雞溶(rong)菌酶LYS高品質ELISA試劑盒說明書(shu)

ELISA試劑盒目的：本(ben)試(shi)劑(ji)盒用(yong)于測(ce)定雞(ji)血清(qing)，血漿及相關液體樣本(ben)中(zhong)溶菌酶（LYS）的活性。

實驗原理(li)：

   本試劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗體夾心法測定標本中雞溶菌酶（LYS）水平。用純(chun)化的(de)雞溶菌酶（LYS）抗(kang)(kang)體(ti)包(bao)被(bei)微(wei)孔板(ban)，制成(cheng)固相抗(kang)(kang)體(ti)，往包(bao)被(bei)單(dan)抗(kang)(kang)的微(wei)孔中依次加入(ru)溶菌酶（LYS），再與HRP標記的LYS抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌(di)后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶(mei)的(de)催化下轉(zhuan)化成藍色，并在酸(suan)的(de)作用下轉(zhuan)化成zui終的(de)黃色。顏色的(de)深(shen)淺和樣品中的(de)溶菌酶（LYS）呈正相關。用酶標儀在(zai)450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線(xian)計算樣(yang)品中雞溶菌酶（LYS）濃度。

試劑盒組成：

樣本處(chu)理及要求(qiu)：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢(jian)測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟(zou)

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為360 U/ml，240 U/ml ，120 U/ml，60 U/ml，30 U/ml）。

2. 加樣(yang)：分別設(she)空(kong)白孔（空(kong)白對照孔不加樣(yang)品(pin)及酶標試劑，其余各步操(cao)作(zuo)相同）、待測(ce)樣(yang)品孔(kong)。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于(yu)酶標(biao)板孔底(di)部，盡量不觸及孔壁(bi)，輕輕晃動混(hun)勻(yun)。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育(yu)30分(fen)鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭(jie)掉封板膜，棄去液體(ti)，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯(xian)色(se)15分鐘. 

10. 終(zhong)止：每(mei)孔加終(zhong)止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測(ce)定(ding)：以空白(bai)空調零(ling)，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

注意事項：

1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會有結(jie)晶(jing)析出，稀釋時可在(zai)水浴中加溫助溶，洗滌時(shi)不影響結(jie)果。

3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以(yi)總(zong)稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜只限(xian)一次性使用(yong)，以避免交叉污染。

6． 底(di)物(wu)請避(bi)光保存(cun)。

7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8． 所(suo)有樣品，洗(xi)滌液和各種廢棄物(wu)都應按傳染(ran)物(wu)處理。

9． 本試劑不(bu)同批(pi)號組分(fen)不(bu)得混用。

10. 如與英文(wen)說(shuo)明書有異，以英文(wen)說(shuo)明書為準。

計(ji)算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，    

在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD      

值由標準(zhun)曲線查出(chu)相應的濃度(du)；再乘(cheng)以稀釋(shi)      

倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      

代入(ru)方(fang)程(cheng)式，計算出樣品濃(nong)度(du)，再(zai)乘以稀釋      

倍數，即為(wei)樣品的實際濃度。                  

試(shi)劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。

2.批內與批見應分別小于9%和15%

檢測范圍：                                  ;            

16 U/ml -450 U/ml                                ;       

保存條件及有(you)效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

注意：此雞溶菌酶LYS高品質ELISA試劑盒說明書 僅(jin)作參考，請以隨(sui)貨英(ying)文說明書(shu)為主(zhu)。