產品名(ming)稱：人細胞色素C上海CytC低價格ELISA試劑盒說明書

英文名稱：Human Cytochrome-C （CytC） ELISA Kit

保存(cun)條(tiao)件及有效(xiao)期(qi)：

1.試劑(ji)盒保存：；2-8℃。

2．有(you)效期：6個(ge)月

目的：本(ben)試(shi)劑(ji)盒用于測定人血(xue)清(qing)，細胞上清(qing)及(ji)相關液體(ti)樣本(ben)中細胞色(se)素C（CytC）的含量(liang)。

實驗(yan)原(yuan)理：

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人細胞色(se)素C（CytC）水(shui)平。用純化的人(ren)細胞色素C（CytC）抗(kang)體(ti)包被微孔(kong)板，制成固相(xiang)抗(kang)體(ti)，往包被單抗(kang)的微孔(kong)中依次加入細胞(bao)色素C（CytC），再與HRP標記的細胞色素(su)C（CytC）抗(kang)體(ti)結合，形(xing)成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶(mei)標抗(kang)體(ti)復合物(wu)，經(jing)過(guo)*洗滌后加底物(wu)TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶(mei)的(de)催化下轉化成(cheng)藍(lan)色(se)，并在(zai)酸的(de)作(zuo)用下轉化成(cheng)zui終的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣品中的(de)細胞色素C（CytC）呈(cheng)正相(xiang)關。用酶標(biao)儀在450nm波長下測定吸(xi)光度(du)（OD值），通過標(biao)準曲線計算樣品中(zhong)人細(xi)胞色素(su)C（CytC）濃度。

試劑(ji)盒組成：

樣本處(chu)理及要求：

1. 血(xue)清(qing)：室溫血(xue)液(ye)自然凝固10-20分鐘，離心(xin)20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔(zi)細收(shou)集(ji)上清(qing)，保存過程(cheng)中如出現沉淀，應再(zai)次離心(xin)。

2. 血漿：應(ying)根據標本(ben)的要求(qiu)選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混(hun)合10-20分鐘后(hou)，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保(bao)存過(guo)程中如有(you)沉淀形成，應(ying)該(gai)再次離心。

3. 尿液：用無(wu)菌管收(shou)(shou)集(ji)，離(li)心20分(fen)(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)(fen)）。仔(zi)細收(shou)(shou)集(ji)上(shang)清，保存過程中如(ru)有沉淀(dian)形成，應再(zai)次(ci)離(li)心。胸腹水、腦脊液參(can)照(zhao)實(shi)行。

4. 細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養上清：檢(jian)測分泌性的成份(fen)時，用無菌(jun)管收集。離(li)心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔細(xi)(xi)(xi)收集上清。檢(jian)測細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)內的成份(fen)時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋(shi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)濃(nong)度達到(dao)100萬/ml左右(you)。通過(guo)反(fan)復凍融，以使細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)破壞并(bing)放出(chu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)內成份(fen)。離(li)心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔細(xi)(xi)(xi)收集上清。保存過(guo)程中如有沉淀形成，應再次(ci)離(li)心(xin)。

5. 組(zu)織標(biao)(biao)(biao)本(ben)：切割標(biao)(biao)(biao)本(ben)后(hou)，稱取(qu)重量。加入(ru)一(yi)定量的PBS，PH7.4。用(yong)(yong)液(ye)氮迅速冷(leng)凍(dong)保存備用(yong)(yong)。標(biao)(biao)(biao)本(ben)融化后(hou)仍(reng)然保持2-8℃的溫度。加入(ru)一(yi)定量的PBS（PH7.4），用(yong)(yong)手工(gong)或勻漿(jiang)器將標(biao)(biao)(biao)本(ben)勻漿(jiang)充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上(shang)清。分裝后(hou)一(yi)份待檢(jian)測，其余(yu)冷(leng)凍(dong)備用(yong)(yong)。

6. 標本采(cai)集后盡早進(jin)行提取(qu)(qu)，提取(qu)(qu)按相關文獻進(jin)行，提取(qu)(qu)后應盡快進(jin)行實驗(yan)(yan)。若不能馬上進(jin)行試(shi)驗(yan)(yan)，可將(jiang)標本放(fang)于-20℃保存，但應避免反復凍融(rong).

7. 不(bu)能檢測含NaN3的樣品(pin)，因NaN3抑制(zhi)辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1. 標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)的稀(xi)(xi)釋與加(jia)(jia)(jia)樣：在(zai)酶標(biao)包被板(ban)上設標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)10孔(kong)(kong)，在(zai)*、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)二(er)孔(kong)(kong)中分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)100μl，然(ran)后(hou)在(zai)*、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)二(er)孔(kong)(kong)中加(jia)(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋液(ye)50μl，混(hun)(hun)(hun)勻(yun)(yun)(yun)；然(ran)后(hou)從*孔(kong)(kong)、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)二(er)孔(kong)(kong)中各(ge)取100μl分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)到第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)三孔(kong)(kong)和第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)，再在(zai)第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)三、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋液(ye)50μl，混(hun)(hun)(hun)勻(yun)(yun)(yun)；然(ran)后(hou)在(zai)第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)三孔(kong)(kong)和第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)四孔(kong)(kong)中先(xian)各(ge)取50μl棄(qi)掉(diao)，再各(ge)取50μl分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)到第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)六孔(kong)(kong)中，再在(zai)第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)六孔(kong)(kong)中分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋液(ye)50ul，混(hun)(hun)(hun)勻(yun)(yun)(yun)；混(hun)(hun)(hun)勻(yun)(yun)(yun)后(hou)從第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)五、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)六孔(kong)(kong)中各(ge)取50μl分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)到第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)七(qi)、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)八(ba)孔(kong)(kong)中，再在(zai)第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)七(qi)、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)八(ba)孔(kong)(kong)中分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋液(ye)50μl，混(hun)(hun)(hun)勻(yun)(yun)(yun)后(hou)從第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)七(qi)、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)八(ba)孔(kong)(kong)中分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)取50μl加(jia)(jia)(jia)到第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)九、第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)十(shi)(shi)(shi)孔(kong)(kong)中，再在(zai)第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)九第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)十(shi)(shi)(shi)孔(kong)(kong)分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋液(ye)50μl，混(hun)(hun)(hun)勻(yun)(yun)(yun)后(hou)從第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)九第(di)(di)(di)(di)(di)(di)(di)十(shi)(shi)(shi)孔(kong)(kong)中各(ge)取50μl棄(qi)掉(diao)。（稀(xi)(xi)釋后(hou)各(ge)孔(kong)(kong)加(jia)(jia)(jia)樣量(liang)都為(wei)50μl，濃(nong)度分(fen)(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)(bie)為(wei)150nmol/L，100nmol/L，50nmol/L，25nmol/L，12.5nmol/L）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑(ji)，其(qi)余(yu)各步操作(zuo)相同）、待(dai)測(ce)樣品(pin)孔。在酶標(biao)包被板(ban)上待(dai)測(ce)樣品(pin)孔中先加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋液(ye)40μl，然后再(zai)加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加于酶(mei)標板(ban)孔底部，盡量不觸(chu)及孔壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后(hou)置(zhi)37℃溫育30分鐘(zhong)。

4. 配液：將30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗(xi)滌液用蒸餾水30（48T的20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋(shi)后備(bei)用。

5. 洗滌(di)：小心(xin)揭(jie)掉封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液體(ti)，甩干(gan)，每孔加滿洗滌(di)液，靜置30秒后棄去(qu)，如此重復(fu)5次，拍干(gan)。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空(kong)白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操(cao)作同5。

9. 顯色：每孔先加(jia)入顯色劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

10. 終止：每(mei)孔(kong)加(jia)終止液50μl，終止反應(ying)（此(ci)時藍色立轉黃色）。

11. 測(ce)定：以空白空調零，450nm波長依序測(ce)量(liang)各孔的吸光(guang)度(du)（OD值）。 測(ce)定應(ying)在加(jia)終止(zhi)液(ye)后15分鐘以內(nei)進(jin)行(xing)。

注(zhu)意(yi)事(shi)項：

1． 試劑(ji)盒從冷藏環(huan)境中(zhong)(zhong)取出應(ying)在室溫平衡(heng)15-30分(fen)鐘后方可使用(yong)，酶標包被板開封(feng)后如未用(yong)完，板條應(ying)裝入(ru)密封(feng)袋中(zhong)(zhong)保(bao)存(cun)。

2． 濃(nong)洗滌液可能會有結晶析出，稀(xi)釋時可在水浴中(zhong)加溫助溶(rong)，洗滌時不(bu)影響結果。

3． 各步加(jia)(jia)樣均應使(shi)(shi)用加(jia)(jia)樣器，并經常校對其準確(que)性，以避免試驗誤差。一次加(jia)(jia)樣時間控制在(zai)5分鐘內，如標本數量多，推薦使(shi)(shi)用排(pai)槍加(jia)(jia)樣。

4． 請每次(ci)測(ce)定的同(tong)時做(zuo)標(biao)準曲線，做(zuo)復孔。如(ru)標(biao)本中待測(ce)物質含量過(guo)高（樣(yang)本OD值(zhi)大于標(biao)準品孔*孔的OD值(zhi)），請先用樣(yang)品稀(xi)釋液稀(xi)釋一定倍數（n倍）后再測(ce)定，計算時請zui后乘以總稀(xi)釋倍數（×n×5）。

5． 封板(ban)膜只限一次(ci)性使用(yong)，以避免(mian)交叉污染(ran)。

6． 底(di)物請避光保(bao)存。

7． 嚴格按照(zhao)說(shuo)明書的操(cao)作進行，試驗(yan)結果判定必須(xu)以酶標(biao)儀(yi)讀(du)數為準.

8． 所有樣品，洗滌液(ye)和各種廢棄(qi)物都應按(an)傳染物處理。

9． 本試(shi)劑不(bu)同批號(hao)組分不(bu)得(de)混用。

10. 如與英文說明(ming)書有(you)異，以英文說明(ming)書為(wei)準。

計算：

以標(biao)(biao)準物的濃度為(wei)(wei)橫坐標(biao)(biao)，OD值為(wei)(wei)縱坐標(biao)(biao)，    

在坐標(biao)紙上(shang)繪出標(biao)準曲(qu)線，根據(ju)樣品的OD      

值由標準曲線查出(chu)相(xiang)應(ying)的濃度；再乘(cheng)以稀釋    ;  

倍數；或用標(biao)準物的濃度與OD值(zhi)計算(suan)出標(biao)      

準(zhun)曲線的直線回歸(gui)方程式，將樣品的OD值      

代入方程式(shi)，計算(suan)出樣(yang)品濃度，再乘以稀(xi)釋(shi)      

倍數，即(ji)為樣品的實際(ji)濃度。                  

 試(shi)劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guan)系數R值為0.92以(yi)上。

2.批內與批間應分別小于9%和(he)15%

檢測范圍：                                              

10nmol/L -200nmol/L     

注意(yi)：此人細胞色素C上海CytC低價格ELISA試劑盒說明書中文說(shuo)(shuo)明書(shu)(shu)僅作參(can)考，請以(yi)隨貨英文說(shuo)(shuo)明書(shu)(shu)為主。