慧穎提供CAL-51細胞CAL-51細胞，中文名稱：人乳腺癌細胞，來源：美國DSMZ，活力好，狀態好，復蘇周期1-2周，*！

General information

Cell line:  CAL-51細胞

Species:  human (Homo sapiens)

Cell type:  breast carcinoma

Origin:  established from the pleural effusion metastasis of a 45-year-old woman with

progressive breast adenocarcinoma (after radio-, chemotherapy and surgery) in

1985; rare example of tumor cell line with normal karyotype

Reference(s):  14563

Biosafety level:  1

Permissions and A

restrictions:

Cell Culture Data

Morphology:  epithelial-like adherent cells growing in monolayers; the culture contains

usually a large amount of cell debris; image; image

Medium:  80% Dulbecco's MEM (4.5 g/L glucose) + 20% h.i. FBS

Subculture:  split culture 1:2 once or twice a week using trypsin/EDTA before cells reach

complete confluency; seed out at ca. 3 x 10 6 cells/175 cm 2

Incubation:  at 37 °C with 10% CO2

Doubling time:  >60 hours

Harvest:  cell harvest of ca. 15-20 x 10 6 cells/80 cm 2

Storage:  frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 2.5 x10 6 cells/ampoule

Scientific Data

Mycoplasma:  negative in DAPI, microbiological culture, RNA hybridization assays

Immunology:  cytokeratin  +,  cytokeratin-7  -,  cytokeratin-8  +,  cytokeratin-17  -,

cytokeratin-18 +, cytokeratin-19 +, desmin -, endothel -, EpCAM +, GFAP -,

neurofilament -, vimentin +

Fingerprint:  multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile

Species:  confirmed as human with IEF of AST, LDH, NP

Cytogenetics:  human near-diploid karyotype with 28% tetraploidy - 46<2n>XX, no

consistent abnormality detected - rare example of tumor cell line with normal

karyotype - resembles published karyotype

Viruses:  ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -,

HIV -, HTLV-I/II -, SMRV -

CAL-51細胞CAL-51細胞培養(yang)步驟(zou)：

1）復蘇細(xi)(xi)胞(bao)：將(jiang)含(han)有(you)1mL細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存管在(zai)(zai)37℃水浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)入(ru)5mL培(pei)養(yang)(yang)(yang)基混(hun)合均勻。在(zai)(zai)1000RPM條件下離心5分鐘，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加(jia)4-6mL*培(pei)養(yang)(yang)(yang)基后(hou)吹勻。然后(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)(yang)(yang)過夜（或將(jiang)細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)6cm皿中），培(pei)養(yang)(yang)(yang)過夜。第二天換液(ye)并檢查細(xi)(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2）細胞傳代(dai)：如果(guo)細胞密度達80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培養。

1、對于(yu)貼壁細(xi)胞，傳代可參考以下(xia)方法：

1. 棄(qi)去培養上清，用不含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消(xiao)(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于(yu)培(pei)(pei)(pei)養瓶中，置于(yu)37℃培(pei)(pei)(pei)養箱中消(xiao)(xiao)化(hua)1-2min，然(ran)后在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)消(xiao)(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)并脫落，迅(xun)速拿回(hui)操作臺，輕敲幾下(xia)培(pei)(pei)(pei)養瓶后加5ml以(yi)上含10%血(xue)清的*培(pei)(pei)(pei)養基終止消(xiao)(xiao)化(hua)。

3.輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞，*脫落后吸出，在1000RPM條(tiao)件下離心8-10分鐘，棄去上清液(ye)(ye)，補加1-2mL培養液(ye)(ye)后吹勻。

4. 按(an)5-6ml/瓶補加(jia)培養液，將細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或(huo)者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小(xiao)管細(xi)胞，收到細(xi)胞后(hou)，用(yong)75%酒精(jing)噴(pen)灑(sa)整個(ge)管子消毒后(hou)放到超(chao)(chao)凈臺或(huo)(huo)安(an)全柜內，嚴(yan)格無菌操作；將(jiang)小(xiao)管細(xi)胞轉(zhuan)移至T25培(pei)養(yang)瓶或(huo)(huo)6cm培(pei)養(yang)皿(min)，加入(ru)5ml左右*培(pei)養(yang)基混勻，放入(ru)培(pei)養(yang)箱過(guo)夜(ye)培(pei)養(yang)后(hou)查看細(xi)胞密度(du)(du)：若密度(du)(du)未超(chao)(chao)過(guo)80%，換液繼(ji)續培(pei)養(yang)，視(shi)情況(kuang)傳代或(huo)(huo)者凍(dong)存(cun)。若密度(du)(du)超(chao)(chao)過(guo)80%，可(ke)直接進行傳代（方法同(tong)上(shang)）。

2、對于懸浮細(xi)胞(bao)，傳代可(ke)參考(kao)以下方法：

方法(fa)一：收集(ji)細胞(bao)，1000RPM條件下離心(xin)8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培(pei)養(yang)液后吹(chui)勻，將(jiang)細胞(bao)懸液按1：2到(dao)1：5的(de)(de)比例(li)分到(dao)新的(de)(de)含8ml培(pei)養(yang)基的(de)(de)新皿中或者(zhe)瓶中。

方(fang)法二(er)：可選擇半數換液(ye)(ye)方(fang)式，棄去半數培養基后，將(jiang)剩余(yu)細胞懸起，將(jiang)細胞懸液(ye)(ye)按1：2到1：3的(de)比例分到新的(de)含8ml培養基的(de)新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)。

3）細(xi)(xi)胞凍(dong)存：待細(xi)(xi)胞生(sheng)長狀態良好時(shi)，可進行(xing)細(xi)(xi)胞凍(dong)存。貼(tie)壁細(xi)(xi)胞凍(dong)存時(shi)，棄去(qu)(qu)培(pei)養基后(hou)加入(ru)少(shao)量胰(yi)酶，細(xi)(xi)胞變(bian)圓(yuan)脫落后(hou)，進行(xing)離(li)心(xin)收集，1000RPM條件下離(li)心(xin)8-10分鐘，去(qu)(qu)除上清，按(an)凍(dong)存數量加入(ru)血清及DMSO，凍(dong)存比(bi)例(li)為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收(shou)到(dao)2ml小(xiao)管(guan)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，收(shou)到(dao)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)后(hou)，用75%酒精噴灑整個管(guan)子消毒后(hou)放到(dao)超(chao)凈臺或安(an)全柜內(nei)，嚴(yan)格無菌操(cao)作；將小(xiao)管(guan)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)轉移(yi)至T25培(pei)養(yang)瓶或6cm培(pei)養(yang)皿，加入5ml左右*培(pei)養(yang)基混勻，放入培(pei)養(yang)箱過(guo)夜(ye)培(pei)養(yang)后(hou)查看(kan)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)密度：若密度未(wei)超(chao)過(guo)80%，換液繼續培(pei)養(yang)，視情況傳代(dai)(dai)或者凍存。若密度超(chao)過(guo)80%，可直接進行傳代(dai)(dai)（方法同上）。

慧穎生物是(shi)(shi)一(yi)家專業從(cong)事(shi)細(xi)胞培養(yang)相關產品的(de)公(gong)司，擁有(you)獨立(li)細(xi)胞房（可隨時約定參觀），供(gong)應胎牛血清，無血清細(xi)胞凍(dong)存液，無血清培養(yang)基，常規(gui)培養(yang)基，胰酶，雙抗，*培養(yang)基，STR鑒(jian)定細(xi)胞，感受態細(xi)胞等，專業，專注，性價(jia)比高，是(shi)(shi)您Shou選之家。