人(ren)結腸癌(ai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)系：SW48細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SW480細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，CACO-2細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，SW620細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-8細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT/V細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HCT-116細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，LoVo細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HRT-18細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，HT-29細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)等

人宮頸癌細(xi)胞(bao)系：hela細(xi)胞(bao)，HT-3細(xi)胞(bao)，C33A細(xi)胞(bao)，SN12C細(xi)胞(bao)，SKG-IIIa細(xi)胞(bao)，Hela S3細(xi)胞(bao)，DoTc2-4510細(xi)胞(bao)，Ca Ski細(xi)胞(bao) ，ME-180細(xi)胞(bao)等

DC2.4細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株  MC38細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株，MLE-12細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，bEND.3細(xi)(xi)胞(bao)(bao) HT-22細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，HK-2細(xi)(xi)胞(bao)(bao) THP-1細(xi)(xi)胞(bao)(bao) WRO細(xi)(xi)胞(bao)(bao) FRO細(xi)(xi)胞(bao)(bao) Molt-4細(xi)(xi)胞(bao)(bao)系(xi) SH-SY-5Y細(xi)(xi)胞(bao)(bao) U87-MG細(xi)(xi)胞(bao)(bao)

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IMR-90細胞株 （細胞培養中常見的生物污染類型有7種，分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染，那么他們污染細胞的特點分別是什么呢？怎樣能夠減少污染現象的發生？）

1-細菌

細菌污(wu)染常(chang)見(jian)(jian)的(de)有(you)大腸桿菌，葡萄球菌等(deng)。細菌污(wu)染較(jiao)易發現，在普通倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)為黑色細沙狀，培(pei)(pei)養液一般會在短時(shi)間(jian)內變黃，有(you)時(shi)靜置的(de)培(pei)(pei)養液不混，稍加震蕩會有(you)很(hen)多混濁物(wu)漂起。顯微(wei)鏡(jing)下(xia)可見(jian)(jian)培(pei)(pei)養液中(zhong)有(you)大量(liang)圓球狀顆粒物(wu)漂浮，有(you)時(shi)在細胞(bao)表面(mian)及周圍有(you)大量(liang)細菌存在，細胞(bao)停(ting)止生(sheng)長(chang)并有(you)中(zhong)毒表現。

處理：①在培(pei)養液中加(jia)入相應的抗生素(su)，能夠預(yu)防絕大(da)多數的細菌污染。

2-真(zhen)菌

真菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)(ran)是(shi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培養過程中(zhong)zui常(chang)見的一(yi)種，尤其梅雨(yu)季節(jie)快(kuai)要到了，進行(xing)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培養時更易(yi)污(wu)染(ran)(ran)。污(wu)染(ran)(ran)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的多為煙曲(qu)霉、黑(hei)曲(qu)霉、毛霉菌(jun)(jun)(jun)、孢子(zi)霉、白念珠菌(jun)(jun)(jun)、酵母(mu)菌(jun)(jun)(jun)等(deng)。霉菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)(ran)后多數(shu)在培養液中(zhong)形成白色(se)或淺黃色(se)漂浮物。一(yi)般肉(rou)眼可(ke)見，較易(yi)被發現(xian)，短期內培養液多不混濁(zhuo)，倒置(zhi)顯微鏡下可(ke)見于細(xi)(xi)(xi)胞(bao)之間(jian)縱橫交錯(cuo)穿行(xing)的絲(si)狀、管狀、及樹(shu)枝狀菌(jun)(jun)(jun)絲(si)，并懸浮飄蕩(dang)在培養液中(zhong)。

很多菌(jun)絲在高倍鏡可(ke)見到有鏈狀排(pai)列的菌(jun)珠(zhu)；念珠(zhu)菌(jun)或酵母菌(jun)形(xing)態呈卵形(xing)，散在細(xi)胞周邊和細(xi)胞之間生長(chang)。鏡下(xia)看時，要將(jiang)培養(yang)瓶(ping)用酒精棉球擦干凈(jing)，以防止與(yu)瓶(ping)外尤其(qi)瓶(ping)底外面生長(chang)的菌(jun)絲相混淆。

真(zhen)菌(jun)(jun)污染后(hou)，細(xi)胞生長變慢，但zui后(hou)由于(yu)營養耗盡及(ji)毒性作用而使細(xi)胞脫落死亡。真(zhen)菌(jun)(jun)生長的(de)比較慢，不象細(xi)菌(jun)(jun)那么(me)容易被發現(xian)，但是一旦發現(xian)有(you)它的(de)存在細(xi)胞就(jiu)被污染了，也很難救活了。

3-支原體

支原體(ti)的(de)大小介于細菌和病(bing)毒之間，是一種獨立生活的(de)微生物。對熱敏感，對一般抗生素不敏感。支原體(ti)的(de)形態多(duo)變，多(duo)吸附在(zai)細胞(bao)表面(mian)和細胞(bao)之間。電鏡下(xia)觀察，中心有(you)高(gao)密度(du)的(de)密集顆粒，橫斷(duan)面(mian)與細胞(bao)微絨毛相(xiang)似。

因國內(nei)的血清(qing)大多數都沒有做支原體(ti)陰(yin)性檢測，而支原體(ti)又是牛血清(qing)中(zhong)zui常見的微生物之一。支原體(ti)污染細(xi)胞(bao)(bao)后，培(pei)養(yang)液輕微發生混濁．但細(xi)胞(bao)(bao)變化不顯著，隨著細(xi)胞(bao)(bao)的培(pei)養(yang)會慢慢死亡。

支(zhi)原體(ti)污(wu)染檢測（熒(ying)光(guang)染色(se)法）：DNA和與DNA特異性結合的熒(ying)光(guang)染料(liao)結合，使得支(zhi)原體(ti)的DNA著色(se)，然后(hou)用熒(ying)光(guang)顯微鏡觀察。鏡下(xia)支(zhi)原體(ti)為散在于細胞同圍或(huo)附于細胞膜表面的亮綠色(se)小點(dian)。

解決：

1）抗生(sheng)(sheng)素排除法：支原體污染預防比解(jie)決好。如果不小心污染后，可加入(ru)高濃度(du)抗生(sheng)(sheng)素（常(chang)(chang)規(gui)使用的(de)5倍濃度(du)）作用24-48小時，再換(huan)入(ru)常(chang)(chang)規(gui)培養液，但該法不保證(zheng)有效。推薦(jian)用量(liang)：慶大(da)霉(mei)素 200μg/ml ,四環素10μg/ml ，卡那霉(mei)素50μg/ml 。

2）加溫除(chu)菌：支原體(ti)不耐熱(re)(re)，可以對支原體(ti)污染(ran)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)熱(re)(re)處理(li)除(chu)菌。因高(gao)溫對細(xi)(xi)胞(bao)本身也會產(chan)生一定(ding)影(ying)響(xiang)，故(gu)熱(re)(re)處理(li)前(qian)需先進行預實驗，確定(ding)對細(xi)(xi)胞(bao)影(ying)響(xiang)zui小(xiao)而(er)能zui大程度的(de)殺死支原體(ti)的(de)時間(jian)。

4-黑膠蟲

黑膠蟲(chong)的存(cun)在(zai)目(mu)前尚有爭議(yi)，其(qi)在(zai)低倍下為黑色(se)點狀，高倍下可看見黑色(se)的小蟲(chong)游來游去，培養液(ye)也是不渾的，對(dui)細胞(bao)生長(chang)狀態(tai)不會有明顯影響，在(zai)細胞(bao)增殖(zhi)旺(wang)盛之后會自(zi)然(ran)消失，除更(geng)換血清(qing)外無(wu)須特殊(shu)處(chu)理。

5-原蟲

培養液可(ke)(ke)輕微渾濁，顯微鏡下(xia)那些細(xi)(xi)小的(de)點狀物(wu)數量非(fei)常多，輕微活動，細(xi)(xi)胞雖然可(ke)(ke)以生(sheng)長(chang)但繁殖(zhi)速度(du)卻明顯減慢，而(er)且(qie)細(xi)(xi)胞狀態不(bu)好(hao)，邊緣不(bu)清(qing)楚，細(xi)(xi)胞不(bu)透亮。他(ta)們(men)與細(xi)(xi)胞可(ke)(ke)共生(sheng)但會與細(xi)(xi)胞爭奪營養。這種共生(sheng)是非(fei)常普遍的(de)，但他(ta)們(men)的(de)數量小，細(xi)(xi)胞站優勢所以不(bu)會影響到細(xi)(xi)胞的(de)正常生(sheng)長(chang)，只有當他(ta)們(men)到達一(yi)定的(de)數量時就會影響到細(xi)(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)，zui終形成(cheng)惡性循環。

6-病(bing)毒

組織細胞(bao)(bao)培養過程中(zhong)(zhong)，如果沒有除去潛在(zai)的(de)病(bing)毒(du)，就會產(chan)生(sheng)病(bing)毒(du)污染。目前，從原(yuan)代(dai)猴腎細胞(bao)(bao)的(de)培養中(zhong)(zhong)已發現不少(shao)于(yu)20種血清性病(bing)毒(du)。 盡管病(bing)毒(du)污染的(de)細胞(bao)(bao)不影響原(yuan)代(dai)培養，但生(sheng)產(chan)疫(yi)苗(miao)是不安全的(de)。因(yin)此(ci)，潛在(zai)病(bing)毒(du)是細胞(bao)(bao)大量生(sheng)產(chan)和疫(yi)苗(miao)、干擾素等生(sheng)物制品制作(zuo)中(zhong)(zhong)的(de)難(nan)題(ti)。

7-非同種(zhong)細胞(bao)污染

即細(xi)(xi)胞(bao)(bao)交叉污(wu)染(ran)，由于細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)操作(zuo)時各細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株所需(xu)的(de)器材和(he)溶液沒(mei)有嚴(yan)格分開，往(wang)往(wang)會(hui)使(shi)一(yi)種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)被(bei)另一(yi)種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)污(wu)染(ran)。目前，世界(jie)上已有幾十種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)都被(bei)HeLa細(xi)(xi)胞(bao)(bao)所污(wu)染(ran)，致使(shi)許多(duo)實驗(yan)宣告無效。非(fei)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)物(wu)所造(zao)成(cheng)的(de)化學(xue)成(cheng)分的(de)污(wu)染(ran)也偶有發生，大(da)多(duo)是(shi)由于細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)所需(xu)物(wu)品清洗消毒不*而帶入一(yi)些有毒化學(xue)物(wu)質所致。

污染(ran)是細(xi)(xi)胞培養的(de)大敵，預防和避免污染(ran)是成(cheng)功培養細(xi)(xi)胞的(de)關鍵之一(yi)。危機意識要貫徹實驗(yan)的(de)始終，否則不(bu)僅浪費時間，而且浪費人力、物力，甚至造成(cheng)無法(fa)彌補的(de)損失。

（如何預防細胞培養的污染和清除這些污染物呢？）慧穎 細胞庫 技術為您解答：

一、污染(ran)的預(yu)防

預(yu)防(fang)是防(fang)止(zhi)細胞培養(yang)過程中發生污染的(de)辦法。只有預(yu)防(fang)工(gong)作做在前(qian)，才(cai)能將發生污染的(de)可能性降到zui小程度。一般預(yu)防(fang)可從以(yi)下(xia)幾方面(mian)著手(shou)：

1-從操作者做起

1操作者責任(ren)心(xin)要強(qiang)，要細心(xin)穩重，操作技術要熟練。進(jin)無菌室前要用(yong)肥皂洗(xi)手(shou)或用(yong)5%新潔(jie)爾滅浸泡5分鐘，按(an)規定穿(chuan)隔離衣。進(jin)入后(hou)關好(hao)門，坐下來盡(jin)量(liang)少走動。工作開始要先用(yong)75%酒精棉(mian)球擦手(shou)、擦瓶(ping)口和(he)燒灼瓶(ping)口。事先要嚴格檢查器材、溶(rong)液和(he)培養(yang)物，不要把污染(ran)品或未經消毒的(de)物品帶入無菌室內，更不能隨便使用(yong)，以免造成(cheng)大批污染(ran)。

2、操(cao)作者動(dong)作要輕，必須在火焰(yan)周圍無菌區內打開瓶(ping)口(kou)(kou)，并(bing)將瓶(ping)口(kou)(kou)轉動(dong)燒(shao)灼(zhuo)。操(cao)作時盡量(liang)不要談話，若(ruo)打噴嚏或咳嗽應轉向背面(mian)。

3、操作時要常更換吸管(guan)(guan)，切勿(wu)一根吸管(guan)(guan)做到底。一旦發現吸管(guan)(guan)口接觸了手和其他污染物品應棄去(qu)。實驗(yan)完(wan)畢及時收拾，保持實驗(yan)室清潔整齊(qi)，zui后用消(xiao)毒水(shui)浸泡的紗布擦臺面。

2-從物(wu)品(pin)(pin)、用品(pin)(pin)消(xiao)毒滅菌著手

細胞培(pei)養所用(yong)物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無(wu)菌試驗陰性后才能(neng)使用(yong)。操(cao)作室及(ji)剩余的無(wu)菌器(qi)材要定期清潔消毒滅菌。

3-防止細胞(bao)交(jiao)叉污染

在進(jin)行(xing)多(duo)種細胞培(pei)養操作(zuo)時，所用(yong)器具要嚴格區分，做上標記便于辨別(bie)。并按順序進(jin)行(xing)操作(zuo)，避免一起進(jin)行(xing)時易發生混亂。

在進行換液或(huo)傳代操作時，注射(she)器和滴管不要觸及細胞(bao)培養(yang)瓶(ping)(ping)瓶(ping)(ping)口，以免把細胞(bao)帶到培養(yang)液中污染其他(ta)細胞(bao)。

所(suo)有細胞一旦購置，或從(cong)別處引入(ru)，或自己建(jian)立，均應及早留(liu)種凍(dong)存(cun)，一旦發生污染可(ke)棄之復(fu)蘇，重新(xin)培(pei)養。

二(er)、污染的清除

培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)一(yi)經污染(ran)，多數較(jiao)難處(chu)理。如果污染(ran)細(xi)胞(bao)價(jia)值不(bu)大，宜棄之；有(you)細(xi)胞(bao)株留存(cun)的或(huo)可(ke)購置的，可(ke)在(zai)尋找原(yuan)因后*消毒(du)操(cao)作(zuo)室，復蘇(su)或(huo)重(zhong)新購置細(xi)胞(bao)，再培(pei)養(yang)。若污染(ran)細(xi)胞(bao)價(jia)值較(jiao)大，又難于重(zhong)新得(de)到，可(ke)采取(qu)以下辦法清除。

1-使用抗生素

抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)對(dui)殺滅(mie)(mie)細菌(jun)較有(you)效(xiao)(xiao)。聯合用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)比(bi)單獨用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)效(xiao)(xiao)果(guo)好(hao)。預(yu)(yu)防用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)比(bi)污(wu)染(ran)(ran)(ran)后(hou)(hou)再(zai)(zai)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)效(xiao)(xiao)果(guo)好(hao)。預(yu)(yu)防用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)一般用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)雙抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)（青霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)100u/mL加(jia)鏈霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)100μg/mL），污(wu)染(ran)(ran)(ran)后(hou)(hou)清除用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)藥(yao)需(xu)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)大(da)(da)于常(chang)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)量5～10倍的(de)沖(chong)洗法，于加(jia)藥(yao)后(hou)(hou)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)24～48小時，再(zai)(zai)換常(chang)規培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)。此(ci)法在(zai)污(wu)染(ran)(ran)(ran)早期可(ke)(ke)能有(you)效(xiao)(xiao)。所(suo)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)品種除青霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)、鏈霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)外，還可(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)慶(qing)大(da)(da)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)、卡那(nei)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)、多(duo)粘菌(jun)素(su)(su)(su)(su)(su)、四環素(su)(su)(su)(su)(su)、制霉(mei)(mei)(mei)菌(jun)素(su)(su)(su)(su)(su)等。常(chang)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)400～800μg/mL卡那(nei)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)(su)(su)或(huo)200μg/mL四環素(su)(su)(su)(su)(su)處理(li)，每隔2～3日換液(ye)1次(ci)，傳1～2代進行治(zhi)療。近年來(lai)有(you)報道，4-氟(fu)，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳(er)素(su)(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環素(su)(su)(su)(su)(su)衍生(sheng)(sheng)物（BM-2）等三(san)種抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)單用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)或(huo)合用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)對(dui)殺滅(mie)(mie)支原體有(you)效(xiao)(xiao)。這三(san)種抗(kang)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)(su)均用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)PBS配成250濃(nong)縮液(ye)，-20℃保存備(bei)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)，使用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)濃(nong)度(du)Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。使用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)時先吸除污(wu)染(ran)(ran)(ran)的(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)，加(jia)入含BM-1的(de)RPMI1640培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)，3天后(hou)(hou)再(zai)(zai)吸除培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)，加(jia)入含BM-2的(de)RPMI1640培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)，培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)4天，如(ru)此(ci)連續3個輪次(ci)，直至用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)33258熒(ying)光(guang)染(ran)(ran)(ran)色鏡檢證(zheng)明已清除支原體后(hou)(hou)，再(zai)(zai)加(jia)正常(chang)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)傳代3-4次(ci)。

2-使用支原體特異(yi)性血清(qing)

用5%的兔支原體免疫血(xue)清(qing)（血(xue)凝效價1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑(yi)制支原體生長(chang)，故經抗血(xue)清(qing)處理后(hou)11天即轉為陰性，并且5個月后(hou)仍為陰性。但(dan)此(ci)法比較(jiao)麻(ma)煩，不如用抗生素(su)方便、經濟。

3-加溫處理

將污染(ran)的(de)組織培養物放在(zai)41℃培養18小(xiao)時(shi)(shi)，可殺死(si)支原(yuan)體(ti)，但(dan)對(dui)細(xi)(xi)胞有(you)不良影響(xiang)(xiang)。所以(yi)在(zai)處(chu)理(li)(li)前(qian)要進行預試驗，摸(mo)索能(neng)zui大限度殺死(si)支原(yuan)體(ti)又對(dui)細(xi)(xi)胞影響(xiang)(xiang)zui小(xiao)的(de)加熱時(shi)(shi)間。此法(fa)有(you)時(shi)(shi)不可靠。若先用藥(yao)物處(chu)理(li)(li)后，再以(yi)41℃加溫處(chu)理(li)(li)效果(guo)更佳。

4-其他方法

除(chu)了上述去(qu)除(chu)污(wu)(wu)染的(de)方法(fa)(fa)外，還有(you)動(dong)物體(ti)(ti)內接種除(chu)菌法(fa)(fa)、巨噬細胞吞噬法(fa)(fa)、污(wu)(wu)染培養瓶中加溴尿(niao)嘧啶再(zai)用(yong)光照射(she)的(de)方法(fa)(fa)及過濾法(fa)(fa)等，但均(jun)(jun)較麻煩，且效果(guo)不確定。所以一旦(dan)支原(yuan)體(ti)(ti)污(wu)(wu)染，除(chu)非(fei)有(you)特別重要價(jia)值，一般均(jun)(jun)棄(qi)之(zhi)重新培養。

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