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Calu-3細胞|STR入庫
產品名稱:Calu-3細胞
是否STR:是
供(gong)應公司:慧穎生(sheng)物
復(fu)蘇周期(qi):1-2周
您(nin)是否(fou)在關心各種細(xi)胞(bao)(bao)系(xi)(xi)特異性鑒(jian)定方法(fa),是否(fou)被細(xi)菌(jun),病毒,支(zhi)(zhi)原體(ti)污染(ran),購買慧穎生物細(xi)胞(bao)(bao)株細(xi)胞(bao)(bao)系(xi)(xi)值(zhi)得放心,大部分(fen)細(xi)胞(bao)(bao)經過STR鑒(jian)定,支(zhi)(zhi)原體(ti),細(xi)菌(jun),病毒檢測后入庫。!
分離培養法
分(fen)離培(pei)(pei)養(yang)法(fa)是支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體檢(jian)測(ce)的(de)(de)(de)金標方法(fa),其檢(jian)測(ce)精確度zui高。這種方法(fa)是從(cong)可疑的(de)(de)(de)細胞培(pei)(pei)養(yang)體系(xi)中取樣,并接種到zui適宜支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體生長的(de)(de)(de)瓊脂平板上。如果(guo)樣本(ben)(ben)中含有(you)支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體,它們就會在這種瓊脂平板上*生長,zui終形成明顯可見的(de)(de)(de)特征(zheng)性菌落。分(fen)離培(pei)(pei)養(yang)法(fa)基(ji)本(ben)(ben)不會出現假陰性結(jie)果(guo),因此被譽為支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體檢(jian)測(ce)金標準。不過分(fen)離培(pei)(pei)養(yang)法(fa)也存在兩(liang)個弊端(duan),一是檢(jian)測(ce)時間太長,支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體要(yao)長出明顯克隆至少需(xu)要(yao)4周時間。二是盡管可以(yi)檢(jian)測(ce)絕大多數支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體種類,分(fen)離培(pei)(pei)養(yang)法(fa)也有(you)力所不及(ji)的(de)(de)(de)時候,例如支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體M. hyorhinis。
DNA檢(jian)測(ce)
DNA檢測(ce)(ce)需要(yao)將可疑樣品(pin)與指示(shi)細(xi)胞共同(tong)培(pei)養,因(yin)此(ci)一般(ban)需要(yao)幾(ji)天時(shi)間。DNA檢測(ce)(ce)所(suo)用的指示(shi)細(xi)胞通常是細(xi)胞質區域較大(da)的Vero細(xi)胞,如果原(yuan)樣本中含有支原(yuan)體(ti),那(nei)么(me)當(dang)細(xi)胞DNA被(bei)熒(ying)光(guang)染(ran)料(liao)(如Hoechst染(ran)料(liao))染(ran)色時(shi),就(jiu)可以(yi)在(zai)指示(shi)細(xi)胞的核周圍觀察到熒(ying)光(guang)斑點或熒(ying)光(guang)顆粒。分(fen)離培(pei)養法(fa)用來(lai)檢測(ce)(ce)支原(yuan)體(ti)M. hyorhinis菌株并不可靠,而DNA法(fa)可以(yi)準確的將其檢測(ce)(ce)出(chu)來(lai)。
PCR法
PCR法也(ye)可(ke)以檢測(ce)(ce)M. hyorhinis菌株,PCR法檢測(ce)(ce)支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體只需幾(ji)個小時,是zui快但(dan)也(ye)是zui不(bu)靈敏的支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體檢測(ce)(ce)方(fang)法。該方(fang)法采用(yong)針(zhen)對支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體DNA的引(yin)(yin)物(wu)用(yong)PCR檢測(ce)(ce)可(ke)疑樣本,其中(zhong)PCR引(yin)(yin)物(wu)通(tong)常針(zhen)對支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體的16S rRNA基因(yin)。在(zai)凝膠電泳(yong)過程(cheng)中(zhong),支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體DNA會顯示為特異性條帶,以此指示支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體的存在(zai)。PCR法可(ke)以檢測(ce)(ce)大(da)多數(shu)支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體,但(dan)謹慎起見同(tong)時使用(yong)另一(yi)種檢測(ce)(ce)方(fang)法來進(jin)行(xing)驗證。
酶(mei)學檢測和ELISA
此外,也還(huan)存在一些(xie)其他支(zhi)原體檢(jian)測方法。例如酶(mei)學(xue)檢(jian)測是將可(ke)疑樣(yang)本添加到特定底物中,在這一體系內支(zhi)原體的(de)酶(mei)可(ke)以(yi)將ADP轉化為(wei)ATP,隨(sui)后能利用(yong)ATP發光的(de)luciferase酶(mei)就可(ke)以(yi)指示支(zhi)原體的(de)存在。ELISA也能用(yong)于支(zhi)原體檢(jian)測,以(yi)ELISA法為(wei)基(ji)礎的(de)支(zhi)原體檢(jian)測一般使用(yong)針對支(zhi)原體16S rRNA基(ji)因的(de)帶標記探針或抗體,來檢(jian)測培養物中是否含(han)有支(zhi)原體。
定期檢測
支(zhi)原(yuan)體感(gan)染會使(shi)培(pei)養細胞慢慢枯萎,因此(ci)對(dui)培(pei)養細胞定期進行支(zhi)原(yuan)體檢測(ce)非常重要。一般來說(shuo)每1至3個月就應該進行一次(ci)支(zhi)原(yuan)體檢測(ce)。將定期支(zhi)原(yuan)體檢測(ce)常規化堅持下去(qu),是細胞培(pei)養實驗室應對(dui)支(zhi)原(yuan)體感(gan)染的關鍵。
Calu-3細胞|STR入庫
出庫公司 細胞(bao)代號 細胞名稱(cheng) 備注
慧穎生物(wu) siha 人宮頸癌(ai)細(xi)胞 STR
慧穎生物 MCF-7 人乳腺癌細(xi)胞 STR
慧穎生物 Hela 人(ren)宮頸癌細胞 STR
慧穎生物 HCT116 人的結腸癌細胞 STR
慧穎生物(wu) Hep G2 人肝癌細胞(bao) STR
慧穎生(sheng)物 NCI-H1437 人肺癌(ai)細胞 STR
慧穎生物 DU 145 人前列腺癌細(xi)胞 STR
慧穎生物 HT1080 人(ren)纖維肉瘤(liu)細胞 STR
慧穎生物 T24 人膀胱移行細胞(bao)癌細胞(bao) STR
慧穎生物 T47D 人乳腺管癌(ai)細胞 STR
慧穎生物 5637 人膀胱癌(ai)細胞 STR
慧穎(ying)生物 U251 人膠質瘤細胞 STR
慧穎生物 PANC-1 人胰腺癌細(xi)胞 STR
預防支原體(ti)污染的建議:
培養工作(zuo)中,主(zhu)要從(cong)以下(xia)幾個方面來(lai)預防支原體的污染(ran):
控(kong)制環(huan)境污染(ran);
嚴格實驗操作;
細胞培(pei)養基和(he)器材要保(bao)證(zheng)無菌;
在(zai)細胞培養基中(zhong)加入適量(liang)的抗(kang)生素(su)。
支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)污(wu)染細胞(bao)后,特(te)別是(shi)重要(yao)的細胞(bao)株,有(you)必(bi)要(yao)清除支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti),常(chang)用方(fang)法有(you)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)處理、抗(kang)(kang)血清處理、抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)加抗(kang)(kang)血清和(he)補體(ti)(ti)聯(lian)合處理。支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)zui突出的結構特(te)征(zheng)是(shi)沒(mei)有(you)細胞(bao)壁(bi),一般來(lai)講,對作用于細胞(bao)壁(bi)生(sheng)物(wu)(wu)合成(cheng)的抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su),如 -內酰(xian)胺類(lei)、萬古(gu)霉素(su)(su)(su)等*不敏感;對多(duo)粘菌素(su)(su)(su)(polymycin)、利(li)福平、磺(huang)胺藥(yao)物(wu)(wu)普(pu)遍耐藥(yao)。對支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)zui有(you)抑制活性(xing)及常(chang)用于支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)感染治(zhi)療的抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)是(shi)四環(huan)素(su)(su)(su)類(lei)、大環(huan)內酯類(lei)及一些氟喹諾酮;其他類(lei)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)如氨基糖苷類(lei)、氯霉素(su)(su)(su)對支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)有(you)較小抑制作用,所以常(chang)不用來(lai)作為(wei)支(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)感染的化學治(zhi)療劑(ji)。
支原(yuan)體污染在細(xi)胞培養中實際上是(shi)比較常見的, 據資料(liao), 可(ke)達30%甚至更高. 支原(yuan)體污染時(shi)(shi)(shi)細(xi)胞表現為長得不(bu)好,也不(bu)死亡, 同時(shi)(shi)(shi), 培養基又是(shi)清亮的. 時(shi)(shi)(shi)間長達一周也沒(mei)有(you)什么變化. 這時(shi)(shi)(shi)基本(ben)上可(ke)以判斷出是(shi)支原(yuan)體污染了, 愿(yuan)意(yi)檢測(ce)就檢測(ce)一下,不(bu)愿(yuan)意(yi)直(zhi)接用清除(chu)試劑處理吧.
避免(mian)細(xi)胞污染,可以從預防著手,超(chao)凈(jing)工作(zuo)臺(tai)物品放置(zhi)要合(he)理、進入細(xi)胞房要換(huan)鞋和穿實驗服、實驗員戴手套(tao)后(hou)要用酒精等(deng)消毒、避免(mian)細(xi)胞交叉污染等(deng)等(deng)。