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慧穎生物提供優質血(xue)清,為實驗助力!
Gemini胎牛血清100-500
把細胞養(yang)好的(de)三個關(guan)鍵要素是:良好的(de)細胞來源,正確(que)的(de)實驗操作,以及合適的(de)培養(yang)體系(xi)。其(qi)中“合適(shi)的培養體系”就是要(yao)創造適(shi)合細胞(bao)(bao)生長(chang)的環境(jing),給(gei)細胞(bao)(bao)建(jian)立(li)一(yi)個(ge)滿意的“家”,而(er)胎牛血清就好比于這(zhe)個(ge)家的裝(zhuang)修(xiu),可以提高細胞(bao)(bao)的居住(zhu)環境(jing)和舒適(shi)性(xing),讓細胞(bao)(bao)更好更快地(di)生長(chang)
當然,胎牛血清并不是完美的,它除了(le)可為細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)提供生長(chang)所(suo)必須(xu)的蛋白、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)因子、激(ji)素和微量元素等多種營養(yang)物(wu)質,同(tong)時也含有(you)內毒(du)素、補體(ti)、抗體(ti)等對(dui)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長(chang)有(you)危害的成(cheng)分,若(ruo)選擇不當,不合適(shi)的FBS會嚴重影響細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的生長(chang)狀態甚至導(dao)致細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)死亡。因此,FBS既是讓細胞快樂成長的*營養物,又是可能導致細胞死亡的“定時の炸的啊彈”!辛(xin)苦養起來(lai)的細胞可(ke)能因(yin)為(wei)FBS用錯(cuo)而一切歸(gui)零……
近年來無血清培養基和非動物來源的培養基越來越受到關注,但目前大部分細胞還無法適用這些培養基,并且存在費用較高和細胞生長較緩慢的缺點,因此,含有FBS的*培養基仍然是目前主流的細胞培養體系。
那么(me),應(ying)如何為(wei)你的細胞選購(gou)(gou)FBS呢(ni)?選購(gou)(gou)FBS應(ying)考慮哪些標準(zhun)?
1.產品檢測
每款FBS在生(sheng)產上市之前,必須經過嚴格的質控(kong)檢測。
質(zhi)控環節*,以(yi)確(que)保(bao)上市的血(xue)清(qing)符合規定(ding)合乎規格,而(er)血(xue)清(qing)產品分析證書(COA)就是FBS質(zhi)控的重要(yao)體現。在COA中,常(chang)規的檢測指標包括內毒(du)素、總蛋(dan)白、細菌、病毒(du)等,例如我(wo)國藥典規定(ding),FBS中內毒(du)素含(han)量應≤10EU/mL,另外(wai)總蛋(dan)白為30-50mg/mL、血(xue)紅蛋(dan)白檢測不(bu)高于30mg/dL。
2. 可追溯性
目(mu)前(qian)市面上存在較多(duo)以假亂真的FBS產品,科研(yan)工作者對血(xue)清的真實產地、來源難以鑒別。
血清(qing)行業(ye)協(xie)會(ISIA)實施了供應(ying)鏈可(ke)追(zhui)溯性的(de)行業(ye)標準,以確(que)保FBS的(de)質量和安全性。
例(li)如,FBS供(gong)應商是否保留原產地的可追(zhui)(zhui)溯(su)記錄?是否持(chi)有血清生(sheng)產各(ge)階(jie)段處理、運輸和商業交(jiao)易的文件?這些(xie)都是判斷FBS可追(zhui)(zhui)溯(su)性需要考慮的因素。
3. 生長驗證(zheng)
我們使用FBS目的(de)是為了讓細胞(bao)(bao)更真(zhen)(zhen)實(shi)、健康地生長。在確保了FBS的(de)來源真(zhen)(zhen)實(shi)性、安全可靠(kao)性后(hou),下一步(bu)就(jiu)要(yao)對(dui)FBS的(de)質量,即(ji)培養細胞(bao)(bao)的(de)效果進行(xing)鑒定(ding)(ding)了,而這也(ye)是決(jue)定(ding)(ding)細胞(bao)(bao)能否養好的(de)關鍵。
在細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)過程,質(zhi)量(liang)粗糙(cao)的(de)FBS可能會導致細(xi)(xi)(xi)胞(bao)出現生長(chang)速度緩慢(man)、不(bu)貼壁、容(rong)易老化等現象,從而(er)導致實驗(yan)受(shou)阻。經過質(zhi)量(liang)驗(yan)證(zheng)的(de)FBS,則(ze)可以十分(fen)確定(ding)這款FBS對(dui)哪些細(xi)(xi)(xi)胞(bao)具有良好(hao)的(de)培(pei)養(yang)效果(guo),進而(er)判斷其能否(fou)把自己(ji)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)養(yang)好(hao)。對(dui)于質(zhi)量(liang)優(you)質(zhi)的(de)FBS,通常采用血(xue)清(qing)敏感性細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(如(ru)干細(xi)(xi)(xi)胞(bao))來進行培(pei)養(yang)驗(yan)證(zheng),若培(pei)養(yang)效果(guo)良好(hao),則(ze)其他(ta)常規細(xi)(xi)(xi)胞(bao)系的(de)培(pei)養(yang)就更不(bu)在話下(xia)。
4. 穩定(ding)性
FBS作為其他行業的(de)(de)(de)副(fu)產品,其生產在本質上會受到天氣、食物供應、經濟條(tiao)件和牛群(qun)規模及疫情(qing)等(deng)各種因素的(de)(de)(de)影響,導致血清的(de)(de)(de)供應可能出現貨源、價格及批次間的(de)(de)(de)不(bu)穩定性,從(cong)而(er)造成(cheng)實驗(yan)的(de)(de)(de)不(bu)順甚(shen)至實驗(yan)失(shi)敗。在過(guo)去,國內外(wai)已(yi)有多個實驗(yan)室(shi)出現過(guo)因血清批間差(cha)異大(da)而(er)導致實驗(yan)結果無法重復的(de)(de)(de)情(qing)況,浪費了巨大(da)的(de)(de)(de)時間和金錢成(cheng)本。
因此,找(zhao)到(dao)穩定(ding)提供同批(pi)次FBS的(de)供應(ying)商,對于確保(bao)自(zi)己(ji)細胞實驗結果的(de)真實性和可重(zhong)復(fu)性具有重(zhong)要意義,而且(qie)花在(zai)重(zhong)復(fu)實驗或檢驗新批(pi)次上的(de)時(shi)間將大(da)大(da)減少。
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實驗室操作(zuo)中(zhong)要注意及(ji)處(chu)理方法:
1. 血(xue)(xue)清保存: 建(jian)(jian)議血(xue)(xue)清應(ying)保存在(zai)-5℃至(zhi)-2O℃。然而(er),若(ruo)存放于(yu)4℃時,請勿超過一(yi)個月(yue)。若(ruo)您一(yi)次無法用(yong)完一(yi)瓶,建(jian)(jian)議您無菌(jun)分裝(zhuang)血(xue)(xue)清至(zhi)恰當的滅菌(jun)容器內,再放回冷凍(dong)。
2. 解(jie)(jie)凍血(xue)清(qing)的方法: 建議(yi)您將血(xue)清(qing)從(cong)冷凍箱(xiang)取(qu)出后,先(xian)置于2~8℃冰(bing)箱(xiang)使(shi)之融(rong)解(jie)(jie),然后在室溫下使(shi)之全融(rong)。但必須(xu)注意的是,融(rong)解(jie)(jie)過程中必須(xu)規則地搖晃(huang)均勻(yun)。
3. 血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
血清中沉淀物的出現有許多種原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
5. Gemini血清有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保血清的質量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?
胎牛血清沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。
7. 如何避免沉淀物的產生?
解凍Gemini血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。
請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多