產品(pin)名稱：猴抗(kang)肝(gan)細胞膜抗(kang)體(ti)（LMA）ELISA 試劑盒

規格：48T/96T

供應商：上海慧穎生物科技有限公司

產品特點：純進口試劑，重復性(xing)好，特異(yi)性(xing)強，性(xing)價(jia)比高，線性(xing)好；操作簡單(dan)，精確度高；售(shou)前(qian)售(shou)后完善，隨時來實驗室現場觀看(kan)，訂試劑盒免(mian)費代(dai)測。

試(shi)(shi)劑(ji)(ji)盒組成及(ji)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)配制 1. 酶聯板：一(yi)塊（96孔） 2. 標準品（凍(dong)干品）：2瓶，每(mei)瓶臨用(yong)前以樣品(pin)稀釋(shi)液稀釋(shi)至(zhi)1ml，蓋好后靜置(zhi)10分(fen)鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為(wei)1,600 pg/ml，將其(qi)稀釋(shi)為400 pg/ml后，再做系(xi)列倍比(bi)稀釋(shi)(shi)（注：不(bu)要(yao)直接(jie)在(zai)板中(zhong)進(jin)行倍比(bi)稀釋(shi)(shi)），分別稀釋(shi)(shi)成400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，樣品(pin)稀(xi)釋液直接作為標(biao)準濃度0 pg/ml，臨(lin)用前15分鐘內配(pei)制。如配(pei)制200 pg/ml標準品：取(qu)0.5ml （不(bu)要少于0.5ml ） 400 pg/ml的上述標(biao)準品加(jia)入含(han)有0.5ml樣品稀(xi)釋(shi)液的Eppendorf管中，混(hun)勻即可，其余濃度以此類推。3. 樣(yang)品稀釋液：1×20ml。4. 檢測稀釋液A：1×10ml。5. 檢測稀釋(shi)液B：1×10ml。6. 檢測溶(rong)液(ye)A：1×120μl（1:100）臨用前以檢測稀釋液(ye)A 1:100稀釋(shi)(shi)，稀釋(shi)(shi)前(qian)根(gen)據預先(xian)計算好的每次實驗所需的總量配制（100μl/孔），實際配制(zhi)時應多配制(zhi)0.1-0.2ml。如10μl檢(jian)測溶(rong)液A加990μl檢測稀(xi)釋(shi)液A的比例(li)配制(zhi)，輕輕混勻，在使用(yong)前一小時內配制(zhi)。7. 檢測溶液B：1×120μl/瓶（1:100）臨(lin)用前(qian)以檢測稀釋(shi)液B 1:100稀釋。稀釋方法(fa)同檢測溶(rong)液A。8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 濃洗(xi)滌液：1×30ml/瓶，使用時(shi)每瓶用蒸餾水(shui)稀釋25倍。 10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5張12. 使(shi)用(yong)說明書：1份 自備(bei)物品 1. 酶標儀(yi)（建議參(can)考儀(yi)器(qi)使用說明(ming)提(ti)前預熱） 2. 微量加液器(qi)及吸頭，EP管(guan)3. 蒸餾水(shui)或去離子(zi)水(shui)，全新濾(lv)紙 標本的(de)采集及保存(cun) 1. 血(xue)清：全血(xue)標本請于室(shi)溫放(fang)置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心(xin)20分鐘，取上清即可(ke)檢測，或將標本放(fang)于-20℃或-80℃保(bao)存，但應(ying)避免反復凍融(rong)。2. 血漿：可用(yong)EDTA或肝素(su)作為抗(kang)凝劑，標本采集后30分鐘內于(yu)2 - 8° C 1000 x g離心(xin)15分鐘，或將標(biao)本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反(fan)復凍融。3. 其它生物(wu)標本：請1000 x g離心20分鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保(bao)存，但應避免反復(fu)凍融。4. 樣本(ben)處理：血清或(huo)血漿標(biao)本(ben)推薦稀(xi)釋5,000倍。注：以(yi)上標本(ben)置4℃保存應小于(yu)1周，-20℃或-80℃均(jun)應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標(biao)本(ben)溶血會(hui)影響zui后檢測結果，因此溶血標(biao)本(ben)不宜進行此項(xiang)檢測。 操作步驟(zou)實驗開始前，各試(shi)(shi)劑(ji)均應平衡至室溫（試(shi)(shi)劑(ji)不(bu)能直接在37℃溶解）；試劑(ji)(ji)或(huo)樣(yang)品稀釋時(shi)，均(jun)需混(hun)勻，混(hun)勻時(shi)盡量避(bi)免起(qi)泡。實驗前(qian)應(ying)預測樣(yang)品含量，如樣(yang)品濃度過高時(shi)，應(ying)對樣(yang)品進行稀釋，以使稀釋后(hou)的樣(yang)品符(fu)合試劑(ji)(ji)盒的檢測范圍，計(ji)算時(shi)再乘以相應(ying)的稀釋倍數。1. 加(jia)樣：分別(bie)設空白孔(kong)(kong)、標準孔(kong)(kong)、待測樣品孔(kong)(kong)。空白孔(kong)(kong)加(jia)樣品稀釋液(ye)100μl，余孔(kong)分別加標準(zhun)品或(huo)待測(ce)樣品100μl，注(zhu)意不要有(you)氣(qi)泡，加(jia)(jia)(jia)樣將樣品加(jia)(jia)(jia)于酶(mei)標(biao)板孔(kong)底(di)部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕輕晃動混勻，酶(mei)標(biao)板加(jia)(jia)(jia)上蓋或(huo)覆(fu)膜，37℃反應120分鐘。為(wei)保證實驗結果有(you)效(xiao)性，每(mei)次實驗請使用新(xin)的標準品溶液(ye)。2. 棄去液體，甩干，不(bu)用(yong)洗滌。每孔加檢測溶液A工(gong)作液 100μl（在使(shi)用前一小時內配制(zhi)），酶標板加上覆(fu)膜, 37℃反應60分鐘。3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nei)液體，甩(shuai)干，洗板3次(ci)，每次(ci)浸泡(pao)1-2分(fen)鐘(zhong)，大(da)約400μl/每孔(kong)，甩(shuai)干(gan)（也可(ke)輕拍將孔(kong)內液體拍干(gan)）。 4. 每孔加檢(jian)測溶液B工作(zuo)液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上(shang)覆膜37℃反應60分鐘。5. 溫育(yu)60分鐘后，棄去孔(kong)內(nei)液體，甩干，洗(xi)板5次(ci)，每次(ci)浸泡1-2分鐘(zhong)，350μl/每孔(kong)，甩(shuai)干（也可(ke)輕拍將(jiang)孔(kong)內液體拍干）。6. 依(yi)序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆(fu)膜37℃避(bi)光顯(xian)色（30分(fen)鐘內，此時(shi)肉眼(yan)可(ke)見標(biao)準品(pin)的前3-4孔(kong)有(you)明顯的梯(ti)度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終(zhong)止）。7. 依序(xu)每孔加終(zhong)止溶(rong)液50μl，終(zhong)止(zhi)(zhi)反應(ying)(ying)，此(ci)時藍色立轉黃(huang)色。終(zhong)止(zhi)(zhi)液的加(jia)入順(shun)序應(ying)(ying)盡(jin)量與底物液的加(jia)入順(shun)序相同。為了保證實(shi)驗結(jie)果的準確性，底物反應(ying)(ying)時間(jian)到后應(ying)(ying)盡(jin)快加(jia)入終(zhong)止(zhi)(zhi)液。8. 用酶聯儀在450nm波長依序(xu)測量各孔的(de)光密度（OD值）。 在加(jia)終止液(ye)后立即進行檢測。 注：1. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：所有試(shi)劑(ji)都必(bi)須在使用(yong)前達到室溫，使用(yong)后請(qing)立即按照說明書要求保存試(shi)劑(ji)。 實驗操作(zuo)中請(qing)使用一(yi)次(ci)性的吸頭，避免交叉污(wu)染(ran)。2. 加(jia)樣：加(jia)樣或加(jia)試劑時(shi)，請(qing)注意在吸(xi)取標本 / 標準(zhun)品，酶(mei)結合物(wu)或底(di)物(wu)時，*個孔與zui后一(yi)個孔加樣之間的(de)時間間隔如(ru)果太大，將(jiang)會導致不同的(de) “預孵育”時間(jian)(jian)，從而(er)明顯地影(ying)響到測量(liang)值(zhi)的準確性(xing)及重(zhong)復性(xing)。一次加樣(yang)時間(jian)(jian)（包括(kuo)標準品(pin)及所有樣(yang)品(pin)）控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用(yong)多道(dao)移液器加樣。3. 孵育：為防止樣品蒸發(fa)，試驗時將反應(ying)板(ban)(ban)放于(yu)鋪有濕布的(de)密閉盒內(nei)，酶(mei)標板(ban)(ban)加上(shang)蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fa)；洗板(ban)(ban)后應(ying)盡快進行下(xia)步操作(zuo)，任何時侯都應(ying)避免酶(mei)標板(ban)(ban)處(chu)于(yu)干燥(zao)狀(zhuang)態;同時應嚴格遵守(shou)給定的孵育時間和溫(wen)度。4. 洗(xi)滌：洗(xi)滌過程中反應(ying)孔(kong)中殘留的(de)洗(xi)滌液應(ying)在濾紙(zhi)上充分拍干，勿將濾紙(zhi)直接放(fang)入(ru)反應(ying)孔(kong)中吸水(shui)，同時(shi)要(yao)消(xiao)除板底殘留的(de)液體(ti)(ti)和手指印(yin)，避(bi)免影響(xiang)zui后的(de)酶標(biao)儀(yi)讀數。5. 試劑配制：Detection A及Detection B在(zai)使用前請手甩幾下或(huo)少(shao)時離心處理，以使管(guan)壁(bi)或(huo)瓶蓋的液(ye)體(ti)(ti)沉積到管(guan)底。標準(zhun)品、檢測溶液(ye)A工作液、檢測溶液B工作液(ye)(ye)(ye)請(qing)依據所需的量(liang)配(pei)置使用(yong)，并使用(yong)相(xiang)應的稀釋(shi)液(ye)(ye)(ye)配(pei)制，不能混淆。請(qing)精確配(pei)置標準品及工作液(ye)(ye)(ye)，盡量(liang)不要微量(liang)配(pei)置（如吸取檢(jian)測溶液(ye)(ye)(ye)A時，一次不要小(xiao)于10μl），以避免由于(yu)不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用(yong)已稀釋過的標(biao)準品、檢測溶液A工作液或(huo)檢測溶液B工作液。6. 反應時間(jian)的控制：加(jia)入底(di)物(wu)后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如(ru)顏色較深，請(qing)提前(qian)加入終止液終止反應(ying)(ying)，避免反應(ying)(ying)過強(qiang)從而影響酶標儀光密度讀(du)數。7. 底(di)(di)物(wu)：底(di)(di)物(wu)請避光保存，在儲(chu)存和溫育(yu)時避免強光直(zhi)接照射。 建議檢測(ce)樣(yang)品時(shi)均(jun)設雙孔(kong)測(ce)定，以(yi)保證(zheng)檢測(ce)結果的準確性。 如(ru)標本中待測物(wu)質含量過高，請先稀(xi)釋(shi)后再測定，計算時請zui后乘以稀(xi)釋(shi)倍數(shu)。 洗板方法(fa)1. 手工洗板(ban)(ban)方法(fa)：吸去（不可觸(chu)及板(ban)(ban)壁）或甩掉酶(mei)標板(ban)(ban)內的液體；在(zai)實驗臺上鋪墊幾層(ceng)吸水紙(zhi)，酶(mei)標板(ban)(ban)朝下用力拍(pai)幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nei)，浸泡1-2分鐘，根據需要，重(zhong)復此過程數次。2. 自動(dong)洗板：如果有自動(dong)洗板機，應在熟練使用后再(zai)用到正(zheng)式(shi)實(shi)驗過(guo)程中。 計算 以(yi)標準物的濃度為縱(zong)坐標（對數坐標），OD值為橫坐(zuo)標(biao)（對(dui)(dui)數坐(zuo)標(biao)），在對(dui)(dui)數坐(zuo)標(biao)紙上繪出標(biao)準曲(qu)線。推薦使用專業制作曲(qu)線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據(ju)樣(yang)品的OD值由標(biao)準曲線查出相應的濃度(du)(du)，再乘以(yi)稀釋(shi)倍數；或(huo)用標(biao)準物(wu)的濃度(du)(du)與OD值(zhi)計算出標準曲(qu)線的(de)回歸方程(cheng)式，將樣品的(de)OD值代(dai)入方程(cheng)式，計算出樣品濃(nong)度(du)，再(zai)乘以(yi)稀釋倍數，即為樣品的實際(ji)濃(nong)度(du)。 代檢(jian)測(ce)(ce)(ce)服務購(gou)買本(ben)公司目錄任何一種檢(jian)測(ce)(ce)(ce)試劑盒，都可提供代檢(jian)測(ce)(ce)(ce)服務，您只需(xu)將需(xu)要(yao)檢(jian)測(ce)(ce)(ce)的動(dong)物（Human,Rat,Mouse,Rabbit,Monkey, Pig……）種類(lei)和檢測指(zhi)標(biao)（介素類(lei)、因子類(lei)）及標(biao)本數量（48T/96T）通知公司業(ye)務員即(ji)可(ke)。在(zai)接(jie)到客(ke)(ke)戶(hu)標(biao)本當日起，現(xian)貨產(chan)品一周(zhou)內將檢測報告交到客(ke)(ke)戶(hu)手中！ ◇ 注意事(shi)項(xiang)：收集(ji)標本(ben)前必須清楚要檢(jian)測的成份(fen)是(shi)否足夠穩定。對收集(ji)后(hou)當(dang)天(tian)進行檢(jian)測的標本(ben)，儲存在(zai)4℃備用，如有特殊(shu)原因需要周期(qi)收(shou)集標本，將(jiang)標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下(xia)保存。避免反復凍融。標本2-8℃可(ke)保存(cun)48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分(fen)激素類(lei)標(biao)本需添加抑(yi)肽酶(mei)。 ◇ 液(ye)體(ti)類標本(ben)標本(ben)必須(xu)為液(ye)體(ti)，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液(ye)、胸腹水、腦脊液(ye)、細胞培養(yang)上清、組(zu)織勻(yun)漿等。1ml的(de)全血可得到0.5ml的血(xue)清(qing)或血(xue)漿。每個標本量(liang)收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須(xu)向(xiang)銷售人(ren)員索要說明書。 ◇ 血清：室溫(wen)血液自然(ran)凝固(gu)10-20分鐘后，離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分）。收集上清(qing)。如(ru)有沉淀形成(cheng)，應再次離心。 ◇ 血(xue)漿：應(ying)根據試劑(ji)盒的要求選擇EDTA、檸檬酸(suan)鈉或肝素(su)作(zuo)為抗凝劑，加(jia)入10％（v/v）抗凝劑（0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或(huo)2.0%EDTA.Na2）混合10-20分鐘后，離心20分鐘(zhong)左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。如有(you)沉淀形成(cheng)，應再次離心。 ◇ 尿液(ye)(ye)、胸腹水、腦脊液(ye)(ye)：用(yong)無菌(jun)管收集。離(li)心20分(fen)鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收(shou)集上清。如有(you)沉淀形成，應再次(ci)離(li)心(xin)。 ◇ 細胞(bao)培養上清：檢測分泌性(xing)的成(cheng)份(fen)時，用無菌管收集(ji)。離心20分鐘左(zuo)右（2000-3000轉/分）。仔細收集上(shang)清。檢測細胞內(nei)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞(bao)懸液，細胞(bao)濃度達到100萬/ml左右。通過反(fan)復凍融(rong)，以使(shi)細(xi)胞破壞并放出細(xi)胞內成(cheng)份(fen)。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細(xi)收集上(shang)清。保存過(guo)程中如有(you)沉淀形成，應再次(ci)離心(xin)。 ◇ 組織標本：切(qie)割標本后，稱取(qu)重量(liang)。加入(ru)一定量(liang)的PBS，緩沖液中(zhong)可加入1μg/L蛋白酶抑制(zhi)劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽(tai)酶）。用手工或勻(yun)漿器(qi)將標本(ben)勻(yun)漿充分。離(li)心(xin)20分鐘(zhong)左右（2000-3000轉/分）。仔細(xi)收集上清置(zhi)于-20度或- 70度保存，如有(you)必要，可以(yi)將樣品濃縮(suo)干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用(yong)。 寄標本(ben)時需注明以下情況：　　1、標(biao)本編號；2、所測(ce)項(xiang)目；3、是(shi)否(fou)做復(fu)孔(kong)；3、；4、實驗(yan)后(hou)標本是否寄回。