J558細胞，小鼠(shu)骨髓瘤細胞 簡介：

細胞名稱：J558細胞

中文(wen)名(ming)稱：小鼠骨髓瘤(liu)細胞

生(sheng)長狀態：貼壁生(sheng)長

來源：ATCC

J558細(xi)胞，小鼠骨髓瘤(liu)細(xi)胞 相關熱賣骨髓瘤細胞株有：

LOX細胞，人骨髓瘤細胞

NS-1細胞，小鼠骨髓瘤(liu)細胞 [ATCC: TIB-18]

IR983F細胞，大鼠骨髓(sui)瘤細胞

YB2/0[YB2-0]細(xi)胞，大鼠骨(gu)髓瘤細(xi)胞[ATCC: CRL-1581]

LOX細胞，人骨髓瘤細胞

FO細胞(bao)，小(xiao)鼠骨(gu)髓瘤細胞(bao) [ATCC: CRL-1646]

[ATCC: TIB-6]

Y3-Ag 1.2.3，大鼠(shu)骨髓(sui)瘤細胞(bao)

FO細(xi)胞(bao)，小鼠骨髓瘤細(xi)胞(bao) [ATCC: CRL-1646]

1.試劑和溶液

1）轉印緩沖液：0.025M Tris base , 0.187 M甘氨(an)酸 , 25%甲醇(chun)

2）氨(an)基黑溶(rong)液：0.1% 酸性黑10B

3）1×TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20

4）封閉液(ye)：TBST配(pei)制的5%牛奶

5）抗體稀(xi)釋液：TBST配制的5%牛奶

6）顯色系(xi)統：ECL顯色

2.實驗步(bu)驟

1電(dian)泳：將裂解液進(jin)行(xing)SDS-PAGE電(dian)泳，80v，30分(fen)鐘，120v，90分(fen)鐘；

2轉(zhuan)膜：PVDF膜在(zai)甲醇(chun)中浸泡約30秒左右，濾(lv)紙浸泡在(zai)轉(zhuan)印緩沖液預濕，半干法轉(zhuan)印到(dao)PVDF膜上，10v，150分(fen)鐘；

3染(ran)(ran)色(se)：氨基黑染(ran)(ran)色(se)5分鐘，甲醇褪去背景色(se)，觀察條帶(dai)；

4膜活化(hua)：將PVDF膜置于甲(jia)醇活化(hua)1min，用(yong)純水洗膜2次(ci)后再用(yong)TBST洗滌3次(ci)；

5封閉：將膜條(tiao)置于5%牛奶(nai)或(huo)2% BSA中，室溫混搖2h；

6一抗孵育：將待檢(jian)抗體用3%牛奶或2% BSA稀(xi)(xi)釋到合(he)適濃度(du)（參(can)照抗體說明書，根(gen)據客(ke)戶預實驗結果(guo)，稀(xi)(xi)釋度(du)上下浮動(dong)一個數量級都為正常(chang)），將膜放(fang)入(ru)對應(ying)的已(yi)稀(xi)(xi)釋待檢(jian)樣(yang)品中，置4℃混搖孵育隔夜；

7洗滌(di)：取出膜放在TBST中洗滌(di)3×5min；

8二抗孵育：將膜取出放入稀釋好的HRP標記(ji)的二抗（參照二抗說明書進行稀釋）中，室溫(wen)混(hun)搖2h；

9洗(xi)滌(di)(di)：取出膜(mo)放在(zai)TBST中(zhong)洗(xi)滌(di)(di)3×5min；

10ECL顯色：將(jiang)膜取出放入混勻的ECL顯色液中，孵(fu)育3min，將(jiang)膜取出貼在有熒光角標的膠片(pian)上(shang)，迅速用保鮮膜包好；

11曝(pu)光：把底(di)片(pian)放在暗盒中(zhong)，根據熒光強度分別(bie)對(dui)X光膠片(pian)作不同時(shi)間段(duan)的曝(pu)光，曝(pu)光結束后，將(jiang)底(di)片(pian)取(qu)出，1min顯影(ying)，30s清(qing)洗，1min定影(ying)，30s清(qing)洗，晾干(gan)；

12結果分析：用掃描(miao)儀將(jiang)曝光后的X光膠片掃描(miao)，做后續結果分析。

選擇(ze)適(shi)當的(de)(de)細(xi)胞(bao)接種濃度。一般情況下(xia)，96孔(kong)培養(yang)板(ban)的(de)(de)一內貼(tie)壁細(xi)胞(bao)長滿時(shi)約有(you)105個細(xi)胞(bao)。但由于不(bu)同(tong)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁后面積(ji)差(cha)異(yi)很(hen)大，因此，在進行MTT試驗(yan)前，要進行預實驗(yan)檢測其貼(tie)壁率(lv)、倍增(zeng)時(shi)間以(yi)及不(bu)同(tong)接種細(xi)胞(bao)數條件下(xia)的(de)(de)生長曲線，確(que)定(ding)試驗(yan)中每孔(kong)的(de)(de)接種細(xi)胞(bao)數和培養(yang)時(shi)間，以(yi)保(bao)證(zheng)培養(yang)終止致細(xi)胞(bao)過滿。這樣，才能保(bao)證(zheng)MTT結晶形成酌量與(yu)細(xi)胞(bao)數呈的(de)(de)線性(xing)關系。否(fou)則細(xi)胞(bao)數太多敏(min)感性(xing)降(jiang)低，太少觀察不(bu)到差(cha)異(yi)。

注意:細(xi)胞株(zhu)(zhu)的(de)生物等級，由(you)于(yu)有些細(xi)胞株(zhu)(zhu)及菌株(zhu)(zhu)屬于(yu)管制(zhi)品，所以從國外(wai)購貨比較麻煩。

形(xing)態(tai)學改變(bian):細(xi)胞(bao)體積明顯增大,為(wei)成熟淋巴(ba)細(xi)胞(bao)3-4倍。核膜清晰,核染色質(zhi)疏松(song)呈(cheng)網狀。核內見明顯核仁1-4個。胞(bao)漿豐富,嗜堿(jian)性(xing),有偽足(zu)樣突出。胞(bao)漿內有時可見小空(kong)泡。

細胞(bao)培養(yang)是(shi)一種無(wu)菌操作(zuo)技術，要求(qiu)工(gong)作(zuo)環境和(he)(he)條件必須保證無(wu)微生(sheng)物污(wu)染和(he)(he)不受其它有(you)害(hai)因(yin)素(su)的(de)影響。細胞(bao)培養(yang)室(shi)和(he)(he)設(she)計原(yuan)則(ze)(ze)是(shi)防止(zhi)微生(sheng)物污(wu)染和(he)(he)有(you)害(hai)因(yin)素(su)影響，要求(qiu)工(gong)作(zuo)環境清潔(jie)、空(kong)氣清新(xin)，干燥(zao)和(he)(he)無(wu)煙塵。細胞(bao)培養(yang)室(shi)的(de)設(she)計原(yuan)則(ze)(ze)一般是(shi)無(wu)菌操作(zuo)區設(she)在(zai)室(shi)內較少(shao)走動的(de)內側，常規操作(zuo)和(he)(he)封(feng)閉(bi)培養(yang)于一室(shi)，而洗刷(shua)消毒在(zai)另一室(shi)。

慧穎細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)庫 ATCC/ScienCell細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)技術(shu)|細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)基 *的ATCC細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，ATCC傳(chuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，sciencell細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，sciencell原代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)技術(shu)，原代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)，動(dong)物細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)，植(zhi)物細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)提供者。 細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)基 主要經營(ying)品(pin)牌(pai)有ATCC，ScienCell，DSMZ，ALLCELLS，DV Biologics，Stemgent等(deng)，其中(zhong)ATCC/ScienCell細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)zui為，傳(chuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，復蘇細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，第二(er)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)等(deng)，*，買的放心(xin)，做實驗也(ye)放心(xin)，歡迎訂購！

 價格\說明書\來源\特征特性

KG-1a細胞，人(ren)急性(xing)骨髓白血(xue)病細胞    25T

MV4-11細胞，人急性白血(xue)病細胞   25T

HL-60細胞，人急性早幼粒白血病細胞  25T

U937細胞，人急性早幼(you)粒白血病細胞   25T

MOLM-13細胞，人急性髓系(xi)白血病(bing)細胞  25T

MOLM-14細(xi)胞，人急(ji)性髓(sui)系白血(xue)病細(xi)胞  25T

K562細(xi)胞(bao)，人慢(man)性髓系白血病(bing)細(xi)胞(bao) 25T

HL-60細胞，人急性早幼(you)粒白血(xue)病細胞  25T

CCRF-CEM細胞，人急性淋(lin)巴細胞白(bai)血(xue)病T淋(lin)巴細胞 25T

HS 505.T細(xi)胞，慢性淋巴細(xi)胞白血病（CLL）細(xi)胞  25T

invitrogen PHC9484    LIF Recombinant Human Protein   10 µg

invitrogen 13256029 ;  bFGF Recombinant Human Protein  10 µg

invitrogen PHG0311    EGF Recombinant Human Protein   100 µg

invitrogen PHG0313    EGF Recombinant Human Protein   1 mg

invitrogen PHG0314    EGF Recombinant Human Protein   10 µ;g

invitrogen PHG0315    EGF Recombinant Human Protein   25 µg

invitrogen 17504044   B-27® Supplement (50X), serum free 10 mL

invitrogen 12585014   Insulin, human recombinant, zinc solution 5 mL

選擇(ze)慧(hui)穎生物的理由：

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所有細(xi)胞(bao)入(ru)庫之(zhi)前均經過嚴格的細(xi)胞(bao)質(zhi)量檢測(ce)和鑒(jian)定(ding)

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確保細胞到每(mei)一位用(yong)戶(hu)手里(li)都是(shi)狀(zhuang)態