人結(jie)腸癌細(xi)胞(bao)(bao)系：SW48細(xi)胞(bao)(bao)，SW480細(xi)胞(bao)(bao)，CACO-2細(xi)胞(bao)(bao)，SW620細(xi)胞(bao)(bao)，HCT-8細(xi)胞(bao)(bao)，HCT/V細(xi)胞(bao)(bao)，HCT-116細(xi)胞(bao)(bao)，LoVo細(xi)胞(bao)(bao)，HRT-18細(xi)胞(bao)(bao)，HT-29細(xi)胞(bao)(bao)等

人宮(gong)頸癌細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)系：hela細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，HT-3細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，C33A細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，SN12C細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，SKG-IIIa細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，Hela S3細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，DoTc2-4510細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，Ca Ski細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao) ，ME-180細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)等(deng)

DC2.4細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)株(zhu)  MC38細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)株(zhu)，MLE-12細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，bEND.3細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao) HT-22細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HK-2細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao) THP-1細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao) WRO細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao) FRO細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao) Molt-4細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)系 SH-SY-5Y細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao) U87-MG細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)

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         ;   HAC-2細胞(bao)，人(ren)卵巢(chao)囊腺(xian)癌細胞(bao)

     ;       OVK18細胞(bao)，人卵(luan)巢(chao)癌細胞(bao)

       ;     OVCAR4細(xi)胞，人(ren)卵(luan)巢癌(ai)細(xi)胞

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HCC1599細胞 HCC1599細胞 乳腺癌細胞（細(xi)胞(bao)培養中常見的(de)生(sheng)物污(wu)(wu)染類型有7種，分(fen)別(bie)是細(xi)菌(jun)污(wu)(wu)染、支原體污(wu)(wu)染、原蟲(chong)污(wu)(wu)染、黑膠蟲(chong)污(wu)(wu)染、真菌(jun)污(wu)(wu)染、病(bing)毒污(wu)(wu)染以及非細(xi)胞(bao)污(wu)(wu)染，那么他們污(wu)(wu)染細(xi)胞(bao)的(de)特點分(fen)別(bie)是什么呢？怎樣能夠減少污(wu)(wu)染現象的(de)發生(sheng)？）

1-細菌(jun)

細(xi)(xi)(xi)菌污染常見(jian)的有(you)大腸桿菌，葡萄(tao)球(qiu)菌等(deng)。細(xi)(xi)(xi)菌污染較(jiao)易發(fa)現(xian)，在(zai)(zai)普通(tong)倒置顯(xian)微鏡下為黑色細(xi)(xi)(xi)沙狀(zhuang)(zhuang)，培(pei)養(yang)液(ye)一般會在(zai)(zai)短(duan)時(shi)間(jian)內變黃，有(you)時(shi)靜置的培(pei)養(yang)液(ye)不混(hun)，稍加震蕩(dang)會有(you)很多混(hun)濁物漂起。顯(xian)微鏡下可(ke)見(jian)培(pei)養(yang)液(ye)中有(you)大量(liang)圓球(qiu)狀(zhuang)(zhuang)顆粒物漂浮，有(you)時(shi)在(zai)(zai)細(xi)(xi)(xi)胞表面及周圍有(you)大量(liang)細(xi)(xi)(xi)菌存在(zai)(zai)，細(xi)(xi)(xi)胞停止生長并有(you)中毒表現(xian)。

處理：①在培養液中加入相應的(de)抗(kang)生素，能夠預防絕大(da)多數(shu)的(de)細菌污染。

2-真菌

真菌污染(ran)是細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)過程(cheng)中(zhong)zui常見(jian)的(de)(de)一種，尤其(qi)梅雨(yu)季節快要(yao)到了，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)時更易污染(ran)。污染(ran)細(xi)胞(bao)的(de)(de)多(duo)為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢(bao)子霉、白(bai)念珠菌、酵母菌等。霉菌污染(ran)后(hou)多(duo)數在培(pei)養(yang)液中(zhong)形成(cheng)白(bai)色(se)或淺黃色(se)漂浮(fu)物。一般(ban)肉眼可見(jian)，較(jiao)易被(bei)發現，短期內培(pei)養(yang)液多(duo)不混濁，倒置顯微鏡下(xia)可見(jian)于細(xi)胞(bao)之(zhi)間縱橫交(jiao)錯穿(chuan)行(xing)的(de)(de)絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲，并懸浮(fu)飄蕩在培(pei)養(yang)液中(zhong)。

很多菌(jun)絲(si)在高倍鏡(jing)(jing)可見(jian)到有鏈狀排列的(de)菌(jun)珠；念(nian)珠菌(jun)或酵母菌(jun)形態呈卵(luan)形，散在細(xi)胞周(zhou)邊和(he)細(xi)胞之(zhi)間(jian)生(sheng)長(chang)。鏡(jing)(jing)下看時(shi)，要將培養瓶(ping)用(yong)酒精(jing)棉(mian)球擦(ca)干凈，以防止與(yu)瓶(ping)外尤其瓶(ping)底外面生(sheng)長(chang)的(de)菌(jun)絲(si)相混(hun)淆。

真菌污染后，細胞(bao)生長(chang)變(bian)慢(man)，但(dan)(dan)zui后由于營養耗盡及毒(du)性作用(yong)而使細胞(bao)脫落(luo)死亡。真菌生長(chang)的(de)比(bi)較(jiao)慢(man)，不(bu)象(xiang)細菌那么容易被發(fa)現(xian)，但(dan)(dan)是一旦發(fa)現(xian)有它的(de)存在細胞(bao)就被污染了，也(ye)很難救活了。

3-支(zhi)原體(ti)

支原體(ti)的大小(xiao)介(jie)于細(xi)菌和(he)(he)病毒之間，是一種獨立生(sheng)活的微生(sheng)物。對熱敏感，對一般抗生(sheng)素(su)不(bu)敏感。支原體(ti)的形(xing)態多(duo)變，多(duo)吸(xi)附(fu)在細(xi)胞表面和(he)(he)細(xi)胞之間。電鏡下觀(guan)察，中(zhong)心有(you)高密度的密集顆粒(li)，橫(heng)斷面與細(xi)胞微絨(rong)毛相似(si)。

因國內的血(xue)清(qing)大多數都(dou)沒有做支(zhi)原體(ti)陰性(xing)檢(jian)測，而(er)支(zhi)原體(ti)又是牛血(xue)清(qing)中zui常(chang)見(jian)的微生物之一。支(zhi)原體(ti)污染細(xi)胞(bao)后，培養(yang)(yang)液輕微發(fa)生混濁．但細(xi)胞(bao)變化不顯著(zhu)，隨著(zhu)細(xi)胞(bao)的培養(yang)(yang)會慢(man)慢(man)死(si)亡。

支(zhi)原(yuan)體(ti)污染(ran)檢測（熒(ying)光染(ran)色(se)法）：DNA和與DNA特異(yi)性結合的(de)熒(ying)光染(ran)料結合，使得支(zhi)原(yuan)體(ti)的(de)DNA著色(se)，然(ran)后用熒(ying)光顯微鏡觀(guan)察。鏡下支(zhi)原(yuan)體(ti)為散(san)在于(yu)細(xi)胞同圍或附于(yu)細(xi)胞膜表面的(de)亮綠色(se)小點(dian)。

解決：

1）抗(kang)生素排除法：支原體(ti)污染預防比解決好。如果(guo)不小心污染后，可加入高濃度(du)抗(kang)生素（常規使用(yong)的5倍濃度(du)）作(zuo)用(yong)24-48小時，再換入常規培養液，但該法不保證有效。推薦用(yong)量：慶(qing)大霉素 200μg/ml ,四環素10μg/ml ，卡那霉素50μg/ml 。

2）加溫除(chu)菌：支(zhi)原體(ti)(ti)不耐熱(re)(re)，可以對支(zhi)原體(ti)(ti)污(wu)染的(de)細胞(bao)熱(re)(re)處(chu)理(li)除(chu)菌。因高溫對細胞(bao)本身也會產生一定影響，故熱(re)(re)處(chu)理(li)前需先進行預實(shi)驗(yan)，確定對細胞(bao)影響zui小(xiao)而能(neng)zui大(da)程度的(de)殺(sha)死支(zhi)原體(ti)(ti)的(de)時間。

4-黑膠蟲

黑膠蟲的(de)存在目前尚有(you)爭(zheng)議，其在低倍下(xia)為黑色點(dian)狀，高倍下(xia)可看見黑色的(de)小(xiao)蟲游來(lai)游去，培養(yang)液也是不渾的(de)，對細胞(bao)生長狀態(tai)不會有(you)明顯影響，在細胞(bao)增(zeng)殖旺盛之后會自然(ran)消失，除更換血清外無須特殊(shu)處理。

5-原蟲

培養液可輕微渾濁，顯微鏡(jing)下那些(xie)細(xi)小(xiao)的(de)點狀物(wu)數量(liang)非常多，輕微活動，細(xi)胞(bao)(bao)雖然(ran)可以(yi)生(sheng)長但繁殖(zhi)速度卻(que)明顯減慢，而且細(xi)胞(bao)(bao)狀態不好，邊緣不清楚，細(xi)胞(bao)(bao)不透亮。他們(men)(men)與細(xi)胞(bao)(bao)可共生(sheng)但會與細(xi)胞(bao)(bao)爭奪營養。這(zhe)種共生(sheng)是(shi)非常普遍的(de)，但他們(men)(men)的(de)數量(liang)小(xiao)，細(xi)胞(bao)(bao)站(zhan)優勢(shi)所以(yi)不會影響到細(xi)胞(bao)(bao)的(de)正常生(sheng)長，只有當他們(men)(men)到達一定的(de)數量(liang)時就會影響到細(xi)胞(bao)(bao)的(de)生(sheng)長，zui終(zhong)形成惡性循環(huan)。

6-病(bing)毒

組織(zhi)細(xi)胞培(pei)養(yang)過程中，如果沒有除(chu)去潛在的(de)病毒，就會產(chan)生(sheng)病毒污(wu)染。目前，從原代猴腎細(xi)胞的(de)培(pei)養(yang)中已發(fa)現(xian)不少(shao)于20種血(xue)清性病毒。 盡管病毒污(wu)染的(de)細(xi)胞不影響原代培(pei)養(yang)，但生(sheng)產(chan)疫(yi)苗是不安全(quan)的(de)。因此，潛在病毒是細(xi)胞大量(liang)生(sheng)產(chan)和疫(yi)苗、干擾素等(deng)生(sheng)物(wu)制品制作中的(de)難題。

7-非同種(zhong)細胞污(wu)染(ran)

即(ji)細(xi)胞交(jiao)叉污(wu)染，由(you)于細(xi)胞培養操作時(shi)各細(xi)胞株所(suo)(suo)需的器(qi)材和(he)溶液(ye)沒(mei)有嚴格(ge)分(fen)開，往往會使一種細(xi)胞被另一種細(xi)胞污(wu)染。目前，世界上(shang)已有幾十種細(xi)胞都被HeLa細(xi)胞所(suo)(suo)污(wu)染，致(zhi)使許多實驗宣告(gao)無效。非細(xi)胞培養物所(suo)(suo)造成的化學(xue)成分(fen)的污(wu)染也偶有發(fa)生(sheng)，大多是(shi)由(you)于細(xi)胞培養所(suo)(suo)需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xue)物質所(suo)(suo)致(zhi)。

污染是細(xi)胞培養(yang)的大敵，預防和避免(mian)污染是成功培養(yang)細(xi)胞的關鍵(jian)之(zhi)一。危機(ji)意識要貫徹實驗的始終，否則不僅(jin)浪費(fei)時間，而且(qie)浪費(fei)人力、物力，甚至造成無(wu)法彌(mi)補(bu)的損失。

（如何預防(fang)細胞培養的污(wu)染和清除這些污(wu)染物(wu)呢？）慧(hui)穎(ying) 細胞庫(ku) 技術為您解答：

一、污染的預防(fang)

預防是防止(zhi)細(xi)胞培養過程(cheng)中發生(sheng)污染的辦法。只有預防工(gong)作(zuo)做在(zai)前，才能(neng)將發生(sheng)污染的可能(neng)性降(jiang)到zui小程(cheng)度(du)。一般預防可從以下幾方面著(zhu)手：

1-從操作者做(zuo)起

1操作(zuo)(zuo)(zuo)者責任心要(yao)強，要(yao)細心穩重，操作(zuo)(zuo)(zuo)技術要(yao)熟練。進(jin)無菌(jun)室(shi)前要(yao)用(yong)肥(fei)皂洗手或用(yong)5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(gui)定(ding)穿隔離衣。進(jin)入(ru)(ru)后關(guan)好門(men)，坐下來盡量(liang)少(shao)走動。工作(zuo)(zuo)(zuo)開始要(yao)先用(yong)75%酒精棉球(qiu)擦手、擦瓶口和(he)燒灼瓶口。事先要(yao)嚴格檢查器(qi)材(cai)、溶液(ye)和(he)培(pei)養(yang)物，不要(yao)把污染品或未經消毒的物品帶(dai)入(ru)(ru)無菌(jun)室(shi)內，更不能隨便使用(yong)，以免造成大批污染。

2、操作(zuo)者動作(zuo)要輕，必須在火(huo)焰周圍無菌區(qu)內打開瓶口，并將瓶口轉動燒灼。操作(zuo)時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應轉向背(bei)面。

3、操作時要(yao)常(chang)更(geng)換(huan)吸管(guan)，切勿一根(gen)吸管(guan)做到(dao)底。一旦發現吸管(guan)口接觸了手和其他污(wu)染物品(pin)應棄去(qu)。實(shi)驗完畢及(ji)時收(shou)拾，保持實(shi)驗室清(qing)潔整齊，zui后用消毒水浸(jin)泡(pao)的紗布擦臺(tai)面。

2-從物(wu)品、用品消毒滅菌著手

細(xi)胞培養所用(yong)物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌(jun)(jun)除菌(jun)(jun)要仔細(xi)，并在無菌(jun)(jun)試驗(yan)陰性后才能使用(yong)。操作室及剩余(yu)的無菌(jun)(jun)器材要定期(qi)清潔(jie)消毒滅菌(jun)(jun)。

3-防(fang)止(zhi)細胞交叉污(wu)染

在進(jin)行多種細(xi)胞培養(yang)操作時，所用器具(ju)要嚴(yan)格區分，做上標記(ji)便于辨(bian)別(bie)。并按順序(xu)進(jin)行操作，避(bi)免一起進(jin)行時易發生(sheng)混亂。

在進行換(huan)液或傳代操(cao)作時，注射器和滴(di)管不要觸及(ji)細胞(bao)培養瓶瓶口(kou)，以免把細胞(bao)帶到(dao)培養液中污染其他細胞(bao)。

所有細胞一旦購置，或(huo)從別處引入(ru)，或(huo)自己建立(li)，均應(ying)及早留種凍存(cun)，一旦發生污染可棄之復(fu)蘇(su)，重新培養。

二(er)、污染的清除(chu)

培(pei)(pei)養細(xi)(xi)(xi)胞(bao)一經污染，多數(shu)較難處理。如果污染細(xi)(xi)(xi)胞(bao)價(jia)值(zhi)不(bu)大(da)，宜棄之(zhi)；有細(xi)(xi)(xi)胞(bao)株留(liu)存(cun)的或可購置(zhi)的，可在尋找原因后*消毒操作室，復(fu)蘇(su)或重新購置(zhi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，再培(pei)(pei)養。若污染細(xi)(xi)(xi)胞(bao)價(jia)值(zhi)較大(da)，又難于重新得到，可采取以下(xia)辦法(fa)清除(chu)。

1-使用抗(kang)生素

抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)對殺滅細菌較有(you)效(xiao)(xiao)。聯合用(yong)藥(yao)(yao)比單獨用(yong)藥(yao)(yao)效(xiao)(xiao)果(guo)好。預(yu)防用(yong)藥(yao)(yao)比污(wu)(wu)染(ran)后(hou)再(zai)用(yong)藥(yao)(yao)效(xiao)(xiao)果(guo)好。預(yu)防用(yong)藥(yao)(yao)一(yi)般用(yong)雙抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)（青霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)100u/mL加(jia)(jia)(jia)鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)100μg/mL），污(wu)(wu)染(ran)后(hou)清(qing)除用(yong)藥(yao)(yao)需采用(yong)大(da)于(yu)常用(yong)量5～10倍的沖洗法，于(yu)加(jia)(jia)(jia)藥(yao)(yao)后(hou)作用(yong)24～48小時，再(zai)換常規培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)。此法在污(wu)(wu)染(ran)早期可(ke)能有(you)效(xiao)(xiao)。所用(yong)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)品種(zhong)(zhong)除青霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)外，還可(ke)用(yong)慶大(da)霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、卡(ka)(ka)那霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、多粘菌素(su)(su)(su)(su)、四(si)環(huan)(huan)素(su)(su)(su)(su)、制霉(mei)(mei)菌素(su)(su)(su)(su)等(deng)(deng)。常用(yong)400～800μg/mL卡(ka)(ka)那霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)或(huo)200μg/mL四(si)環(huan)(huan)素(su)(su)(su)(su)處理，每隔2～3日換液(ye)(ye)1次(ci)，傳(chuan)1～2代(dai)進(jin)行治療。近年來有(you)報道，4-氟(fu)，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素(su)(su)(su)(su)衍(yan)生(sheng)物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四(si)環(huan)(huan)素(su)(su)(su)(su)衍(yan)生(sheng)物（BM-2）等(deng)(deng)三種(zhong)(zhong)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)單用(yong)或(huo)合用(yong)對殺滅支(zhi)原體有(you)效(xiao)(xiao)。這三種(zhong)(zhong)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(su)均用(yong)PBS配成250濃(nong)縮液(ye)(ye)，-20℃保存備用(yong)，使(shi)用(yong)濃(nong)度Cip為(wei)(wei)10μg/mL，BM-1為(wei)(wei)10μg/mL，BM-2為(wei)(wei)5μg/mL。使(shi)用(yong)時先吸(xi)除污(wu)(wu)染(ran)的培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)，加(jia)(jia)(jia)入含(han)BM-1的RPMI1640培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)，3天后(hou)再(zai)吸(xi)除培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)，加(jia)(jia)(jia)入含(han)BM-2的RPMI1640培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)，培(pei)(pei)養(yang)4天，如此連(lian)續3個輪次(ci)，直(zhi)至(zhi)用(yong)33258熒光染(ran)色鏡(jing)檢證明已(yi)清(qing)除支(zhi)原體后(hou)，再(zai)加(jia)(jia)(jia)正常培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)培(pei)(pei)養(yang)傳(chuan)代(dai)3-4次(ci)。

2-使用支原(yuan)體(ti)特異性血清

用(yong)5%的兔(tu)支(zhi)原(yuan)(yuan)體(ti)(ti)免疫(yi)血(xue)清(qing)(qing)（血(xue)凝(ning)效(xiao)價(jia)1:320以上）可去除(chu)支(zhi)原(yuan)(yuan)體(ti)(ti)污染，因特異抗(kang)體(ti)(ti)可抑(yi)制支(zhi)原(yuan)(yuan)體(ti)(ti)生長，故(gu)經(jing)抗(kang)血(xue)清(qing)(qing)處理后11天即轉為(wei)陰(yin)(yin)性，并(bing)且5個(ge)月(yue)后仍為(wei)陰(yin)(yin)性。但此法(fa)比較麻煩，不如用(yong)抗(kang)生素方便(bian)、經(jing)濟(ji)。

3-加溫處理

將污染(ran)的(de)組(zu)織培養(yang)物(wu)放在(zai)41℃培養(yang)18小時(shi)，可殺死支原體(ti)，但對(dui)(dui)細(xi)胞(bao)有不(bu)良影響(xiang)。所以在(zai)處理前(qian)要進行預(yu)試驗(yan)，摸索能zui大限度殺死支原體(ti)又對(dui)(dui)細(xi)胞(bao)影響(xiang)zui小的(de)加熱時(shi)間。此法(fa)有時(shi)不(bu)可靠。若先用藥物(wu)處理后，再以41℃加溫處理效果(guo)更佳。

4-其他方法

除(chu)了上述去除(chu)污染(ran)的方法外，還有動物體(ti)內接(jie)種除(chu)菌法、巨(ju)噬細胞吞噬法、污染(ran)培(pei)養瓶中(zhong)加溴尿嘧啶再用光照(zhao)射的方法及過濾法等，但(dan)均(jun)較(jiao)麻煩，且效果不確定。所以一旦支(zhi)原體(ti)污染(ran)，除(chu)非有特別重要價值，一般均(jun)棄之重新培(pei)養。

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人試劑盒,人(ren)elisa試(shi)劑盒,酶聯免疫試劑盒

植物病(bing)毒(du)、細(xi)菌、真(zhen)菌、植物激素和轉基因作物的農業診斷試劑盒

動植物疾病診斷類如豬、牛、羊(yang)、馬等家(jia)畜和禽(qin)類以(yi)及(ji)寵物類檢測試劑(ji)盒

15596026   TRIzol試劑  

15596018   TRIzol試(shi)劑  

11668027   脂質(zhi)體2000轉染(ran)試(shi)劑

11668019   脂(zhi)質體2000轉(zhuan)染試(shi)劑

13778075   RNAiMAX轉染試劑

17504044   B-27（黃顏色）      

12587010   B-27 （黃(huang)顏色）不含(han)維生素A

17502048    N-2 （粉紅顏色）