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ST30-3302德國PAN優等胎牛血清
胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS):是采自5-8個(ge)(ge)月胎(tai)(tai)齡(ling)牛(niu)(niu)胚胎(tai)(tai)中(zhong)的(de)胎(tai)(tai)血。此(ci)時(shi)胎(tai)(tai)牛(niu)(niu)各臟(zang)器(qi)正處生長分化階段,血中(zhong)含有豐富(fu)的(de)生長發育因子,非常適合各種細胞的(de)培養,一旦胚胎(tai)(tai)發育*這些(xie)因子自動消(xiao)失。因此(ci)8個(ge)(ge)月胎(tai)(tai)齡(ling)以上的(de)牛(niu)(niu)胚胎(tai)(tai),已接近(jin)足月,不能作為胎(tai)(tai)牛(niu)(niu)血清的(de)原料來使用(yong)。
新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡稱(cheng)NBCS):采自出生(sheng)一(yi)天~一(yi)周內的(de)新生(sheng)牛;
小牛血清(qing)(Calf Serum):采(cai)自出生10-30天的小牛;
成(cheng)牛血清(Adult Bovine Serum,簡稱ABS):采自成年牛收全血(xue)后分離得到血(xue)清。
所有血清出廠前均應經過(guo)嚴格質控,并附詳細《檢測報告》,
如(ru)pH值、滲(shen)透壓、內毒素、病毒檢(jian)測、促細(xi)胞生長能力、無(wu)菌等檢(jian)查。
其中,由于內毒素(su)直(zhi)接參與細(xi)胞凋(diao)亡(wang),對細(xi)胞培養(yang)結果影響較大,且不同批次的血清,內毒素(su)差(cha)異又(you)不易控制(zhi)。
內毒素(su)含(han)量(liang)越低的(de)血清(qing),級(ji)別(bie)就越高,以胎牛(niu)血清(qing)為例:
當血清中內毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級(ji)胎牛血清;
當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清(qing)為(wei)優級(ji)胎牛血清(qing);
當血(xue)清中內毒(du)素含量≥ 25EU/ml時,此血清為(wei)標準(zhun)級胎(tai)牛血清;
胎牛血清 在細胞培養中(zhong)的作用:
1. 提供對(dui)維持細胞指數生(sheng)長(chang)的(de)激素,基礎培養基中沒(mei)有或量很(hen)少的(de)營養物(wu),以及主要的(de)低分子營養物(wu)。
2. 提供(gong)結(jie)合蛋白,能識別維生素、脂類、金(jin)屬和其他激素等,能結(jie)合或(huo)調(diao)節它們(men)所結(jie)合的(de)物質活力。
3. 有(you)些(xie)情況下結合蛋白質能與有(you)毒金屬和熱原質結合,起到(dao)解(jie)毒作用(yong)。
4. 是細胞(bao)貼壁、鋪展(zhan)在塑料培養基(ji)質上所需(xu)因(yin)子來源。
5. 起酸堿度(du)緩沖液(ye)作用。
6. 提供蛋白酶抑(yi)制劑,使在細胞傳代(dai)時使剩余(yu)yi dan bai mei 失活,保護細胞不受傷(shang)害。
7. 參與細胞(bao)凍(dong)存(cun)。
在細胞培(pei)養(yang)中(zhong),胎牛(niu)血清加入(ru)基(ji)礎(chu)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)濃度大(da)多為5%~20%(最常見為(wei)10%)的。具體到不同(tong)試驗,應依據(ju)文獻報導,或(huo)(huo)細胞(bao)類型或(huo)(huo)基(ji)(ji)礎培養基(ji)(ji)的成分來確定最佳濃(nong)度。
胎牛血清產(chan)品(pin)描述:
胎牛(niu)血清(qing),是由(you)胎牛(niu)血漿去(qu)除纖維蛋白(bai)(bai)而(er)形成(cheng)的(de)一種很復雜的(de)混合物(wu)(wu),含有(you)各種血漿蛋白(bai)(bai)、多肽、脂肪(fang)、碳水(shui)化合物(wu)(wu)、生(sheng)長因(yin)子、激素、無機物(wu)(wu)等,其組成(cheng)成(cheng)份大部(bu)分(fen)已知,但還有(you)一部(bu)分(fen)尚不(bu)清(qing)楚,這些(xie)物(wu)(wu)質對(dui)促(cu)進細胞生(sheng)長或(huo)抑制生(sheng)長活性是達到生(sheng)理平衡的(de)。其中(zhong)不(bu)含細胞、纖維蛋白(bai)(bai)和ning xue yin zi 。
胎牛血清(qing)在(zai)細胞培養(yang)方面(mian)通常優于其他類(lei)型(xing)的血清(qing)。由于胎牛從未接觸過外界, 與新(xin)生(sheng)(sheng)牛(niu)(niu)和小牛(niu)(niu)血清相比,抗體(ti)含量(liang)明顯(xian)降低,故抗體(ti)與培養細胞發(fa)生(sheng)(sheng)交叉反(fan)應的(de)風險也較低,是理想(xiang)的(de)細胞生(sheng)(sheng)長補充劑。
所有胎(tai)牛血清(qing)均在當地政府獸醫部門的監督(du)下從注冊的出口(kou)屠場采集,符合國際動物協會要求。
為避免不同供體間的(de)個體差異,能夠更好保(bao)證實驗數(shu)據的(de)連續性和穩定,應使(shi)用(yong)同批次血清。
同批次血清:將(jiang)經過初步檢測合格的(de)很多供(gong)體(ti)胎牛的(de)粗血清,混合在一起,在低溫(wen)條件下,經七次加壓(ya)過濾,最后三次為0.1 µm無(wu)菌過濾處理,得到(dao)(dao)淺(qian)黃色,澄清(qing),稍粘稠液體。同一(yi)批(pi)次血清(qing)質量(liang)上基(ji)本(ben)無(wu)差(cha)異。不同廠(chang)家一(yi)個批(pi)次產量(liang)差(cha)異較大,從(cong)100升(sheng)到(dao)(dao)2000升(sheng)不等。批(pi)次大,更利于試驗的穩定(ding)和連續的可參照性。
所有血清出廠前,均經過嚴格質控,每個批次附有詳細(xi)完整的《檢(jian)測報告》,包括:品名(ming),貨號,批號,血源(yuan)地,生產日期,保質期,pH值、滲透壓、血紅蛋(dan)白(bai)、總(zong)蛋(dan)白(bai)、球蛋(dan)白(bai)、IgG、內毒(du)素(su)、無(wu)菌檢(jian)查(細(xi)菌、真菌、支原體)、病毒(du)檢(jian)查(如BVD、牛腺病毒(du)、細(xi)胞病變效應等)、促(cu)細(xi)胞生長能力(li)、細(xi)胞毒(du)性(xing)、BVD-1/2抗體檢(jian)查等。
胎(tai)牛血清儲存條件:
-20°C凍(dong)存。
胎牛血(xue)清解凍(dong)后,應按單次(ci)習慣(guan)用量(liang)分裝,分裝后的(de)血(xue)清仍-20°C凍存。
若置(zhi)于(yu)4°C的血清,應在一周內用完(wan)。
為保證(zheng)細胞培養的最佳效果,血(xue)清和培養基的配置,應遵循“現(xian)用(yong)(yong)現(xian)配"原則。配好(hao)的培養(yang)液(ye),應(ying)于(yu)一周內用(yong)(yong)完。
血清避免(mian)反復凍(dong)融(rong),避免(mian)在(zai)4°C或更高(gao)溫度儲存過久(jiu),否則會破壞血清(qing)中有效活性(xing)成分(fen),影響血清(qing)品質。
胎牛血清是否(fou)要熱(re)滅活(huo):
shouxian胎牛血清不推(tui)薦(jian)熱滅活。
熱滅活一般(ban)是指在做免疫相關的(de)試驗(yan)中,通(tong)過(guo)加熱滅活掉血(xue)清中的(de)補體(ti),以避(bi)免對免疫試驗(yan)的(de)影響。
在(zai)胎(tai)牛血(xue)清中(zhong),由于胎(tai)齡原因,尚未形成完(wan)整的(de)補體系統,因此,胎(tai)牛血(xue)清不(bu)會真正(zheng)干預免疫(yi)試驗。故不(bu)需滅(mie)活。
并且(qie),熱滅活反而(er)可能導(dao)致胎(tai)牛血清中部分重(zhong)要的(de)生(sheng)長因子的(de)活性(xing)衰減,進(jin)而(er)影響細(xi)胞培養效果。
若針對某(mou)些特殊試驗,對于(yu)胎(tai)牛血(xue)清一定要(yao)做熱(re)滅活,國際上推薦熱(re)滅活的方法(fa):40℃水浴,20min。
胎牛血清融化(hua)方法(fa):
血清融化 專業方法(fa):
目(mu)的;更好保留血清中活性(xing)成分,使細胞培養更穩(wen)定。
推(tui)薦國際血清(qing)廠家 專(zhuan)業融(rong)化方法(此方法國際通用,適用于所(suo)有種類的血清):
操(cao)作 | 溫度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
第一步 | 室溫 | 35 min | 90 min | 100 min |
或(huo)15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
第二步(bu) | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
第三步(bu) | 37℃水浴(yu) | 20 min | 35 min | 45 min |
注意(yi):
?在(zai)水(shui)浴過(guo)程中,血(xue)清的平(ping)面要(yao)沉浸在(zai)水(shui)中。在(zai)融化(hua)過(guo)程中要(yao)慢(man)慢(man)搖動瓶身,使(shi)血(xue)清混勻,但搖動中盡量(liang)不要(yao)產(chan)生泡(pao)沫(mo)!
胎牛血(xue)清 使用說明
血清(qing)從-20℃取出后(hou),融化(hua),按推薦(jian)體積加入到基(ji)礎(chu)培養(yang)基(ji)中(zhong),混勻,制(zhi)備成(cheng)新鮮培養(yang)基(ji)。(整個操作需在無(wu)菌超凈臺(tai)中(zhong)進行,注意無(wu)菌操作。)配置好的培養(yang)基(ji)推薦(jian)在4℃保存,應在1周(zhou)內用完。
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