人結腸癌細(xi)(xi)胞(bao)系：SW48細(xi)(xi)胞(bao)，SW480細(xi)(xi)胞(bao)，CACO-2細(xi)(xi)胞(bao)，SW620細(xi)(xi)胞(bao)，HCT-8細(xi)(xi)胞(bao)，HCT/V細(xi)(xi)胞(bao)，HCT-116細(xi)(xi)胞(bao)，LoVo細(xi)(xi)胞(bao)，HRT-18細(xi)(xi)胞(bao)，HT-29細(xi)(xi)胞(bao)等

人宮(gong)頸癌細(xi)胞(bao)(bao)系：hela細(xi)胞(bao)(bao)，HT-3細(xi)胞(bao)(bao)，C33A細(xi)胞(bao)(bao)，SN12C細(xi)胞(bao)(bao)，SKG-IIIa細(xi)胞(bao)(bao)，Hela S3細(xi)胞(bao)(bao)，DoTc2-4510細(xi)胞(bao)(bao)，Ca Ski細(xi)胞(bao)(bao) ，ME-180細(xi)胞(bao)(bao)等

DC2.4細(xi)胞(bao)株  MC38細(xi)胞(bao)株，MLE-12細(xi)胞(bao)，bEND.3細(xi)胞(bao) HT-22細(xi)胞(bao)，HK-2細(xi)胞(bao) THP-1細(xi)胞(bao) WRO細(xi)胞(bao) FRO細(xi)胞(bao) Molt-4細(xi)胞(bao)系 SH-SY-5Y細(xi)胞(bao) U87-MG細(xi)胞(bao)

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SUM1315M02細胞，人乳腺癌細胞（細(xi)胞培(pei)養中常見的生(sheng)物(wu)污(wu)(wu)染類型有7種，分別是(shi)細(xi)菌污(wu)(wu)染、支原(yuan)體(ti)(ti)污(wu)(wu)染、原(yuan)蟲(chong)污(wu)(wu)染、黑膠蟲(chong)污(wu)(wu)染、真菌污(wu)(wu)染、病毒污(wu)(wu)染以(yi)及非細(xi)胞污(wu)(wu)染，那么(me)他們污(wu)(wu)染細(xi)胞的特點分別是(shi)什么(me)呢？怎樣(yang)能夠減少污(wu)(wu)染現象的發(fa)生(sheng)？）

1-細菌

細(xi)(xi)菌(jun)污染(ran)常見的有(you)(you)大腸桿(gan)菌(jun)，葡萄球(qiu)菌(jun)等(deng)。細(xi)(xi)菌(jun)污染(ran)較(jiao)易發現，在普(pu)通倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下為黑色細(xi)(xi)沙狀，培養(yang)(yang)液(ye)一(yi)般會在短時(shi)間內變黃，有(you)(you)時(shi)靜置的培養(yang)(yang)液(ye)不(bu)混，稍(shao)加(jia)震蕩(dang)會有(you)(you)很(hen)多混濁物漂(piao)起。顯(xian)微(wei)鏡(jing)下可見培養(yang)(yang)液(ye)中(zhong)(zhong)有(you)(you)大量圓球(qiu)狀顆粒物漂(piao)浮，有(you)(you)時(shi)在細(xi)(xi)胞(bao)表面及周圍有(you)(you)大量細(xi)(xi)菌(jun)存在，細(xi)(xi)胞(bao)停止生長并有(you)(you)中(zhong)(zhong)毒表現。

處理(li)：①在培養液中(zhong)加入(ru)相應的抗生素，能夠(gou)預(yu)防(fang)絕(jue)大(da)多數的細菌污染。

2-真菌

真菌(jun)(jun)污(wu)染是細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培養過程中(zhong)zui常(chang)見的一(yi)(yi)種，尤其梅雨季節(jie)快(kuai)要到(dao)了，進行細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培養時更易污(wu)染。污(wu)染細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的多為煙(yan)曲霉(mei)(mei)、黑曲霉(mei)(mei)、毛(mao)霉(mei)(mei)菌(jun)(jun)、孢子霉(mei)(mei)、白念珠菌(jun)(jun)、酵(jiao)母菌(jun)(jun)等。霉(mei)(mei)菌(jun)(jun)污(wu)染后多數(shu)在培養液中(zhong)形成白色或淺(qian)黃色漂浮物(wu)。一(yi)(yi)般肉(rou)眼(yan)可(ke)見，較易被發現，短(duan)期內培養液多不混濁，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下可(ke)見于(yu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)之(zhi)間縱(zong)橫交(jiao)錯穿行的絲(si)狀、管(guan)狀、及樹枝狀菌(jun)(jun)絲(si)，并懸浮飄蕩在培養液中(zhong)。

很多菌(jun)(jun)絲(si)在(zai)高倍鏡(jing)可(ke)見(jian)到有鏈狀排列的(de)菌(jun)(jun)珠(zhu)；念珠(zhu)菌(jun)(jun)或酵母菌(jun)(jun)形態(tai)呈(cheng)卵形，散在(zai)細(xi)胞周(zhou)邊和(he)細(xi)胞之間生(sheng)長。鏡(jing)下看時，要將培養瓶(ping)(ping)用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶(ping)(ping)外尤(you)其瓶(ping)(ping)底外面生(sheng)長的(de)菌(jun)(jun)絲(si)相混淆。

真菌污(wu)染后，細胞(bao)生(sheng)長變慢，但zui后由于營養耗盡(jin)及毒性作(zuo)用而使(shi)細胞(bao)脫落死亡。真菌生(sheng)長的(de)比較慢，不象細菌那么容易被發(fa)現(xian)(xian)，但是(shi)一旦發(fa)現(xian)(xian)有它的(de)存(cun)在細胞(bao)就(jiu)被污(wu)染了，也很難(nan)救活(huo)了。

3-支原(yuan)體

支原(yuan)體的(de)大小介于細(xi)(xi)(xi)菌和病毒之(zhi)間，是(shi)一種獨立生(sheng)(sheng)活的(de)微生(sheng)(sheng)物(wu)。對熱敏感(gan)，對一般抗生(sheng)(sheng)素不敏感(gan)。支原(yuan)體的(de)形(xing)態多變，多吸附在細(xi)(xi)(xi)胞(bao)表面和細(xi)(xi)(xi)胞(bao)之(zhi)間。電(dian)鏡下觀(guan)察，中(zhong)心有高密度(du)的(de)密集顆粒，橫斷面與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)微絨毛相似。

因國內的血(xue)清大多數都沒有做支原(yuan)體(ti)陰性檢測，而支原(yuan)體(ti)又是牛血(xue)清中zui常見的微(wei)生物(wu)之(zhi)一。支原(yuan)體(ti)污(wu)染細(xi)胞(bao)(bao)后，培養液(ye)輕微(wei)發(fa)生混濁．但細(xi)胞(bao)(bao)變化不顯著，隨著細(xi)胞(bao)(bao)的培養會慢慢死亡。

支原(yuan)(yuan)體污(wu)染(ran)(ran)檢(jian)測（熒光(guang)染(ran)(ran)色法）：DNA和(he)與DNA特(te)異性結合的熒光(guang)染(ran)(ran)料結合，使得支原(yuan)(yuan)體的DNA著色，然后(hou)用熒光(guang)顯微(wei)鏡觀察(cha)。鏡下(xia)支原(yuan)(yuan)體為散在(zai)于(yu)細(xi)胞同圍(wei)或附(fu)于(yu)細(xi)胞膜表面的亮綠色小點。

解決(jue)：

1）抗生素(su)排除法：支原體(ti)污染(ran)預防(fang)比解決好。如果不小心(xin)污染(ran)后(hou)，可加入高(gao)濃度(du)抗生素(su)（常規使用(yong)的(de)5倍濃度(du)）作用(yong)24-48小時(shi)，再(zai)換入常規培養(yang)液(ye)，但該法不保證有效。推(tui)薦用(yong)量：慶(qing)大霉素(su) 200μg/ml ,四環素(su)10μg/ml ，卡(ka)那霉素(su)50μg/ml 。

2）加溫除菌：支原體不耐(nai)熱(re)(re)，可以對(dui)(dui)支原體污染(ran)的(de)細胞(bao)熱(re)(re)處理除菌。因(yin)高溫對(dui)(dui)細胞(bao)本(ben)身(shen)也會產生一定(ding)影響，故熱(re)(re)處理前(qian)需先進行(xing)預(yu)實驗，確(que)定(ding)對(dui)(dui)細胞(bao)影響zui小而(er)能zui大程度(du)的(de)殺死支原體的(de)時(shi)間。

4-黑(hei)膠蟲

黑膠(jiao)蟲(chong)的(de)(de)存在目前尚有(you)爭議，其在低倍(bei)(bei)下為黑色點狀，高倍(bei)(bei)下可看見黑色的(de)(de)小蟲(chong)游來游去，培養液也是不(bu)(bu)渾的(de)(de)，對細(xi)胞生長狀態不(bu)(bu)會有(you)明顯影響(xiang)，在細(xi)胞增殖旺盛之后會自然消失，除更(geng)換(huan)血(xue)清外無(wu)須特(te)殊處理。

5-原蟲(chong)

培養液(ye)可(ke)輕微(wei)渾濁，顯微(wei)鏡下那些細(xi)(xi)小的點狀物數(shu)(shu)量非常多(duo)，輕微(wei)活(huo)動，細(xi)(xi)胞(bao)雖(sui)然可(ke)以生(sheng)長(chang)(chang)(chang)但繁(fan)殖速度卻明顯減(jian)慢(man)，而且細(xi)(xi)胞(bao)狀態不(bu)好，邊緣不(bu)清(qing)楚，細(xi)(xi)胞(bao)不(bu)透(tou)亮。他們與細(xi)(xi)胞(bao)可(ke)共(gong)生(sheng)但會與細(xi)(xi)胞(bao)爭奪營養。這種共(gong)生(sheng)是非常普遍的，但他們的數(shu)(shu)量小，細(xi)(xi)胞(bao)站優勢(shi)所以不(bu)會影(ying)響(xiang)到(dao)細(xi)(xi)胞(bao)的正(zheng)常生(sheng)長(chang)(chang)(chang)，只(zhi)有當他們到(dao)達一定的數(shu)(shu)量時就會影(ying)響(xiang)到(dao)細(xi)(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)(chang)(chang)，zui終形成惡(e)性(xing)循環(huan)。

6-病毒

組(zu)織(zhi)細(xi)(xi)胞培養過程中，如果沒有除去(qu)潛在的病毒，就(jiu)會產生病毒污染。目前(qian)，從原代猴(hou)腎細(xi)(xi)胞的培養中已發現不(bu)(bu)少于20種(zhong)血清(qing)性病毒。 盡管病毒污染的細(xi)(xi)胞不(bu)(bu)影響原代培養，但生產疫苗(miao)是不(bu)(bu)安(an)全的。因此，潛在病毒是細(xi)(xi)胞大(da)量生產和(he)疫苗(miao)、干擾(rao)素等生物制(zhi)品(pin)制(zhi)作中的難題(ti)。

7-非同(tong)種(zhong)細胞污染

即細(xi)胞(bao)(bao)交叉污(wu)(wu)染(ran)，由(you)于細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)操作時(shi)各(ge)細(xi)胞(bao)(bao)株所需的器材和溶(rong)液沒(mei)有嚴格分(fen)開，往(wang)往(wang)會使一種細(xi)胞(bao)(bao)被(bei)另一種細(xi)胞(bao)(bao)污(wu)(wu)染(ran)。目前(qian)，世界上已有幾十種細(xi)胞(bao)(bao)都被(bei)HeLa細(xi)胞(bao)(bao)所污(wu)(wu)染(ran)，致(zhi)使許多(duo)實(shi)驗宣(xuan)告無效。非細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)物所造成的化(hua)學(xue)成分(fen)的污(wu)(wu)染(ran)也偶有發生，大(da)多(duo)是(shi)由(you)于細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)所需物品清洗(xi)消毒不*而帶(dai)入一些(xie)有毒化(hua)學(xue)物質所致(zhi)。

污染(ran)是(shi)細(xi)胞培(pei)養的(de)大(da)敵，預防和避免污染(ran)是(shi)成功(gong)培(pei)養細(xi)胞的(de)關鍵之一。危機意識要貫徹實驗的(de)始終，否(fou)則不僅浪(lang)費時(shi)間，而且(qie)浪(lang)費人力、物力，甚至造(zao)成無法彌(mi)補的(de)損(sun)失。

（如何預(yu)防細(xi)胞培養的污染和清除(chu)這些(xie)污染物呢？）慧穎 細(xi)胞庫 技(ji)術(shu)為您解答：

一、污染(ran)的預防

預(yu)防(fang)是防(fang)止細胞培養過程中發生污(wu)染(ran)的辦法。只有預(yu)防(fang)工(gong)作(zuo)做在前(qian)，才能將發生污(wu)染(ran)的可能性降到zui小程度。一般(ban)預(yu)防(fang)可從(cong)以下幾方面著手：

1-從操作(zuo)者做起

1操(cao)作(zuo)者責任心(xin)要強(qiang)，要細心(xin)穩重，操(cao)作(zuo)技術要熟練。進無(wu)菌(jun)室(shi)前(qian)要用肥皂洗手(shou)或用5%新潔爾(er)滅浸泡5分鐘，按規定穿隔離衣。進入后(hou)關好門，坐下(xia)來盡量(liang)少走(zou)動。工作(zuo)開(kai)始要先用75%酒(jiu)精棉球擦手(shou)、擦瓶(ping)口(kou)和燒灼(zhuo)瓶(ping)口(kou)。事先要嚴(yan)格檢(jian)查器材(cai)、溶(rong)液和培(pei)養(yang)物，不(bu)要把污染品(pin)或未經消(xiao)毒的物品(pin)帶入無(wu)菌(jun)室(shi)內(nei)，更(geng)不(bu)能(neng)隨(sui)便使用，以免造成大批污染。

2、操作者動作要輕，必須在火焰(yan)周圍無菌區(qu)內打(da)開瓶口(kou)，并(bing)將(jiang)瓶口(kou)轉動燒(shao)灼(zhuo)。操作時盡(jin)量不(bu)要談話，若打(da)噴嚏(ti)或(huo)咳(ke)嗽應(ying)轉向(xiang)背面。

3、操作時要常更換吸管，切(qie)勿一(yi)根吸管做到底(di)。一(yi)旦發現吸管口(kou)接觸了手和其他(ta)污染物品應(ying)棄去。實(shi)驗完畢(bi)及時收拾，保持實(shi)驗室清潔整齊，zui后用消毒水(shui)浸泡的(de)紗布擦臺(tai)面。

2-從(cong)物品、用品消毒(du)滅菌著手

細(xi)胞培養所用物(wu)品清洗、消(xiao)毒要(yao)*，各種溶液滅菌除菌要(yao)仔細(xi)，并(bing)在無(wu)菌試驗陰(yin)性后才能(neng)使用。操作室及剩余的無(wu)菌器(qi)材要(yao)定期清潔(jie)消(xiao)毒滅菌。

3-防止(zhi)細胞交(jiao)叉污染(ran)

在進行多種細(xi)胞培養(yang)操作(zuo)時，所(suo)用器具(ju)要嚴格區分，做上(shang)標記便于(yu)辨別。并按(an)順序進行操作(zuo)，避免(mian)一起進行時易(yi)發生混亂(luan)。

在進行(xing)換(huan)液或傳代操作時，注(zhu)射器和滴(di)管不要觸及細胞(bao)培養(yang)瓶(ping)瓶(ping)口，以免把細胞(bao)帶(dai)到培養(yang)液中污染(ran)其他細胞(bao)。

所有細胞一旦購置，或從別(bie)處引(yin)入，或自己建(jian)立，均(jun)應及早(zao)留種凍(dong)存，一旦發生(sheng)污染可棄之復蘇(su)，重(zhong)新培養。

二、污(wu)染的清除(chu)

培養細胞(bao)(bao)一經污染(ran)(ran)，多數(shu)較(jiao)(jiao)難處理。如果污染(ran)(ran)細胞(bao)(bao)價(jia)值不(bu)大(da)，宜棄之；有細胞(bao)(bao)株留存的(de)或(huo)可購(gou)(gou)置(zhi)的(de)，可在尋找原(yuan)因(yin)后*消毒操作(zuo)室，復(fu)蘇或(huo)重(zhong)(zhong)新(xin)購(gou)(gou)置(zhi)細胞(bao)(bao)，再(zai)培養。若污染(ran)(ran)細胞(bao)(bao)價(jia)值較(jiao)(jiao)大(da)，又難于重(zhong)(zhong)新(xin)得(de)到，可采取以下辦法清除。

1-使用抗生素

抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)對殺滅(mie)細(xi)菌(jun)較有(you)效。聯合用(yong)(yong)(yong)藥比單獨用(yong)(yong)(yong)藥效果好(hao)。預(yu)防(fang)用(yong)(yong)(yong)藥比污(wu)染后(hou)(hou)再(zai)用(yong)(yong)(yong)藥效果好(hao)。預(yu)防(fang)用(yong)(yong)(yong)藥一(yi)般用(yong)(yong)(yong)雙抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)（青霉(mei)素(su)(su)(su)(su)100u/mL加(jia)(jia)鏈霉(mei)素(su)(su)(su)(su)100μg/mL），污(wu)染后(hou)(hou)清除用(yong)(yong)(yong)藥需采用(yong)(yong)(yong)大于常(chang)用(yong)(yong)(yong)量5～10倍的(de)(de)沖洗法(fa)，于加(jia)(jia)藥后(hou)(hou)作用(yong)(yong)(yong)24～48小時(shi)，再(zai)換常(chang)規(gui)培(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)。此法(fa)在污(wu)染早(zao)期可能(neng)有(you)效。所(suo)用(yong)(yong)(yong)抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)品種除青霉(mei)素(su)(su)(su)(su)、鏈霉(mei)素(su)(su)(su)(su)外(wai)，還可用(yong)(yong)(yong)慶大霉(mei)素(su)(su)(su)(su)、卡(ka)那霉(mei)素(su)(su)(su)(su)、多粘菌(jun)素(su)(su)(su)(su)、四(si)環(huan)素(su)(su)(su)(su)、制(zhi)霉(mei)菌(jun)素(su)(su)(su)(su)等。常(chang)用(yong)(yong)(yong)400～800μg/mL卡(ka)那霉(mei)素(su)(su)(su)(su)或(huo)200μg/mL四(si)環(huan)素(su)(su)(su)(su)處理(li)，每隔2～3日(ri)換液(ye)(ye)(ye)(ye)1次(ci)(ci)，傳1～2代進(jin)行治療。近年來(lai)有(you)報(bao)道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素(su)(su)(su)(su)衍(yan)生(sheng)(sheng)物(wu)（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四(si)環(huan)素(su)(su)(su)(su)衍(yan)生(sheng)(sheng)物(wu)（BM-2）等三(san)種抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)單用(yong)(yong)(yong)或(huo)合用(yong)(yong)(yong)對殺滅(mie)支原體(ti)有(you)效。這(zhe)三(san)種抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)均用(yong)(yong)(yong)PBS配成(cheng)250濃縮液(ye)(ye)(ye)(ye)，-20℃保存(cun)備用(yong)(yong)(yong)，使(shi)用(yong)(yong)(yong)濃度Cip為(wei)10μg/mL，BM-1為(wei)10μg/mL，BM-2為(wei)5μg/mL。使(shi)用(yong)(yong)(yong)時(shi)先吸(xi)除污(wu)染的(de)(de)培(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)，加(jia)(jia)入含BM-1的(de)(de)RPMI1640培(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)，3天(tian)后(hou)(hou)再(zai)吸(xi)除培(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)，加(jia)(jia)入含BM-2的(de)(de)RPMI1640培(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)，培(pei)養4天(tian)，如此連(lian)續3個輪次(ci)(ci)，直至用(yong)(yong)(yong)33258熒光染色(se)鏡檢證明已清除支原體(ti)后(hou)(hou)，再(zai)加(jia)(jia)正常(chang)培(pei)養液(ye)(ye)(ye)(ye)培(pei)養傳代3-4次(ci)(ci)。

2-使(shi)用支原體特(te)異(yi)性血清

用5%的兔支原體(ti)免疫血(xue)清（血(xue)凝效價(jia)1:320以上）可(ke)去(qu)除(chu)支原體(ti)污(wu)染(ran)，因特異抗(kang)體(ti)可(ke)抑制支原體(ti)生長(chang)，故(gu)經抗(kang)血(xue)清處(chu)理后(hou)11天即轉為陰性，并且5個月后(hou)仍為陰性。但此法比較麻煩，不如(ru)用抗(kang)生素方(fang)便、經濟(ji)。

3-加溫(wen)處(chu)理

將污(wu)染的(de)組織(zhi)培(pei)養物放在(zai)41℃培(pei)養18小(xiao)時，可殺死(si)(si)支原體，但對細胞(bao)有(you)不良影(ying)響。所以在(zai)處理前要進行預試驗，摸(mo)索能zui大限度殺死(si)(si)支原體又(you)對細胞(bao)影(ying)響zui小(xiao)的(de)加熱(re)時間。此法(fa)有(you)時不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。

4-其他方(fang)法

除了上述去(qu)除污(wu)染的(de)方法外，還(huan)有動(dong)物體內(nei)接種除菌法、巨噬(shi)(shi)細(xi)胞吞噬(shi)(shi)法、污(wu)染培養(yang)瓶(ping)中加(jia)溴尿嘧啶再(zai)用(yong)光照射的(de)方法及(ji)過濾法等，但均較麻煩，且效果不確定(ding)。所以一(yi)旦支原體污(wu)染，除非(fei)有特別(bie)重要價值，一(yi)般(ban)均棄之重新培養(yang)。

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猴試劑盒(he),猴(hou)elisa試劑(ji)盒,酶聯免疫試劑盒

小(xiao)鼠試劑盒(he),小(xiao)鼠elisa試劑盒(he),酶(mei)聯(lian)免疫試劑盒

大鼠試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,酶聯(lian)免疫試(shi)劑(ji)盒

人(ren)試劑盒,人elisa試劑(ji)盒,酶(mei)聯免疫試(shi)劑盒

植物(wu)病毒、細菌(jun)、真菌(jun)、植物(wu)激素和轉(zhuan)基因作物(wu)的農(nong)業診(zhen)斷試劑盒

動植物疾病(bing)診斷類如豬、牛(niu)、羊、馬(ma)等(deng)家畜和(he)禽(qin)類以及(ji)寵物類檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

15596026   TRIzol試劑  

15596018   TRIzol試劑  

11668027   脂質體(ti)2000轉染(ran)試劑

11668019   脂質體2000轉染試劑(ji)

13778075   RNAiMAX轉染(ran)試(shi)劑

17504044   B-27（黃顏色）      

12587010   B-27 （黃顏色(se)）不(bu)含(han)維(wei)生素A

17502048    N-2 （粉紅顏色）