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細胞(bao)簡介：
生長特性(xing)： | 貼壁生長(chang)
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細胞(bao)來源： | 從(cong)ATCC/中科(ke)院/協和醫院等(deng)地(di)引進 |
培養條件(jian)： | 培養(yang)基(ji)：DMEM-H培養(yang)基+10%FBS（推薦(jian)HAKATA特(te)級胎牛血(xue)清 貨號：HS-FBS-50） 氣(qi)相：空氣(qi)95%，二(er)氧化碳5% 溫度：37℃ |
培養(yang)： | 貼壁(bi)細胞 1.用(yong)75%酒(jiu)精噴灑(sa)整個(ge)瓶消毒，將其平躺(tang)置(zhi)于培(pei)養箱中進(jin)行2-3小時的緩沖，.然后置于無菌(jun)操作臺，打開(kai)瓶(ping)口，將其中的(de)培(pei)養液去掉(diao)，再往其中加入(ru)5-6mL新鮮(xian)培(pei)養基(ji)并置于細胞培(pei)養箱中培(pei)養，根(gen)據細胞生長狀況及培(pei)養基(ji)顏色變化對其進(jin)行換(huan)液以及傳代； 2.待細胞長(chang)滿瓶底面(mian)積80%-90%，需要對其進行傳代，*傳代比例為(wei)1:2。 3傳代步驟：將(jiang)0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yu)熱，倒掉培養瓶中(zhong)的培養基，往培養瓶中(zhong)加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄(qi)去。往瓶中加1ml預熱(re)好的(de)胰酶，置于37°孵育(yu)消化(hua)（*消化(hua)需時常取出置(zhi)于顯(xian)微鏡(jing)下觀察，以顯(xian)微鏡(jing)下細胞(bao)觸(chu)角回(hui)收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為zui佳消化(hua)時間，記錄(lu)zui佳消(xiao)(xiao)化時間，以便于下次消(xiao)(xiao)化），消(xiao)化好(hao)后加入1ml*培養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。用移液槍輕輕吹(chui)打瓶壁上的(de)細(xi)胞，使(shi)之(zhi)*脫落，然后(hou)收集細(xi)胞懸液，1200rpm離心3min，棄(qi)上清，加入*培養基重懸細(xi)胞，進行傳代(dai)。 懸(xuan)浮細(xi)胞 1.用(yong)75%酒精噴灑整個瓶消(xiao)毒(du)，然后置(zhi)于無菌操作臺，打(da)(da)開瓶口，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)吹打(da)(da)后，將其中的細(xi)胞懸液轉(zhuan)移到(dao)離心管中，然后1200rpm離(li)心3min，去上清； 2.將離(li)心好的細胞轉移至T-25瓶中(zhong)，并(bing)加入5-6mL新鮮培(pei)(pei)養基(ji)，然后將(jiang)其置于細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養箱中培(pei)(pei)養，根(gen)據細(xi)胞(bao)生長(chang)狀況及培(pei)(pei)養基(ji)顏色變化對其進行換液(ye)（離(li)心后去舊(jiu)液(ye)，加入(ru)新鮮培(pei)(pei)養基(ji)）； 3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時，對其進行傳(chuan)代，*傳(chuan)代比例為1:2（離心后平(ping)均分成(cheng)兩瓶培養）。
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細胞總(zong)數： | 1~3*106 |
傳(chuan)代周期： | 2-3天(tian) |
傳代(dai)比例： | 1:2~1:4 |
換液頻率： | 2-3天(tian) |
凍存液： | 90%FBS+10%DMSO |
注意事項：
1 收(shou)到(dao)細(xi)胞后首先觀察T-25瓶是(shi)否有損(sun)壞、漏液、渾濁等現象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述(shu)現象(xiang)發生請及時和我們聯系(xi)。
2 瓶中運輸的培養(yang)液不能重復(fu)使用，請換新鮮(xian)培養(yang)液培養(yang)
3 對于(yu)貼(tie)壁細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，若大部(bu)分(fen)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)漂(piao)(piao)浮(fu)，置(zhi)于(yu)培養箱隔(ge)夜觀察，大部(bu)分(fen)漂(piao)(piao)浮(fu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)重(zhong)新(xin)貼(tie)壁，表明(ming)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)活(huo)力正常，繼續培養，剩余漂(piao)(piao)浮(fu)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)可以去掉；若大部(bu)分(fen)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)仍然不貼(tie)壁，將漂(piao)(piao)浮(fu)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)離(li)心收集(ji)，用臺盼藍(lan)染色鑒定細胞活力，并與本(ben)公司銷(xiao)售人員及時聯系。
4 建(jian)議客戶收到細(xi)(xi)胞(bao)后(hou)不同倍(bei)鏡各拍幾(ji)張細(xi)(xi)胞(bao)的(de)照片，記錄細(xi)(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，如細(xi)(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)出現問(wen)題請于72h內與本(ben)公(gong)司銷售聯系，以(yi)便于更好的幫(bang)您解決(jue)問(wen)題(ti)，超過(guo)時間我段，本(ben)公(gong)司則默認細胞狀態(tai)良好，不免費對后(hou)續細胞狀態(tai)問(wen)題(ti)進行售后(hou)。
5 因細(xi)胞產品的特殊性，如客(ke)戶對本公司細(xi)胞質量存有疑問(wen)，請于(yu)收到細(xi)胞后一(yi)個(ge)月內與本公司(si)銷售聯(lian)系，超過時間段，本公司(si)則默認細胞(bao)質量優(you)良(liang)，不承(cheng)擔因細胞(bao)產生的任(ren)何(he)責任(ren)。
HMVEC細胞，人肺微血管內皮細胞 相(xiang)關產品：
品牌 貨號 名(ming)稱(cheng) 規格
invitrogen 11668027 lipofectamine 2000 reagent 0.75 ml 脂質體2000 0.75 ml
invitrogen 11668019 lipofectamine 2000 reagent 1.5 ml 脂(zhi)質體2000 1.5 ml
invitrogen L3000015 lipofectamine 3000 1.5ml 脂質體3000 1.5 ml
invitrogen L3000008 lipofectamine 3000 0.75ml 脂質體3000 0.75 ml
invitrogen 13778150 lipofectamine rnaimax 1.5ml aliquot RNAiMax 1.5 ml
invitrogen 13778075 lipofectamine rnaimax 0.75ml aliquot RNAiMax 0.75 ml
invitrogen 15596026 trizol reagent 100ml trizol 100ml
invitrogen 15596018 trizol reagent 200ml trizol 200ml
invitrogen 10296028 trizol ls reagent trizol LS 200ml
invitrogen 10296010 trizol ls reagent trizol LS 100ml
invitrogen 11789020 bp clonase ii enzyme mix BP酶 20 reactions
invitrogen 11791020 lr clonase ii enzyme mix LR酶 20 reactions
invitrogen 18064014 superscript ii 反轉(zhuan)錄酶II 10000 un
invitrogen 18080044 superscript iii rev transcript ; 反轉(zhuan)錄酶III 10,000 un
invitrogen 18080051 superscript iii 1st strand 反轉錄酶III試劑盒 50 reactions
invitrogen 10777019 rnaseout recomb.rnase inhib. RNase OUT 5000 units
Gibco 17504044 ; b 27 supplement B27 10ml
Gibco 12587010 b 27 supplement w/o vit a (50x B27（不(bu)含維生(sheng)素A） 10ml
Gibco 17502048 n2 supplement 5ml N2 5ml
invitrogen 18374041 5' race reagent assy ver. 2.0 5’RACE 10 rxn
Gibco 25200056 0.25% trypsin edta (1x) phenol red 胰酶(mei) 100 ml
Gibco 25200072 0.25% trypsin edta (1x) phenol red 胰酶 500 ml
Gibco 15140122 penicillin streptomycin sol 100ml 雙抗 100 ml
invitrogen 10966034 platinum taq dna polymerase platinum taq DNA聚合酶 600 reactions
invitrogen 18418012 oligo(dt)12 18 primer oligo(dt)12 18 primer 25 ug
invitrogen 12033015 electromax dh10b t1 cells electromax dh10b t1 cells 0.5 ml (5 x 0.1 ml)
invitrogen s7567 SYBR GREEN I NUCLEIC A 1 ML SYBE Green I核酸凝(ning)膠染料 1ml
invitrogen 18047019 deoxyribonuclease i DNase I 20,000 un
Gibco 11811023 geneticin 1g G418 1g
Gibco 11811031 geneticin 5g G418 5g
Gibco 17100017 collagenase type i 1g 膠原酶(mei)I 1g
Gibco 17101015 collagenase type ii 1g 膠原酶II 1g
Gibco 17104019 collagenase type v 1g 膠原酶V 1g
Gibco 41500034 MEM培養基(ji) 10*1L
Gibco 12400024 DMEM/F12培養基 10*1L
Gibco 12200036 IMCM培(pei)養基(ji) 10*1L
BIOWEST G-10 西班(ban)牙(ya)瓊脂糖 100g
Roche 潮霉素B 1g/20ml
merck 蛋白酶(mei)K 100mg
東仁化學 cck8-50 CCK8 500T
sigma D2650-100ML 二甲基亞砜dmso 100ml
Thermo K1622 RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit 100 reactions
相關(guan)主要細(xi)胞為：C666-1細(xi)胞，MREpic細(xi)胞株，HBMEC細(xi)胞 ，KGN細(xi)胞，IOSE80細(xi)胞，HUVEC細(xi)胞，HAEC細(xi)胞等，細(xi)胞活力好，狀態(tai)*，密度適宜(yi)，售后齊全，跟蹤及(ji)時到(dao)位！
