(da)霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、卡(ka)那(nei)霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、多(duo)粘(zhan)菌素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、四環素(su)(su)(su)(su)(su)(su)、制霉(mei)菌素(su)(su)(su)(su)(su)(su)等。常用(yong)(yong)(yong)(yong)400~800μg/mL卡(ka)那(nei)霉(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)或200μg/mL四環素(su)(su)(su)(su)(su)(su)處理(li),每(mei)隔2~3日換液1次,傳(chuan)1~2代進行(xing)治療(liao)。近年來(lai)有報道,4-氟,2-羥基喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截(jie)耳(er)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)物(Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和(he)四環素(su)(su)(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)物(BM-2)等三種抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)單用(yong)(yong)(yong)(yong)或合(he)用(yong)(yong)(yong)(yong)對殺(sha)滅支(zhi)原體(ti)(ti)有效。這三種抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)均用(yong)(yong)(yong)(yong)PBS配(pei)成250濃(nong)縮液,-20℃保存備(bei)用(yong)(yong)(yong)(yong),使用(yong)(yong)(yong)(yong)濃(nong)度Cip為10μg/mL,BM-1為10μg/mL,BM-2為5μg/mL。使用(yong)(yong)(yong)(yong)時先吸除(chu)污(wu)(wu)染(ran)的培(pei)養(yang)液,加(jia)(jia)入(ru)含(han)BM-1的RPMI1640培(pei)養(yang)液,3天后(hou)再吸除(chu)培(pei)養(yang)液,加(jia)(jia)入(ru)含(han)BM-2的RPMI1640培(pei)養(yang)液,培(pei)養(yang)4天,如(ru)此連續3個(ge)輪(lun)次,直(zhi)至用(yong)(yong)(yong)(yong)33258熒(ying)光染(ran)色(se)鏡(jing)檢證明已清(qing)除(chu)支(zhi)原體(ti)(ti)后(hou),再加(jia)(jia)正常培(pei)養(yang)液培(pei)養(yang)傳(chuan)代3-4次。

2-使用支原(yuan)體特(te)異(yi)性血(xue)清(qing)

用5%的兔支(zhi)原體(ti)(ti)免疫血清(qing)(血凝效價1:320以(yi)上)可(ke)去除支(zhi)原體(ti)(ti)污染,因特異(yi)抗體(ti)(ti)可(ke)抑制支(zhi)原體(ti)(ti)生長,故經(jing)抗血清(qing)處理后(hou)11天(tian)即轉為(wei)陰(yin)性,并且5個月(yue)后(hou)仍為(wei)陰(yin)性。但(dan)此法比較麻煩(fan),不如用抗生素方便、經(jing)濟。

3-加溫(wen)處(chu)理

將污染的(de)組織(zhi)培養(yang)物放在(zai)41℃培養(yang)18小時(shi),可(ke)殺死支原(yuan)體(ti)(ti),但對細胞(bao)有(you)不良影(ying)響。所(suo)以在(zai)處理前要進行預試(shi)驗,摸索(suo)能zui大限度殺死支原(yuan)體(ti)(ti)又對細胞(bao)影(ying)響zui小的(de)加熱時(shi)間。此法有(you)時(shi)不可(ke)靠。若先用藥物處理后(hou),再以41℃加溫處理效果(guo)更佳(jia)。

4-其他方法

除了上述去除污(wu)染的(de)方(fang)法外(wai),還有(you)動物體(ti)內接種除菌法、巨(ju)噬細胞吞噬法、污(wu)染培養(yang)瓶中加溴尿(niao)嘧啶再用光照射的(de)方(fang)法及過濾法等,但均較麻煩,且效果(guo)不確定(ding)。所(suo)以一旦支原體(ti)污(wu)染,除非有(you)特別重要價值,一般均棄之重新培養(yang)。

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