人結腸癌細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)系：SW48細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，SW480細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，CACO-2細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，SW620細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT-8細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT/V細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HCT-116細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，LoVo細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HRT-18細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HT-29細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)等

人宮(gong)頸癌細(xi)胞(bao)(bao)(bao)系：hela細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HT-3細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，C33A細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SN12C細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SKG-IIIa細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，Hela S3細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，DoTc2-4510細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，Ca Ski細(xi)胞(bao)(bao)(bao) ，ME-180細(xi)胞(bao)(bao)(bao)等(deng)

DC2.4細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株(zhu)  MC38細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株(zhu)，MLE-12細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，bEND.3細(xi)(xi)胞(bao)(bao) HT-22細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HK-2細(xi)(xi)胞(bao)(bao) THP-1細(xi)(xi)胞(bao)(bao) WRO細(xi)(xi)胞(bao)(bao) FRO細(xi)(xi)胞(bao)(bao) Molt-4細(xi)(xi)胞(bao)(bao)系 SH-SY-5Y細(xi)(xi)胞(bao)(bao) U87-MG細(xi)(xi)胞(bao)(bao) RAW264.7細(xi)(xi)胞(bao)(bao) MC3T3-E1細(xi)(xi)胞(bao)(bao) A549細(xi)(xi)胞(bao)(bao)

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MKN1細胞，人胃癌細胞株 （細胞培養中常見的生物污染類型有7種，分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染，那么他們污染細胞的特點分別是什么呢？怎樣能夠減少污染現象的發生？）

1-細菌

細(xi)菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)常見的有(you)(you)大腸桿菌(jun)(jun)(jun)，葡(pu)萄球菌(jun)(jun)(jun)等(deng)。細(xi)菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)較易發現(xian)，在(zai)普通倒置(zhi)(zhi)顯微鏡下為黑色細(xi)沙狀，培養(yang)液(ye)(ye)一般會在(zai)短時(shi)間內變黃，有(you)(you)時(shi)靜置(zhi)(zhi)的培養(yang)液(ye)(ye)不混(hun)，稍加(jia)震蕩會有(you)(you)很多混(hun)濁物(wu)漂(piao)起。顯微鏡下可見培養(yang)液(ye)(ye)中有(you)(you)大量圓球狀顆粒(li)物(wu)漂(piao)浮，有(you)(you)時(shi)在(zai)細(xi)胞(bao)表面及周圍有(you)(you)大量細(xi)菌(jun)(jun)(jun)存(cun)在(zai)，細(xi)胞(bao)停止(zhi)生長并有(you)(you)中毒表現(xian)。

處理(li)：①在培養(yang)液中加入(ru)相應的(de)抗生素，能夠預防絕大多數(shu)的(de)細菌污(wu)染。

2-真菌

真菌(jun)污(wu)染是細(xi)胞(bao)培養過程中(zhong)zui常見的(de)一種，尤其梅雨季(ji)節快要到了(le)，進(jin)行細(xi)胞(bao)培養時更易污(wu)染。污(wu)染細(xi)胞(bao)的(de)多(duo)(duo)為煙(yan)曲霉、黑曲霉、毛霉菌(jun)、孢(bao)子霉、白(bai)(bai)念珠菌(jun)、酵母(mu)菌(jun)等。霉菌(jun)污(wu)染后多(duo)(duo)數在培養液中(zhong)形成白(bai)(bai)色或(huo)淺黃色漂浮物(wu)。一般(ban)肉眼可見，較易被(bei)發(fa)現，短(duan)期內培養液多(duo)(duo)不混濁，倒置顯微鏡下可見于細(xi)胞(bao)之間縱橫交錯穿行的(de)絲狀(zhuang)、管狀(zhuang)、及樹枝狀(zhuang)菌(jun)絲，并懸浮飄蕩在培養液中(zhong)。

很多菌絲在(zai)(zai)高倍鏡(jing)可見到(dao)有鏈狀(zhuang)排列(lie)的(de)菌珠；念珠菌或(huo)酵母(mu)菌形(xing)態呈卵(luan)形(xing)，散在(zai)(zai)細(xi)胞周(zhou)邊和細(xi)胞之間生(sheng)長。鏡(jing)下看(kan)時，要將培養瓶(ping)用酒(jiu)精(jing)棉球(qiu)擦(ca)干凈，以防止與瓶(ping)外尤其瓶(ping)底外面生(sheng)長的(de)菌絲相(xiang)混淆。

真菌(jun)污(wu)染(ran)后，細(xi)(xi)胞生(sheng)長(chang)變慢，但(dan)zui后由于營養耗盡(jin)及毒性作用而使(shi)細(xi)(xi)胞脫落死(si)亡。真菌(jun)生(sheng)長(chang)的比較慢，不(bu)象細(xi)(xi)菌(jun)那么容易被發現，但(dan)是(shi)一旦發現有它(ta)的存在(zai)細(xi)(xi)胞就被污(wu)染(ran)了，也很(hen)難救(jiu)活了。

3-支原體

支原體的大小介(jie)于細(xi)菌和(he)病毒之(zhi)間(jian)，是(shi)一(yi)種(zhong)獨立生活的微(wei)生物(wu)。對(dui)熱敏感，對(dui)一(yi)般抗(kang)生素(su)不敏感。支原體的形(xing)態(tai)多變，多吸(xi)附在細(xi)胞表(biao)面和(he)細(xi)胞之(zhi)間(jian)。電鏡(jing)下觀察，中心有(you)高密(mi)度的密(mi)集顆(ke)粒，橫斷面與細(xi)胞微(wei)絨(rong)毛相似。

因國內的(de)(de)血(xue)清大多數(shu)都沒有做支(zhi)原(yuan)體(ti)陰性檢測，而支(zhi)原(yuan)體(ti)又是牛血(xue)清中zui常(chang)見的(de)(de)微生(sheng)物之一。支(zhi)原(yuan)體(ti)污染細胞后，培養液輕(qing)微發生(sheng)混濁．但細胞變化不顯著，隨著細胞的(de)(de)培養會慢慢死亡。

支原體污(wu)染檢測(ce)（熒(ying)(ying)(ying)光染色法）：DNA和與DNA特異性結(jie)合(he)的熒(ying)(ying)(ying)光染料結(jie)合(he)，使(shi)得支原體的DNA著色，然后用熒(ying)(ying)(ying)光顯微鏡觀察。鏡下支原體為散在于(yu)細(xi)胞同圍或附于(yu)細(xi)胞膜表面的亮綠色小(xiao)點。

解(jie)決：

1）抗(kang)生素排除法：支原體(ti)污(wu)染預防比(bi)解決(jue)好。如果(guo)不小心污(wu)染后，可加入(ru)高(gao)濃(nong)度抗(kang)生素（常規使用的(de)5倍(bei)濃(nong)度）作(zuo)用24-48小時(shi)，再換入(ru)常規培養(yang)液，但(dan)該法不保證有效。推(tui)薦用量(liang)：慶(qing)大霉素 200μg/ml ,四(si)環(huan)素10μg/ml ，卡那霉素50μg/ml 。

2）加溫(wen)除菌(jun)：支原(yuan)體(ti)(ti)不(bu)耐熱，可以對(dui)(dui)支原(yuan)體(ti)(ti)污染的細胞熱處理除菌(jun)。因(yin)高(gao)溫(wen)對(dui)(dui)細胞本(ben)身也(ye)會(hui)產(chan)生一定(ding)影(ying)(ying)響(xiang)，故(gu)熱處理前需(xu)先進行預實驗，確定(ding)對(dui)(dui)細胞影(ying)(ying)響(xiang)zui小而能zui大程度的殺死支原(yuan)體(ti)(ti)的時間。

4-黑膠蟲(chong)

黑膠蟲的(de)(de)存在目前(qian)尚有爭議，其在低倍下(xia)為黑色點狀，高倍下(xia)可看見黑色的(de)(de)小蟲游(you)來(lai)游(you)去，培養液也是不渾(hun)的(de)(de)，對細胞生長狀態不會有明顯影(ying)響，在細胞增(zeng)殖旺盛之后會自然(ran)消失(shi)，除更換血清(qing)外(wai)無須特殊處理。

5-原(yuan)蟲

培養(yang)液可輕(qing)微(wei)渾濁，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)那些細小的(de)點(dian)狀(zhuang)物數量非常多，輕(qing)微(wei)活動，細胞(bao)(bao)雖然可以生長但(dan)繁殖速度卻明顯(xian)減慢，而且(qie)細胞(bao)(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，邊緣(yuan)不(bu)清(qing)楚，細胞(bao)(bao)不(bu)透(tou)亮。他們(men)與細胞(bao)(bao)可共(gong)生但(dan)會與細胞(bao)(bao)爭奪營養(yang)。這(zhe)種共(gong)生是非常普遍的(de)，但(dan)他們(men)的(de)數量小，細胞(bao)(bao)站優勢所以不(bu)會影響到(dao)(dao)細胞(bao)(bao)的(de)正常生長，只(zhi)有當他們(men)到(dao)(dao)達(da)一定的(de)數量時就會影響到(dao)(dao)細胞(bao)(bao)的(de)生長，zui終形(xing)成惡性循環(huan)。

6-病毒(du)

組織細胞(bao)培養過程(cheng)中，如果(guo)沒有(you)除(chu)去(qu)潛(qian)在(zai)的(de)病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)，就會產生病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)污(wu)染。目前(qian)，從原代(dai)猴腎細胞(bao)的(de)培養中已發現不(bu)少(shao)于20種(zhong)血清性病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)。 盡管病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)污(wu)染的(de)細胞(bao)不(bu)影響原代(dai)培養，但生產疫苗(miao)是不(bu)安全(quan)的(de)。因此，潛(qian)在(zai)病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)是細胞(bao)大量生產和(he)疫苗(miao)、干擾素等生物(wu)制品制作中的(de)難題。

7-非同(tong)種細(xi)胞污(wu)染

即細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)交叉污染(ran)，由于細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作時各細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)株所(suo)需的器材(cai)和溶液(ye)沒有(you)嚴格分(fen)開，往(wang)往(wang)會使一(yi)(yi)種細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)被另一(yi)(yi)種細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)污染(ran)。目前，世界上(shang)已(yi)有(you)幾十種細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)都被HeLa細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)所(suo)污染(ran)，致(zhi)使許多實(shi)驗宣告無效(xiao)。非細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)物所(suo)造成(cheng)的化學成(cheng)分(fen)的污染(ran)也偶有(you)發(fa)生(sheng)，大多是由于細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)所(suo)需物品清(qing)洗消毒(du)不(bu)*而帶(dai)入一(yi)(yi)些有(you)毒(du)化學物質(zhi)所(suo)致(zhi)。

污(wu)染(ran)是細(xi)胞培養(yang)的(de)大(da)敵，預防(fang)和避(bi)免污(wu)染(ran)是成功培養(yang)細(xi)胞的(de)關鍵之(zhi)一。危機意識要貫(guan)徹實驗的(de)始(shi)終(zhong)，否則不僅浪費(fei)時間(jian)，而且浪費(fei)人力(li)、物(wu)力(li)，甚至造成無法彌補(bu)的(de)損(sun)失(shi)。

MKN1細胞，人胃癌細胞株（如何預防細胞培養的污染和清除這些污染物呢？）慧穎 細胞庫 技術為您解答：

一、污染的預防

預防是防止細胞培養(yang)過程中發生(sheng)污染的(de)辦法。只(zhi)有(you)預防工作做在前(qian)，才能將(jiang)發生(sheng)污染的(de)可(ke)能性降到zui小程度。一(yi)般預防可(ke)從以下幾方面(mian)著手(shou)：

1-從操作者做起

1操作者責任心(xin)要(yao)(yao)強，要(yao)(yao)細心(xin)穩重，操作技術要(yao)(yao)熟練。進無菌室前要(yao)(yao)用肥皂(zao)洗(xi)手或(huo)用5%新潔爾(er)滅浸泡(pao)5分鐘(zhong)，按(an)規定穿隔離衣(yi)。進入(ru)后(hou)關好門，坐下來盡量少走(zou)動。工作開始要(yao)(yao)先用75%酒(jiu)精棉球擦手、擦瓶口和(he)燒灼瓶口。事先要(yao)(yao)嚴格檢查(cha)器材、溶(rong)液和(he)培養物，不要(yao)(yao)把(ba)污(wu)(wu)染(ran)品或(huo)未經消毒的物品帶入(ru)無菌室內，更不能隨便使(shi)用，以(yi)免造成大批污(wu)(wu)染(ran)。

2、操(cao)作者動作要輕，必須在(zai)火(huo)焰周圍無菌區內打(da)開瓶口，并(bing)將瓶口轉動燒灼。操(cao)作時盡量不要談話，若打(da)噴嚏或咳嗽(sou)應(ying)轉向背(bei)面。

3、操(cao)作(zuo)時要常更換吸管(guan)(guan)(guan)，切勿一根吸管(guan)(guan)(guan)做到(dao)底。一旦(dan)發現吸管(guan)(guan)(guan)口接(jie)觸了(le)手(shou)和其他污(wu)染(ran)物品應(ying)棄去(qu)。實驗(yan)完畢及(ji)時收拾，保持實驗(yan)室(shi)清潔整(zheng)齊，zui后用消毒(du)水浸泡的(de)紗(sha)布擦臺面。

2-從物品(pin)、用(yong)品(pin)消毒滅菌(jun)著手

細胞培(pei)養所(suo)用物品清洗、消毒(du)要(yao)*，各(ge)種(zhong)溶液滅(mie)菌除(chu)菌要(yao)仔細，并在無菌試驗(yan)陰性后才能使用。操作室(shi)及剩余的(de)無菌器材(cai)要(yao)定期(qi)清潔消毒(du)滅(mie)菌。

3-防止細胞交叉污染(ran)

在進行(xing)(xing)多種細胞培養操作時(shi)，所用(yong)器(qi)具(ju)要嚴格區分，做上(shang)標記(ji)便于辨別(bie)。并按順(shun)序進行(xing)(xing)操作，避免(mian)一起進行(xing)(xing)時(shi)易發(fa)生混亂。

在進行換液或傳代操作時，注射器(qi)和滴管不要觸及細胞培養瓶瓶口，以免把細胞帶到培養液中污染其(qi)他細胞。

所有細(xi)胞一旦(dan)(dan)購置(zhi)，或從(cong)別(bie)處(chu)引入，或自(zi)己建立(li)，均(jun)應及早(zao)留種(zhong)凍存(cun)，一旦(dan)(dan)發(fa)生污(wu)染可棄之復蘇，重新培養。

二、污染的(de)清除

培養細(xi)胞(bao)一經污染(ran)，多數較難(nan)處理(li)。如果污染(ran)細(xi)胞(bao)價值不大，宜棄之；有細(xi)胞(bao)株(zhu)留存的或可購置的，可在尋(xun)找原因后*消毒操作室，復蘇或重(zhong)新購置細(xi)胞(bao)，再培養。若(ruo)污染(ran)細(xi)胞(bao)價值較大，又(you)難(nan)于重(zhong)新得到，可采取以下(xia)辦法清(qing)除。

1-使用(yong)抗生素

抗生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)對(dui)殺滅細菌(jun)(jun)較有(you)效(xiao)(xiao)。聯合(he)用(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)(yao)比單(dan)獨用(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)(yao)效(xiao)(xiao)果好(hao)。預防用(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)(yao)比污(wu)染(ran)后(hou)再(zai)用(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)(yao)效(xiao)(xiao)果好(hao)。預防用(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)(yao)一般用(yong)(yong)(yong)雙抗生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)（青霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)100u/mL加(jia)鏈霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)100μg/mL），污(wu)染(ran)后(hou)清(qing)除(chu)(chu)用(yong)(yong)(yong)藥(yao)(yao)(yao)需采用(yong)(yong)(yong)大(da)于常(chang)(chang)用(yong)(yong)(yong)量(liang)5～10倍的(de)沖洗法(fa)，于加(jia)藥(yao)(yao)(yao)后(hou)作用(yong)(yong)(yong)24～48小時(shi)，再(zai)換(huan)常(chang)(chang)規培(pei)(pei)養液。此(ci)法(fa)在污(wu)染(ran)早期可(ke)能有(you)效(xiao)(xiao)。所用(yong)(yong)(yong)抗生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)品種除(chu)(chu)青霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、鏈霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)外，還可(ke)用(yong)(yong)(yong)慶(qing)大(da)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、卡那(nei)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)、多粘菌(jun)(jun)素(su)(su)(su)(su)、四(si)環(huan)素(su)(su)(su)(su)、制(zhi)霉(mei)(mei)(mei)菌(jun)(jun)素(su)(su)(su)(su)等(deng)。常(chang)(chang)用(yong)(yong)(yong)400～800μg/mL卡那(nei)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)或(huo)200μg/mL四(si)環(huan)素(su)(su)(su)(su)處理，每隔2～3日換(huan)液1次，傳(chuan)1～2代進行(xing)治療(liao)。近年來有(you)報道(dao)，4-氟，2-羥基(ji)喹啉(lin)（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四(si)環(huan)素(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)物（BM-2）等(deng)三種抗生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)單(dan)用(yong)(yong)(yong)或(huo)合(he)用(yong)(yong)(yong)對(dui)殺滅支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)有(you)效(xiao)(xiao)。這三種抗生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)均(jun)用(yong)(yong)(yong)PBS配(pei)成250濃縮(suo)液，-20℃保存備(bei)用(yong)(yong)(yong)，使(shi)用(yong)(yong)(yong)濃度Cip為(wei)(wei)10μg/mL，BM-1為(wei)(wei)10μg/mL，BM-2為(wei)(wei)5μg/mL。使(shi)用(yong)(yong)(yong)時(shi)先吸除(chu)(chu)污(wu)染(ran)的(de)培(pei)(pei)養液，加(jia)入(ru)含BM-1的(de)RPMI1640培(pei)(pei)養液，3天后(hou)再(zai)吸除(chu)(chu)培(pei)(pei)養液，加(jia)入(ru)含BM-2的(de)RPMI1640培(pei)(pei)養液，培(pei)(pei)養4天，如(ru)此(ci)連續3個輪(lun)次，直至用(yong)(yong)(yong)33258熒光染(ran)色鏡檢證明已清(qing)除(chu)(chu)支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)后(hou)，再(zai)加(jia)正常(chang)(chang)培(pei)(pei)養液培(pei)(pei)養傳(chuan)代3-4次。

2-使用支(zhi)原體(ti)特異性血清

用(yong)5%的兔支原體(ti)(ti)免疫血(xue)清(qing)（血(xue)凝效價1:320以上）可(ke)去除支原體(ti)(ti)污染，因特(te)異(yi)抗體(ti)(ti)可(ke)抑制支原體(ti)(ti)生(sheng)長，故經抗血(xue)清(qing)處理后11天即(ji)轉為陰性，并且5個月(yue)后仍(reng)為陰性。但(dan)此(ci)法比較麻(ma)煩，不如用(yong)抗生(sheng)素方便、經濟。

3-加溫處理(li)

將污(wu)染的(de)組織培(pei)養(yang)物放(fang)在(zai)41℃培(pei)養(yang)18小(xiao)時，可殺死支原體，但(dan)對細胞(bao)(bao)有(you)不(bu)(bu)良(liang)影響(xiang)。所以(yi)在(zai)處(chu)(chu)理(li)前要進行(xing)預試驗(yan)，摸索能(neng)zui大限度殺死支原體又對細胞(bao)(bao)影響(xiang)zui小(xiao)的(de)加(jia)(jia)熱(re)時間(jian)。此(ci)法有(you)時不(bu)(bu)可靠。若先用藥(yao)物處(chu)(chu)理(li)后(hou)，再以(yi)41℃加(jia)(jia)溫處(chu)(chu)理(li)效果更佳。

4-其(qi)他方(fang)法

除了上述(shu)去除污(wu)染的方(fang)法(fa)外，還(huan)有(you)動物體內接(jie)種除菌法(fa)、巨(ju)噬細胞吞(tun)噬法(fa)、污(wu)染培(pei)養(yang)瓶中(zhong)加(jia)溴尿嘧(mi)啶再用(yong)光照射的方(fang)法(fa)及過濾法(fa)等(deng)，但均(jun)較麻煩，且效(xiao)果不確(que)定。所以一旦支原體污(wu)染，除非有(you)特別重要(yao)價(jia)值(zhi)，一般(ban)均(jun)棄之(zhi)重新培(pei)養(yang)。

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